13
72 蛍光標識プローブ検出系 新製品:幅広いダイナミックレンジ 装置群 対象製品 High ROX GeneAce Probe qPCR Mix GeneAce Probe qPCR Mix plus ROX Tube Low ROX GeneAce Probe qPCR Mix Low ROX No ROX ファーストプロトコル対応 装置群 対象製品 High ROX FAST qPCR MasterMix Plus FAST qPCR MasterMix Plus dTTP Low ROX FAST qPCR MasterMix Plus Low ROX No ROX FAST qPCR MasterMix Plus No ROX 1 step RT-qPCR 対応 装置群 対象製品 High ROX Reverse Transcriptase qPCR Mastermix SYBR ® Green Ⅰ検出系 新製品:高い特異性 装置群 対象製品 High ROX GeneAce SYBR ® qPCR Mix α Low ROX GeneAce SYBR ® qPCR Mix α Low ROX No ROX GeneAce SYBR ® qPCR Mix α No ROX 試薬視認性向上(Blue Dye 添加試薬) 装置群 対象製品 High ROX MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR ® Assay Low ROX MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR ® Assay Low ROX 装置群 対応機種 High ROX ABI GeneAmp ® 5700, ABI Prism ® 7000, ABI 7300, 7700, 7900, StepOne TM /StepOnePlus TM , Mastercycler ® ep realplex Low ROX ABI 7500, Mx3000P, 3005, 4000 No ROX LightCycler ® 480, RotorGene Q, 6000, 2000, 3000, Thermal Cycler Dice ® , Smartcycler ® , CFX96, iCycler iQ ® , iQ5, MyiQ ® , DNA Engine Opticon ® 1 and 2, Chromo 4, Mini Opticon ® , Quantica ® リアルタイム PCR 装置に対応した製品を選択! 装置には、反応系に含まれる ROX 濃度で蛍光シグナルの補正を行う機種があります。 ROX 補正を必要とする装置の場合、あらかじめ最適化された濃度で ROX がプレミックスされている試薬を使用すると便利で す。また、No ROX タイプの試薬でも所定の濃度で ROX を添加することで使用できます。

リアルタイムPCR装置に対応した製品を選択! · MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR ... MyiQ ®, DNA Engine Opticon 1 and 2, Chromo 4, Mini Opticon ®, Quantica

  • Upload
    docong

  • View
    222

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

72

蛍光標識プローブ検出系新製品:幅広いダイナミックレンジ装置群 対象製品HighROX

GeneAce Probe qPCR Mix

GeneAce Probe qPCR Mix plus ROX TubeLowROX

GeneAce Probe qPCR Mix Low ROX

NoROX

ファーストプロトコル対応装置群 対象製品HighROX

FAST qPCR MasterMix PlusFAST qPCR MasterMix Plus dTTP

LowROX

FAST qPCR MasterMix Plus Low ROX

NoROX

FAST qPCR MasterMix Plus No ROX

1 step RT-qPCR対応装置群 対象製品HighROX

Reverse Transcriptase qPCR Mastermix

SYBR®Green Ⅰ検出系新製品:高い特異性装置群 対象製品HighROX

GeneAce SYBR® qPCR Mix α

LowROX

GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX

NoROX

GeneAce SYBR® qPCR Mix α No ROX

試薬視認性向上(Blue Dye 添加試薬)装置群 対象製品HighROX

MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR® Assay

LowROX

MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR® Assay Low ROX

装置群 対応機種HighROX

ABI GeneAmp® 5700, ABI Prism® 7000, ABI 7300, 7700, 7900, StepOneTM/StepOnePlusTM, Mastercycler® ep realplex

LowROX

ABI 7500, Mx3000P, 3005, 4000

NoROX

LightCycler® 480, RotorGene Q, 6000, 2000, 3000, Thermal Cycler Dice®, Smartcycler®, CFX96, iCycler iQ®, iQ5, MyiQ®, DNA Engine Opticon® 1 and 2, Chromo 4, Mini Opticon®, Quantica®

リアルタイムPCR装置に対応した製品を選択! 装置には、反応系に含まれるROX濃度で蛍光シグナルの補正を行う機種があります。 ROX補正を必要とする装置の場合、あらかじめ最適化された濃度でROXがプレミックスされている試薬を使用すると便利です。また、No ROXタイプの試薬でも所定の濃度でROXを添加することで使用できます。

