Penafisan Fitokimia (Autosaved) 2

8/10/2019 Penafisan Fitokimia (Autosaved) 2

1/68

Identifikasi dan Isolasi Daun Kecubung Page 1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia merupakan negara kepulauan yang terletak di zona

khatulistiwa (tropik) dan terkenal mempunyai kekayaan alam dengan

beranekaragam jenis tumbuhan, tetapi potensi ini belum seluruhnya

dimanfaatkan sebagai bahan industri khususnya tumbuhan berkasiat obat.

Masyarakat Indonesia secara turun-temurun telah memanfaatkan berbagai

jenis tumbuhan untuk bahan obat tradisional baik sebagai tindakan

pencegahan maupun pengobatan terhadap berbagai jenis penyakit.

Pemanfaatan tumbuhan obat tradisional akan terus berlangsung terutama

sebagai obat alternatif, hal ini terlihat pada masyarakat daerah yang sulit

dijangkau oleh fasilitas kesehatan modern.(Sulianti et al, 2005).

Penemuan berbagai senyawa obat baru dari bahan alam semakin

memperjelas peran penting metabolit sekunder tanaman sebagai sumber

bahan baku obat. Metabolit sekunder adalah senyawa hasil biogenesis dari

metabolit primer. Umumnya dihasilkan oleh tumbuhan tingkat tinggi, yang

bukan merupakan senyawa penentu kelangsungan hidup secara langsung,

tetapi lebih sebagai hasil mekanisme pertahanan diri organisma. Aktivitas

biologi tanaman dipengaruhi oleh jenis metabolit sekunder yang terkandung

didalamnya. Aktivitas biologi ditentukan pula oleh struktur kimia dari

senyawa. Unit struktur atau gugus molekul mempengaruhi aktivitas biologi

karena berkaitan dengan mekanisme kerja senyawa terhadap reseptor di

dalam tubuh (Lisdawati et al., 2007).

Salah satu pendekatan untuk penenlitian tumbuhan obat adalah

penapisan senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman. Cara ini

digunakan untuk mendeteksi senyawa tumbuhan berdasarkan golongannya.

Sebagai informasi awal dalam mengetahui senyawa kimia apa yang

mempunyai aktivitas biologi dari suatu tanaman.


2/68


Fitokimia atau kimia tumbuhan mempelajari aneka ragam senyawa

organik yang dibentuk dan ditimbun oleh tumbuhan, yaitu mengenai

struktur kimianya, biosintesisnya, penyebarannya secara ilmiah serta fungsi

biologinya. Senyawa kimia sebagai hasil metabolit sekunder atau metabolit

sekumder telah banyak digunakan sebagai zat warna, racun, aroma

makanan, obat-obatan dan sebagainya serta sangat banyak jenis tumbuh-

tumbuhan yang digunakan obat-obatan yang dikenal sebagai obat tradisional

sehingga diperlukan penelitian tentang penggunaan tumbuh-tumbuhan

berkhasiat dan mengetahui senyawa kimia yang berfungsi sebagai obat.

Senyawa-senyawa kimia yang merupakan hasil metabolisme sekunder pada

tumbuhan sangat beragam dan dapat diklasifikasikan dalam beberapa

golongan senyawa bahan alam yaitu terpenoid, steroid, kumarin, flavonoid

dan alkaloid.

Untuk mengetahui kandungan kimia yang berkhasiat obat pada

bahan alam, maka perlu dilakukan analisis kuantitatif/identifikasi terhadap

senyawa senyawa tersebut dengan uji pereaksi kimia dan Kromatografi

Lapis Tipis (KLT).

1.2 Prinsip percobaan

1. Pengujian golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada

tumbuhan segar berdasarkan kelarutannya dengan menggunakan pelarut

yang sesuai dengan kepolarannya kemudian diidentifikasi dengan

pereaksi warna yang spesifik untuk masing-masing senyawa.

2.

Pemisahan senyawa dari tanaman dengan ekstraksi metode dingin, yaitu

dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol.