03_2013_P072.indd 7203_2013_P072.indd 72 13.2.12 1:43:52 PM13.2.12 1:43:52 PM

73

 マークのついているものは、(株)ニッポンジーン関連製品です。それ以外は和光純薬工業(株)の製品あるいは取り扱い製品です。

定量PCR

NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE1.Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,804,375, 5,538,848, 5,723,591, 5,876,930, 6,030,787 and 6,258,569. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product for the purchaser's own internal research. No right under any other patent claim and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further information on purchasing licenses may be obtained from the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

2.Use of this product is a passive reference method is covered by the following US patent: 5,928,907 (claim numbers 12-24, 27-28) and corresponding patent claims outside the US. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product in a passive reference method for the purchaser's own internal research. No right under any other patent claim and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

3.Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,994,056 and 6,171,785. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product for the purchaser's own internal research. No right under any other patent claim and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

4.This product is provided under an intellectual property license from Life Technologies Corporation. The purchase of this product conveys to the buyer the non-transferable right to use the purchased product and components of the product only in research conducted by the buyer (whether the buyer is an academic or for-profi t entity). The sale of this product is expressly conditioned on the buyer not using the product or its components for any Commercial Purposes. Commercial Purposes means any activity by a party to generate revenue, which may include, but is not limited to use of the product or its components: (i) in manufacturing; (ii) to provide a service, information, or data in return for payment; (iii) for therapeutic, diagnostic or prophylactic purposes; or (iv) for resale, regardless of whether they are resold for use in research. For information on purchasing a license to this product for purposes other than research, contact Life Technologies Corporation, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA or [email protected].

■スタンダード qPCR用試薬GeneAce Probe qPCR Mix シリーズ 75qPCR Mastermix 76qPCR Mastermix Plus 76qPCR Mastermix Plus Low ROX 76qPCR Mastermix Plus No ROX 77qPCR QuickGoldStar Mastermix Plus 77Reverse Transcriptase qPCR Mastermix 78GeneAce SYBR® qPCR Mix αシリーズ 79MESA GREEN qPCR SYBR® Assay シリーズ 80MESA BLUE qPCR SYBR®Assay シリーズ 80

■ファストプロトコール対応 qPCR用試薬FAST qPCR MasterMix シリーズ 81

UNG 82ROX Passive Reference 82RTmate 83Complete RNAシリーズ 84

03定量PCR

03_2013_P073-084.indd 7303_2013_P073-084.indd 73 13.2.12 1:44:08 PM13.2.12 1:44:08 PM

74

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

定量PCR用試薬

PCR 用または RT-PCR 用として、様々なサーマルサイクラーや検出系(蛍光標識プローブ、SYBR®Green Ⅰ)に最適化された試薬がラインアップされています。したがって、多数のラインアップから使用環境に最適な試薬を選択することができ、広範囲の鋳型濃度に対して正確な分析を行うことができます。

製品一覧

対応機種: ABI GeneAmp®5700, ABI Prism®7000, 7300, 7700, 7900HT, MasterCycler®ep realplex, StepOne plus

PCR

蛍光標識プローブ

GeneAce Probe qPCR MixFAST qPCR MasterMix PlusFAST qPCR MasterMix Plus dTTPqPCR QuickGoldstar Mastermix PlusqPCR Mastermix PlusqPCR Mastermix

SYBR®Green ⅠGeneAce SYBR®qPCR Mix αMESA GREEN qPCR MasterMix Plus for SYBR®AssayMESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay

RT-PCR 蛍光標識プローブ Reverse Transcriptase qPCR Mastermix

対応機種: ABI 7500, Mx4000®, Mx3000P®, Mx3005P®

PCR

蛍光標識プローブGeneAce Probe qPCR Mix Low ROXFAST qPCR MasterMix Plus Low ROXqPCR Mastermix Plus Low ROX

SYBR®Green ⅠGeneAce SYBR®qPCR Mix α Low ROXMESA GREEN qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay Low ROXMESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay Low ROX

対応機種: MiniOpticon®, DNA Engine Opticon® 1 and 2, Chromo 4®, RotorGeneTM 2000/3000/6000, Quantica®, iCycler iQ®, iQ5, My iQ®, LC480, Thermal Cycler Dice®

PCR 蛍光標識プローブGeneAce Probe qPCR Mix plus ROX TubeFAST qPCR MasterMix Plus No ROXqPCR Mastermix Plus No ROX

SYBR®Green Ⅰ GeneAce SYBR®qPCR Mix α No ROX

< GeneAce シリーズ>・ニッポンジーン製品。低価格で高品質

< FAST Plus シリーズ>・Eurogentec 製品。qPCRプローブアッセイにおける高感度と高い再現性を実現、ファストプロトコール対応

<QuickGoldStar Mastermix >・ Eurogentec 製品。蛍光標識プローブ検出の中で最も高感度であり、特に標的配列のコピー数が少ない場合に高性能を発揮