3. Ekstraksi cair-cair yang didasarkan pada zat terlarut dengan

perbandingan tertentu antar dua pelarut yang tidak saling bercampur.

4. Berdasarkan pada perbedaan distribusi molekul-molekul komponen

diantara dua fase (fase gerak dan fase diam) yang kepolarannya berbeda.

5. Berdasarkan hokum Lambert Beer.


3/68


6.

Penentuan gugus fungsi dengan menembakkan sinar inframerah kearah

sampel.

1.3 Tujuan percobaan

1.

Mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada

Daun Kecubung (Datura metel L.).

2. Mengisolasi senyawa aktif dari daun kecubung.

3.

Melakukan penarikan senyawa metabolit sekunder berdasarkan

kepolaranya dengan cara ekstraksi cair-cair.4.

Mengetahui profil spot dan menganalisis senyawa yang terkandung

dalam ekstrak dengan menggunakan metode Kromatografi lapis Tipis

(KLT).

5.

Melakukan isolasi senyawa dengan menggunakan Kromatografi Lapis

Tipis Preparativ (KLTP).

6. Melihat kemurnian spot dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dua

dimensi

7. Mengetahui struktur kimia senyawa metabolit sekunder yang

terkandung dengan spektrofotemetri infra merah.

8.

Menentukan gugus fungsi yang dimiliki oleh daun kecubung.

9. Mengetahui cara penyarian piperin dari simplisia piperis nigri fructus

yang dilakukan dengan metode rekristalisasi dan mengetahui

kemurnian piperin hasil dari isolasi dengan metode KLT.


4/68


BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Deskripsi Tanaman Kecubung (Datura metel L.)

Kedudukan taksonomi tanaman kecubung menurut Tjitrosoepomo (1994):

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledoneae

Sub kelas : Sympetalae

Ordo : Solanales

Famili : Solanaceae

Genus :Datura

Spesies :Datura metel L.

Sinonim :Datura fastuosa, Linn. D. alba, Ness. D. fastuosa, Linn.

Var alba C.B.Clarke.Daturae folium, Hindu datura, Datura

sauveolens, Datura stramonium, Hyoscyamus niger, Black

Henbane, Devils Trumpet, Metel, Downy Thorn-Apple.

Nama Lokal : Kecubung (Jawa, Sunda), Kacobhung (Madura), Bemebe

(Madura), Bulutube (Gorontalo), Taruapalo(Seram),


5/68


Tampong-tampong (Bugis), Kecubu (Halmahera, Ternate),

Padura (Tidore), Karontungan, Tahuntungan (Minahasa).

Kecubung juga terdapat di Cina, Inggris, dan Belanda

Nama Melayu : Kechubung, Terung pengar, Terung pungak

Sifat khas : Pahit, pedas, menghangatkan, dan sangat beracun

Nama simplisia :Datura albaeFlos ; bunga Kecubung

Datura albaeFolium ; daun Kecubung

Kecubung berasal dari Asia dan Afrika, kemudian tersebar meluas

sampai di Amerika (Tjitrosoepomo, 1994). Tanaman ini tumbuh di dataran

rendah sampai ketinggian 800 meter di atas permukaan laut. Tumbuh di

tempat-tempat terbuka, tanah yang mengandung pasir dan tidak begitu

lembab, dengan iklim yang kering (Sugeng, 1989). Menurut Van Steeins

(1997), selain tumbuh liar di ladang-ladang, kecubung sering ditanam di

kebun halaman rumah sebagai tanaman pagar atau tanaman hias yang

berkhasiat obat.

Kecubung termasuk tumbuhan jenis perdu yang mempunyai pokok

batang kayu, keras dan tebal, bercabang banyak, tumbuh dengan tinggi

kurang dari 2 meter. Daun kecubung berwarna hijau berbentuk bulat telur,

tunggal, tipis, dan pada bagian tepinya berlekuk lekuk tajam dan letaknya

berhadap-hadapan. Ujung dan pangkal daun meruncing dan pertulangannya

menyirip (Tampubolon, 1995). Bunga kecubung tunggal menyerupai

terompet dan berwarna putih atau lembayung, panjang bunga lebih kurang

12-18 cm, bunga bergerigi 5-6 dan pendek 3-5 cm. Tangkai bunga sekitar 1-

3 cm, kelopak bunga bertajuk 5 dengan tajuk runcing. Tabung mahkota

berbentuk corong, rusuk kuat, dan tepian bertajuk 5, tajuk di mahkotai oleh

suatu runcingan. Benang sari tertancap pada ujung dari tabung mahkota dan

sebagai bingkai berambut mengecil ke bawah. Bunga mekar di malam hari,

membuka menjelang matahari tenggelam dan menutup pada saat sore hari.


6/68


Buah kecubung hampir bulat yang salah satu ujungnya didukung

oleh tangkai tandan yang pendek dan melekat kuat. Buah kecubung bagian

luarnya dihiasi duri-duri pendek dan dalamnya berisi biji-biji kecil warna

kuning kecoklatan, diameter buah ini sekitar 4-5 cm. Buah yang masih

muda berwarna hijau muda, sedangkan yang sudah tua berwarna hijau tua.

Bakal buah pada irisan membujur, bagian bawah beruang 4 dan pada

puncak beruang 2. Buah duduk pada dasar bunga yang menebal dan melebar

ditambah sisa-sisa dari kelopak.

Tanaman kecubung yang dijumpai orang, yaitu yang berbunga putih,

ada pula yang berwarna putih dengan tepian mahkota berwarna ungu dan

bunga berwarna ungu. Ada juga kecubung kecil (Datura stramonium L.)

yang berbunga kecil dan berduri hitam pada buahnya (Heyne, 1987).

Kecubung yang berbunga putih sering dianggap paling beracun dibanding

jenis kecubung lainnya yang juga mengandung zat alkaloida

(Tjitrosoepomo, 1994).

2.2

Kandungan Kimia Tanaman Kecubung (Datur a metel L.)

Tanaman kecubung mengandung zat alkaloid yang diketahui

merupakan bahan yang dapat digunakan untuk membius dan juga dapat

digunakan sebagai obat (Kartasapoetra, 1988). Semua bagian tumbuhan

kecubung dari akar, tangkai, daun, buah, bunga dan biji mengandung

senyawa alkaloid yang sudah dikenal sebagai obat bius (Dharma, 1985).

Alkaloid dalam tumbuhan kecubung terbanyak terdapat di dalam

akar dan biji dengan kadar antara 0,4-0,9%, sedangkan dalam daun dan

bunga hanya 0,2-0,3% (Sastrapradja, 1978). Menurut Heyne (1987),

kandungan alkaloid tanaman kecubung dalam masing-masing organ

bervariasi, pada daun muda 0,813 %, daun tua 0,038 % dan bunga 0,2 %.

Alkaloid merupakan senyawa bersifat basa yang mengandung satu

atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan sebagai bagian dari

sistem siklik yang bentuknya bermacam-macam (Heyne, 1987). Sebagian

besar alkaloid merupakan kristal putih yang agak larut dalam air. Alkaloid


7/68


sering kali beracun bagi manusia dengan bahaya yang mempunyai aktivitas

fisiologi yang menonjol sehingga digunakan secara luas dalam pengobatan

(Salisbury dan Ross, 1995).

Alkaloid dalam tumbuhan kecubung terdiri dari atropin, hiosiamin

dan skopolamin. Struktur kimia masing-masing alkaloid pada tanaman

kecubung

Kandungan hiosiamin dalam daun kecubung ialah sekitar 15% dan 85%

skopolamin.