<Mastermix Plus シリーズ>・Eurogentec 製品。高性能とコストパフォーマンスを両立したスタンダードタイプ

<MESA GREENシリーズ>・Eurogentec 製品。qPCR SYBR® アッセイにおける最高感度と高い再現性、特異性の向上を実現

<MESA BLUEシリーズ>・Eurogentec 製品。MESA GREEN シリーズに「青色素」を加えることで視認性・操作性の向上を実現

関連製品F 316-80211 UNG(Uracil-N-Glycosylase) …………………………………………………………………… 300 units 26,000F 315-80421 ROX Passive Reference………………………………………………………………………… 300μl 5,500

03定量PCR

03_2013_P073-084.indd 7403_2013_P073-084.indd 74 13.2.12 1:44:09 PM13.2.12 1:44:09 PM

75

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

NEW GeneAce Probe qPCR Mix シリーズ 本シリーズは、リアルタイム PCR用サーマルサイクラー(プレートタイプ)に対応したQuantitative PCR 用試薬です。蛍光標識プローブ検出系に最適化されたプレミックスタイプの試薬が小分け分注されており、操作性に優れています。ホットスタートPCR用耐熱性ポリメラーゼHot-Start Gene Taq NT と最適化されたバッファーにより、非特異的増幅を抑制し、広範囲の鋳型濃度に対し正確な分析ができます。

構成および形状GeneAce Probe qPCR Mix1. 2 × GeneAce qPCR Mix 1.5 ml× 5本 形状: Hot-Start Gene Taq NT, ROX Passive Reference,

Mg2+ (3 mM fi nal conc.), dNTPs, stabilizersGeneAce Probe qPCR Mix Low ROX1. 2 × GeneAce qPCR Mix Low ROX 1.5 ml× 5本 形状: Hot-Start Gene Taq NT, ROX Passive Reference,

Mg2+ (3 mM fi nal conc.), dNTPs, stabilizersGeneAce Probe qPCR Mix plus ROX Tube1. 2 × GeneAce qPCR Mix No ROX 1.5 ml× 5本 形状: Hot-Start Gene Taq NT, Mg2+ (3 mM fi nal conc.), dNTPs, stabilizers2. 50 × ROX Passive Reference 0.3 ml× 1本

使 用 例 GMダイズ(RRS)プラスミド希釈系列における増幅       GeneAce Probe qPCR Mix Low ROXを用いて、GMダイズ(RRS)プラスミドの希釈系列(250 k, 20 k,

1.5 k, 125, 20 copies)を鋳型としてリアルタイムPCRを行った。(装置:ABI 7500 fast)

PCR 条件2 × GeneAce qPCR Mix Low ROX 12.5 µlRRSプライマー(25 µmol/l each) 0.5 µl10 µmol/l RRS-Taq プローブ 0.5 µlプラスミドDNA(250 k, 20 k, 1.5 k, 125, 20 copies) 2.5 µld.d.H2O up to 25.0 µl

PCRサイクル95℃ 10 分間*

95℃ 30 秒間 45 サイクル59℃ 1 分間

本品のライセンス情報は、p.73〔1〕〔2〕をご参照下さい。

備   考 ・ 本品は、蛍光標識プローブとしてMGB(Minor Groove Binder)構造を有する TaqMan® MGB プローブのご使用には適しておりません。

      ・ファストプロトコール非対応です。      ・Uracil-N-Glycosylase によるキャリーオーバー処理はできません。

GeneAce Probe qPCR Mix311-07621 60 反応用 12,000317-07623 300 反応用 36,000GeneAce Probe qPCR Mix Low ROX318-07631 60 反応用 12,000314-07633 300 反応用 36,000GeneAce Probe qPCR Mix plus ROX Tube315-07641 60 反応用 12,000311-07643 300 反応用 36,000

特  長

1. 低価格で高品質。2. 蛍光標識プローブ用に最適化。3. 幅広いダイナミックレンジと定量精度を実現。

Del

ta R

n

Cycle Number1

0.0001

0.001

0.01

0.1

1

10

5 10 15 20 25 30 35 40 45

Ct

Log C01.5

23

25

27

29

31

33

35

2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0

F

* 95℃、10分間の熱処理によって酵素の活性化処理を行います。

03定量PCR

03_2013_P073-084.indd 7503_2013_P073-084.indd 75 13.2.12 1:44:09 PM13.2.12 1:44:09 PM

76

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

qPCR Mastermix 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

qPCR Mastermix はヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応した Quantitative PCR 用試薬です。Quantitative PCR および 2 step Quantitative RT-PCR に使用することができます。