Atropin bekerja pada sistem saraf perifer, senyawa ini mempunyai

kerja merangsang dan menghambat sistem saraf pusat. Gejala keracunan

yang ditimbulkan pada pemakaian atropin adalah mulut kering, kesulitan

buang air, sakit mata dan sensitif pada cahaya (Anggara, 2003). Menurut

Wijayakusuma (1992), alkaloid atropin merupakan zat yang dapat

menimbulkan efek bius bila masuk ke dalam darah melalui saluran

pernafasan.

Skopolamin merupakan - hiosiamin yang terepoksida (atom O

membentuk segitiga dengan atom C) pada tropanol (Sastrapradja, 1978).Secara farmakologi kegunaan skopolamin berbeda dengan atropin, bahwa

senyawa ini hanya bekerja menekan sistem saraf pusat. Efek perifer

skopolamin dan atropin secara kualitatif memang sama tetapi dilihat dari

segi kuantitatif terdapat perbedaan yang cukup besar, yaitu efek

menghambat sekresi dari skopolamin lebih kuat sedangkan efek menaikkan

frekuensi jantung lebih lemah dari pada antropin (Mustchler, 1991).


8/68


9/68


yang berkaitan erat dengannya. Dalam tumbuhan, aglikon falvonoid

terdapat dalam bentuk struktur, karena flavonoid berupa senyawa fenol,

sehingga akan terjadi perubahan warna jika ditambahkan basa atau

amonia, jadi mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan.

Aglikon flavonoid adalah polifenol maka dari itu aglikon

flavonoid mempunyai sifat kimia fenol, yaitu bersifat agak asam

sehingga dapat larut dalam basa. Karena mempunyai sejumlah gugus

hidroksil atau suatu gula, flavonoid merupakan senyawa polar, maka

umumnya flavonoid larut cukup dalam pelarut polar seperti etanol,

metanol, butanol, aseton, air dan lain lain. Adanya gula yang terikat

pada flavonoid lebih mudah larut dalam air dan dengan demikian

campuran pelarut di atas dengan air merupakan pelarut yang lebih baik

untuk glikosida.

Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi

sehingga menunjukkan serapan pita serapan kuat pada daerah spektrum

UV dan spektrum tampak. Akhirnya, flavonoid umumnya terdapat

dalam tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon

flavonoid yang mana pun mungkin saja terdapat dalam satu tumbuhan

dalam beberapa bentuk kombinasi glikosida. Flavonoid terdapat dalam

semua tumbuhan berpembuluh tetapi beberapa kelas lebih tersebar

daripada yang lainnya, flavon dan flavonol terdapat pada semesta,

sedangkan isoflavon dan biflavonol hanya terdapat pada beberapa suku

tumbuhan.

Struktur inti flavonoid


10/68


11/68


Saponin

Saponin adalah glikosida triterpen dan sterol dan telah terdeteksi

dalam lebih dari 90 suku tumbuhan. Saponin merupakan senyawa aktif

permukaan dan bersifat seperti sabun, serta dapat dideteksi berdasarkan

kemampuannya membentuk busa dan menghemolisis sel darah.

Pencarian saponin dalam tumbuhan telah dirangsang oleh kebutuhan

akan sumber sapogenin yang mudah diperoleh dan dapat diubah

menjadi sterol hewan yang berkhasiat.

Struktur kimia merupakan glikosida, yang bila dihidrolisis akan

menghasilkan bagian glikon (senyawa gula) dan aglikon (senyawa non

gula). Struktur aglikon saponin umumnya merupakan struktur

triterpenoid dan struktur steroid, sehingga ditinjau dari strukturnya,

saponin dapat dipilih atas saponin triterpenoid dan saponin steroid.

Reaksi pengenalan saponin didasarkan pada sifatnya yang mampu

memberikan busa pada pengocokan setelah penambahan sedikit asam

atau pada pendiaman.

2.4 Ekstraksi

Ekstraksi adalah proses penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat

aktif dan bagian tumbuhan obat, hewan dan beberapa jenis ikan termasuk

biota laut. Zat-zat aktif tersebut terdapat di dalam sel, namun sel tumbuhan

dan hewan memiliki perbedaan begitu pula ketebalannya sehingga

diperlukan metode ekstraksi dan pelarut tertentu untuk mengekstraksinya(Tobo F, dkk, 2001).