構成および形状

  1. 2×Reaction Buff er 1.5 ml× 5本   形状: HOTGoldstar DNA Polymerase,       ROX passive reference, MgCl2(5 mmol/l fi nal conc.),       Uracil-N-Glycosylase, dNTP(including dUTP), stabilizers

  2. MgCl2 Solution 1.5 ml× 2本

314-80011 300 反応用 63,000

特  長

1. ホットスタートPCR 用酵素 HOTGoldstar DNA Polymerase の採用で、特異性の高いPCRが可能。

2. 操作性に優れたプレミックスタイプの試薬が小分け分注済。

qPCR Mastermix Plus 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

qPCR Mastermix Plusは、ヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応したQuantitative PCR 用試薬です。Quantitative PCR および 2 step Quantitative RT-PCR に使用することができます。

構成および形状

  1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本   形状: HOTGoldstar DNA Polymerase,       ROX passive reference, MgCl2(5 mmol/l fi nal conc.),       Uracil-N-Glycosylase, dNTP(including dUTP), stabilizers

  2. MgCl2 Solution 1.5 ml×1本

特  長

1. プレミックスタイプの試薬が1ボトルに分注。一度に大量の実験を行う場合に有効な仕様。

2. ホットスタートPCR用酵素HOTGoldstar DNA Polymerase の採用で、特異性の高いPCRが可能。

312-80291 300 反応用 63,000

  qPCR Mastermix Plus Low ROX 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

qPCR Mastermix Plus Low ROXはヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応した1ボトルタイプのQuantitative PCR 用試薬です。

構成および形状

  1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本   形状 : HOTGoldstar DNA Polymerase,       ROX passive reference, MgCl2(5 mmol/l fi nal conc.),       dNTP(including dUTP), stabilizers

  2. MgCl2 Solution 1.5 ml×1本

特  長

1. プレミックスタイプの試薬を 1ボトルに分注。一度に大量の実験を行う場合に有効な仕様。

2. ホットスタートPCR用酵素HOTGoldstar DNA Polymerase の採用で、特異性の高いPCRが可能。

3. ABI 7500 で最適に使用可能。4. Stratagene社のMxシリーズでも使用可能。

312-80431 300 反応用 63,000

03定量PCR

F

F

F

03_2013_P073-084.indd 7603_2013_P073-084.indd 76 13.2.12 1:44:09 PM13.2.12 1:44:09 PM

77

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

qPCR Mastermix Plus No ROX 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

qPCR Mastermix Plus No ROXは、ROX passive reference を含んでいない製品で、ヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応したQuantitative PCR 用試薬です。Quantitative PCR および2step Quantitative RT-PCR に使用することができます。

構成および形状

  1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本   形状: HOTGoldstar DNA Polymerase,        MgCl2(5 mmol/l final conc.), Uracil-N-Glycosylase,

dNTP(including dUTP), stabilizers

  2. MgCl2 Solution 1.5 ml× 1本

関連製品F 315-80421 ROX Passive Reference………………………………………………………………………… 300μl 5,500

317-80861 300 反応用 63,000

特  長

1. ホットスタートPCR用酵素HOTGoldstar

DNA Polymerase を採用し、特異性の高いPCRが可能。

2. ROX passive reference を含んでいないので、機種に合わせた ROX passive re-ference 濃度の最適化が可能。

qPCR QuickGoldStar Mastermix Plus 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

qPCR QuickGoldStar Mastermix Plus はヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応した Quantitative PCR 用試薬です。Quantitative PCR および2step Quantitative RT-PCR に使用することができます。ヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応した蛍光標識プローブ用試薬の中で最も高感度で、特に標的配列のコピー数が少ない場合に高性能を発揮します。

構成および形状

  1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本   形状: QuickGoldStar DNA Polymerase,

ROX passive reference, MgCl2(5 mmol/l fi nal conc.), Uracil-N-Glycosylase, dNTP(including dUTP), stabilizers

  2. MgCl2 Solution 1.5 ml×1本

使 用 例

特  長

1. 高感度タイプの試薬であり、特に低コピー域での検出で高性能を発揮(使用例を参照)。

2. ホットスタートPCR 用酵素 QuickGoldStar DNA Polymerase を採用しており、特異性の高いPCRが可能。

Concentration(pg)0.1 1 10 100 1000 10000 100000

Ct

qPCR QuickGoldStar Mastermix PlusqPCR Mastermix Plus

マウス Insulin-Iike growth factor-Ⅰ( IGF-Ⅰ)遺伝子の検出

4038363432302826242220

319-80321 300 反応用 81,000

03定量PCR

F

F

03_2013_P073-084.indd 7703_2013_P073-084.indd 77 13.2.12 1:44:09 PM13.2.12 1:44:09 PM

78

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

Reverse Transcriptase qPCR Mastermix 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

Reverse Transcriptase qPCR Mastermix は、ヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応した1step Quantitative RT-PCR 用試薬です。

構成および形状

  1. EuroScript Reverse Transcriptase(MMLV) 75μl×1本   形状: Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase

(50 units/μl))3,750 units, RNase Inhibitor(20 units/μl)1,500 units

  2. 2×Reaction Buff er 1.5 ml× 5本   形状: HOTGoldstar DNA Polymerase,        dNTP(including dUTP), MgCl2(5 mmol/l fi nal conc.),

ROX passive reference, stabilisers

  3. MgCl2 Solution 1.5 ml× 1本

使 用 例  ISOGENで抽出したマウス(C57BL/6)肝臓 Total RNA 中の Insulin-like growth factor Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNAを検出した(1step quantitative RT-PCR)。

      Cycle program:48℃ 30 min. → 95℃ 10 min. →(95℃ 15 sec. → 60℃ 30 sec. → 72℃ 30 sec.)× 40      Detection:蛍光標識プローブ      Amplifi cation sequence:マウス IGF-Ⅰ mRNA      Reaction volume:50μl

特  長

1. 操作性に優れたプレミックスタイプのMastermix が蛍光標識プロープでの 1step Quantitative RT-PCR に対応。

313-80221 300 反応用 113,000

03定量PCR

-80

03_2013_P073-084.indd 7803_2013_P073-084.indd 78 13.2.12 1:44:09 PM13.2.12 1:44:09 PM

79

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

NEW GeneAce SYBR® qPCR Mix αシリーズ 本シリーズは、リアルタイム PCR用サーマルサイクラー(プレートタイプ)に対応したQuantitative PCR 用試薬です。SYBR® Green Ⅰ検出系に最適化されたプレミックスタイプの試薬が小分け分注されており、操作性に優れています。ホットスタートPCR用耐熱性ポリメラーゼHot-Start Gene Taq NT と最適化されたバッファーにより、非特異的増幅を抑制し、広範囲の鋳型濃度に対し正確な分析ができます。

構成および形状GeneAce SYBR® qPCR Mix α1. 2 × GeneAce SYBR® qPCR Mix α 1.5 ml× 5本 形状: Hot-Start Gene Taq NT, ROX Passive Reference, Mg2+

(2 mM fi nal conc.), dNTPs, SYBR® Green Ⅰ, stabilizersGeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX1. 2 × GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 1.5 ml× 5本 形状: Hot-Start Gene Taq NT, ROX Passive Reference, Mg2+

(2 mM fi nal conc.), dNTPs, SYBR® Green Ⅰ, stabilizersGeneAce SYBR® qPCR Mix α No ROX1. 2 × GeneAce SYBR® qPCR Mix α No ROX 1.5 ml× 5本 形状: Hot-Start Gene Taq NT, Mg2+ (2 mM fi nal conc.), dNTPs, SYBR® Green Ⅰ, stabilizers

使 用 例 プラスミド pUC19 DNA希釈系列における増幅       GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROXを用いて、プラスミド pUC19 DNA(1 fg, 10 fg, 100 fg)を鋳

型として、推奨PCRサイクル条件[95℃ 10 分→(95℃ 30 秒 , 60℃ 1 分)× 45 サイクル]にて増幅鎖長 120 bp のリアルタイムPCRを行った後、融解曲線を描いて非特異的産物がないことを確認した。(装置:ABI 7500 fast)

PCR 条件2 × GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 12.5 µlプライマー(25 µmol/l each) 0.5 µlプラスミド pUC19 DNA(1 fg, 10 fg, 100 fg) 2.5 µld.d.H2O up to 25.0 µl

PCRサイクル95℃ 10 分間*

95℃ 30 秒間 45 サイクル60℃ 60 秒間   ↓融解曲線解析

GeneAce SYBR® qPCR Mix α313-07681 60 反応用 12,000319-07683 300 反応用 36,000GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX310-07691 60 反応用 12,000316-07693 300 反応用 36,000GeneAce SYBR® qPCR Mix α No ROX313-07701 60 反応用 12,000319-07703 300 反応用 36,000

特  長

1. 低価格で高品質。2. SYBR® Green Ⅰによる高感度な検出。3. プライマーダイマーを抑制し、特異性の高いPCRを実現。

Del

ta R

n

Cycle Number1

0.0001

0.001

0.01

0.1

1

10

5 10 15 20 25 30 35 40 45

Der

ivat

ive

Temperature(℃)60

0.00

0.05

0.15

0.10

0.20

0.25

0.35

0.30

0.40

65 70 75 80 85 90 95

* 95℃、10分間の熱処理によって酵素の活性化処理を行います。

本品のライセンス情報は、p.73〔2〕〔3〕〔4〕をご参照下さい。

備   考 ・ファストプロトコール非対応です。      ・Uracil-N-Glycosylase によるキャリーオーバー処理はできません。

03定量PCR

F

03_2013_P073-084.indd 7903_2013_P073-084.indd 79 13.2.12 1:44:10 PM13.2.12 1:44:10 PM

80

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

MESA GREEN qPCR SYBR® Assay シリーズ 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

MESA GREEN qPCR SYBR®Assay シリーズは、ヒートブロック方式のサーマルサイクラーに対応したQuantitative PCR 用試薬です。Quantitative PCR および 2 step Quantitative RT-PCR に使用することができます。新規 PCR 酵素の採用および反応バッファーの最適化により、Eurogentec 社の qPCR SYBR®試薬の中で最高の感度性能を発揮します。

構成および形状  1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本    形状: dNTPs(including dUTP), Meteor Taq DNA Polymerase,

ROX Passive reference, MgCl2(4 mmol/l final conc.), SYBR®Green Ⅰ, stabilizer

  2. 50 mmol/l MgCl2 1.5 ml×1本

使 用 例  HeLa 細胞由来の cDNAを鋳型とした hGAPDH遺伝子の検出

MESA BLUE qPCR SYBR®Assay シリーズ 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

MESA BLUE qPCR SYBR®Assay シリーズは、qPCR の反応系、検出系に影響を与えないBlue Dye が添加されている全く新しいコンセプトの qPCR SYBR® 試薬です。試薬自身の視認性が向上しているため、PCR プレートの分注作業、分注後の確認作業効率が大幅に改善されます。また、MESA GREEN と同じ試薬系を採用しており、高感度、高再現性、高特異性の qPCRが可能です。

構成および形状   MESA GREEN と同じ構成であり、2× Reaction Buff er の形状に Blue Dye が含まれる。

0.110

15

20

25

30

35

40

1Initial Concentration (pg)

Ct

10 100 1000 10000

MESA GREEN

MESA GREEN qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay313-80601 300 反応用 73,500MESA GREEN qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay Low ROX310-80611 300 反応用 73,500

特  長

1. 新 PCR酵素「Meteor Taq」の採用と反応バッファーの最適化により、低コピーの標的鋳型も高感度に検出。

2. 既存製品に比べ特異性が向上し、非特異的な増幅を最小限に抑制。

3. 既存製品に比べ高い再現性を有し、広範囲の標的で一貫性のある結果を確保。

MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay313-80841 300 反応用 73,500MESA BLUE qPCR MasterMix Plus for SYBR®Assay Low ROX310-80851 300 反応用 73,500

特  長

1. Blue Dye の添加により試薬視認性が向上し、PCR プレートへの分注作業効率が大幅に向上。

2. MESA GREEN と同じ試薬系の採用により、高感度、高再現性、高特異性などの性能を維持。

3. MESA GREEN と同じ価格で提供。

03定量PCR

F

F

03_2013_P073-084.indd 8003_2013_P073-084.indd 80 13.2.12 1:44:10 PM13.2.12 1:44:10 PM

81

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

FAST qPCR MasterMixシリーズ 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.

輸入元 株式会社ニッポンジーン

FAST qPCR MasterMix シリーズは、リアルタイム定量 PCR用の全機種に対応したQuantitative PCR 用試薬です。また、ファストプロトコールにも対応しています。新規 PCR酵素の採用およびバッファーの最適化により、蛍光標識用プローブアッセイにおいて高感度と高再現性の qPCRが可能です。また、FAST qPCR MasterMix Plus dTTP には、Taq Polymeraseによる取り込み効率が低い dUTP が含まれていないため、最大限の感度を得られます。ただし、dUTP を含む他のキットのように、Uracil-N-Glycosylase によるキャリーオーバー処理はできません。

構成および形状FAST qPCR MasterMix Plus 1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本

形状: dNTPs(including dUTP), Meteor Taq DNA polymerase, MgCl2(4 mmol/l fi nal conc.), Uracil-N-glycosylase, ROX passive reference, stabilizers

 2. 50 mmol/l MgCl2 1.5 ml×1本 (ファストプロトコール対応機種:ABI 7900, StepOne™ / Plus, MasterCycler® ep realplex)

FAST qPCR MasterMix Plus dTTP 1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本

形状: dNTPs(no dUTP), Meteor Taq DNA polymerase, MgCl2(4 mmol/l fi nal conc.), ROX passive reference, stabilizers

 2. 50 mmol/l MgCl2 1.5 ml×1本 (ファストプロトコール対応機種:ABI 7900, StepOne™ / Plus, MasterCycler® ep realplex)

FAST qPCR MasterMix Plus Low ROX 1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本

形状: dNTPs(including dUTP), Meteor Taq DNA polymerase, MgCl2(4 mmol/l fi nal conc.), Uracil-N-glycosylase, ROX passive reference, stabilizers

 2. 50 mmol/l MgCl2 1.5 ml×1本 (ファストプロトコール対応機種:ABI 7500)

FAST qPCR MasterMix Plus No ROX 1. 2×Reaction Buff er 7.5 ml×1本

形状: dNTPs(including dUTP), Meteor Taq DNA polymerase, MgCl2(4 mmol/l fi nal conc.), Uracil-N-glycosylase, stabilizers

 2. 50 mmol/l MgCl2 1.5 ml×1本 (ファストプロトコール対応機種:LC480、Smartcycler, RotorGene 6000)

特  長

1. 新規 PCR酵素「Meteor Taq」の採用と反応バッファーの最適化により、低コピーの標的鋳型も高感度に検出。

2. リアルタイム定量 PCR装置の全機種に対応。

3. ファストプロトコールに対応。

FAST qPCR MasterMix Plus315-81021 600 反応用 63,000FAST qPCR MasterMix Plus dTTP316-81051 600 反応用 63,000FAST qPCR MasterMix Plus Low ROX312-81031 600 反応用 63,000FAST qPCR MasterMix Plus No ROX319-81041 600 反応用 63,000

03定量PCR

F

03_2013_P073-084.indd 8103_2013_P073-084.indd 81 13.2.12 1:44:10 PM13.2.12 1:44:10 PM

82

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

UNG(Uracil-N-Glycosylase) 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

UNG(Uracil-N-Glycosylase)はウラシルを含んだ一本鎖および二本鎖DNAを加水分解し、ウラシルを遊離させる酵素です。本品は、大腸菌のUNG遺伝子をクローニングし、大腸菌にて発現させ、分離精製したものです。本品には、10 倍濃度の反応バッファー(10 × Reaction Buff er)が添付されています。

活   性  1 unit/μl単位の定義  1 unit は、ウラシルを含んだ二本鎖DNAから1分間に 60 pmol のウラシルを遊離させる酵素活性とする。10 × Reaction Buff er 200 mmol/l Tris-HCl(pH 8.0), 10 mmol/l EDTA, 10 mmol/l DTT

ROX Passive Reference 製造元 EUROGENTEC Bel S.A.輸入元 株式会社ニッポンジーン

ROX Passive Reference は qPCR No ROXタイプの製品に添加して使用する蛍光色素です。サーマルサイクラーにMx4000®(Stratagene)、Mx3000P®、Mx3005P® (Stratagene)を使用する場合は、No ROXタイプの試薬に所定の濃度で本品を添加することで、ROX Passive Reference 濃度を最適化することができます。

316-80211 300 units 26,000

10×Buffer

315-80421 300 μl 5,500

03定量PCR

F

F

03_2013_P073-084.indd 8203_2013_P073-084.indd 82 13.2.12 1:44:10 PM13.2.12 1:44:10 PM

83

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

RTmate RT(逆転写)反応補助試薬 RTmate は、T7 RNAポリメラーゼで合成した 976 ヌクレオチドからなる RNAです。通常、RT反応や1ステップ RT-PCR では、鋳型として使用する RNA量が微量になると急激に反応効率が低下しますが、反応系に RTmate を添加することによって反応効率の低下を抑制することができます。

形   状  10 mmol/l Tris-HCl(pH 8.0), 1 mmol/l EDTA(pH 8.0)濃   度  50 ng/μl使用上の注意  RNase の混入には十分に注意して下さい。備   考  長期保存の場合は、-80℃で保存して下さい。本品に

使用している塩基配列はニッポンジーンホームページ(http://www.nippongene.com)で入手できる。

使 用 法  RT 反応や1ステップRT-PCRの反応系に、終濃度 5 ng/μlになるように添加する。使 用 例  RT 反応への添加      10× Reaction Buff er 1.0μl      25 mmol/l MgCl2 2.0μl      2.5 mmol/l dNTP 2.0μl      50μmol/l Oligo(dT) 0.5μl      RNase Inhibitor(20 units/μl) 0.2μl      Reverse transcriptase(50 units/μl) 0.25μl      Total RNA 1.0μl      RTmate 1.0μl      d.d.H2O(RNase free) 2.05μl      Total 10.0μl

      1. アガロースゲル電気泳動での効果確認        ISOGENで抽出したマウス(C57BL/6)肝臓 Total RNA について、1~ 10,000 pg の Total RNA を鋳型

としてβ-actin mRNAの RT-PCRを行い、最終増幅産物のアガロースゲル電気泳動を行うことでRTmate の効果を確認した。

      2. Quantitative PCRでの効果確認        1. と同じ Total RNA 中の Insulin-like growth factor-Ⅰ(IGF Ⅰ)を、2step Quantitative RT-PCRで検出し、

結果を比較することで fi rst step に添加したRTmate の効果を確認した。

特  長

1. RT-PCRの検出限界感度が上昇。2. RT-PCRの最終増幅産物が増加。3. RNA 量が微量な場合でも効率よく cDNAが合成可能。

4. Quantitative RT-PCRでは精度の高いRNA希釈系列検量線が作成可能。

311-05943 25 µl(25回用) 2,000315-05941 500 µl(500回用) 16,000

Lane 1: 鋳型RNA量    0 pgLane 2:  〃      1 pgLane 3:  〃      10 pgLane 4:  〃     100 pgLane 5:  〃     1,000 pgLane 6:  〃    10,000 pg

M:OneSTEP Ladder 50

M 1 2 3 4 5 6 M 1

RTmate 添加 RTmate なし

2 3 4 5 6 M

2.0

1.8

1.6

1.4

1.2

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0.0

0.20 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40

Cycle Number

Rn

pg01101001,00010,000

2.0

1.8

1.6

1.4

1.2

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0.0

0.20 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40

Cycle Number

Rn

pg01101001,00010,000

40

38

36

34

32

30

28

26

24

220.1 1 10 100 1,000 10,000 100,000

Concentration(pg)

Ct

RTmateなし

RTmate添加

RTmate なし RTmate 添加

03定量PCR

F

03_2013_P073-084.indd 8303_2013_P073-084.indd 83 13.2.12 1:44:10 PM13.2.12 1:44:10 PM

84

定量PCR

http://www.wako-chem.co.jp http://www.nippongene.com

Complete RNAシリーズ コントロールmRNA 本品は in vitro 転写反応により合成した均質な RNA です。5́

末端にはキャップ構造を持ち、3́ 末端には 50 塩基のアデニンからなるpoly(A)+配列を保持しています。Real-Time PCR 実験の絶対量コントロールやバリデーションコントロールを取るためのテンプレートとして最適です。本製品は高度に精製されており、DNA、タンパク質、ヌクレオチドの混入は検出されません。

濃   度 10 ng/µl形   状 DNase-Free, RNase-Free 水溶液備   考 凍結・融解の繰り返しを避けるため、小分け分注してか

らの保存をお奨めします。

Human-80 314-06631 Albumin mRNA, Human ………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 317-06861 Beta actin mRNA, Human ……………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 313-06841 GAPDH mRNA, Human ………………………………………………………………………… 10μl 32,000

Rat-80 314-06871 Beta actin mRNA, Rat ………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 310-07331 Cebpd mRNA, Rat ……………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 313-07321 Ctss mRNA, Rat ………………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 310-06851 GAPDH mRNA, Rat …………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 318-06911 Orm1 mRNA, Rat ………………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 316-07311 Lgals9 mRNA, Rat ……………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 311-06901 Mt1a mRNA, Rat ………………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 318-06891 Hsd17b2 mRNA, Rat …………………………………………………………………………… 10μl 32,000-80 311-06881 Hpx mRNA, Rat ………………………………………………………………………………… 10μl 32,000

注) 本製品は、経済産業省 /新エネルギー・産業技術総合開発機構(NEDO)委託研究「タンパク質機能解析プロジェクト」(H12-14)および「タンパク質機能解析・活用プロジェクト」(H15-17)の成果に基づき、独立行政法人 産業技術総合研究所・生物情報解析研究センター・発現頻度解析チームの全面的な協力のもとに開発されました。

10 µl 32,000

特  長

1. 5́ 末端はキャップ構造。2. 3́ 末端は 50 塩基の poly(A)+配列。3. 高度に精製された均質なRNA。4. 各種実験のコントロールRNAとして有効。

-80

03定量PCR

03_2013_P073-084.indd 8403_2013_P073-084.indd 84 13.2.12 1:44:10 PM13.2.12 1:44:10 PM