Umumnya zat aktif yang terkandung dalam tumbuhan maupun

hewan lebih mudah tarut dalam pelarut organik. Proses terekstraksinya zat

aktif dimulai ketika pelarut organik menembus dinding sel dan masuk ke

dalam rongga set yang mengandung zat aktif, zat aktif akan terlarut

sehingga terjadi perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel

dan pelarut organik di luar sel, maka larutan terpekat akan berdifusi ke luar


12/68


sel, dan proses ini akan berulang terus sampai terjadi keseimbangan antara

konsentrasi zat aktif di dalam dan di luar sel (Tobo F, dkk, 2001).

Jenis-jenis ekstraksi:

1. Ekstraksi secara maserasi

Maserasi adalah cara penyaringan ynag sedehana. Maserasi

dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari

selama beberapa hari (biasanya 5 hari) pada temperatur kamar dan

terlindung dari cahaya.

Maserasi umumnya dilakukan dengan cara memasukkan

simplisia yang sudah diserbukkan dengan derajat halus tertentu

sebanyak 10 bagian ke dalam bejana maserasi yang di lengkapi dengan

pengaduk mekanik, kemudian ditambahkan 75 bagian cairan penyari,

ditutup dan dibiarkan selama 5 hari pada suhu kamar, terlindung dan

cahaya sambil berulang-ulang diaduk, seteiah 5 hari disaring ke dalam

wadah penampung, kemudian ampasnya diperas dan ditambah cairan

penyani lagi secukupnya dan diaduk kemudian disaning lagi hingga

diperoleh sari sebanyak 100 bagian. Sari yang diperoleh ditutup dan

disimpan pada tempat yang terlindung dan cahaya selama 2

hari,endapan yang diperoleh dipisahkan dan filtratnya dan dipekatkan

(Tobo F, dkk, 2001, Samulsson, 1999).

Metode maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana,

dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan

penyari, selama beberapa hari pada suhu kamar, terlindung dan cahaya.

Metode maserasi digunakan untuk menyari simplisia yang komponen

kimianya mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung

benzoin, tiraks, dan lilin.

Maserasi adalah salah satu jenismetoda ekstraksi dengan sistem

tanpa pemanasan atau dikenal dengan istilah ekstraksi dingin, jadi pada

metoda ini pelarut dan sampel tidak mengalami pemanasan sama sekali.
http://catatankimia.com/catatan/metoda-ekstraksi.htmlhttp://catatankimia.com/catatan/metoda-ekstraksi.html


13/68


Sehingga maserasi merupakan teknik ekstraksi yang dapat digunakan

untuk senyawa yang tidak tahan panas ataupun tahan panas.

Namun biasanya maserasi digunakan untuk mengekstrak

senyawa yang tidak tahan panas (termolabil) atau senyawa yang belum

diketahui sifatnya. Karena metoda ini membutuhkan pelarut yang

banyak dan waktu yang lama.

Secara sederhana, maserasi dapat disebut metoda perendaman

karena memang proses ekstraksi dilakukan dengan hanya merendam

sample tanpa mengalami proses lain kecuali pengocokan (bila

diperlukan). Prinsip penarikan (ekstraksi) senyawa dari sample adalah

dengan adanya gerak kinetik dari pelarut, dimana pelarut akan selalu

bergerak pada suhu kamar walaupun tanpa pengocokan. Namun untuk

mempercepat proses biasanya dilakukan pengocokan secara berkala.

Kelebihan Maserasi

Maserasi dapat digunakan untuk jenis senyawa tahan panas

ataupun tidak tahan panas. Selain itu tidak diperlukan alat yang

spesifik, dapat digunakan apa saja untuk proses perendaman.

Kekurangan Maserasi

Maserasi membutuhkan waktu yang lama, biasanya paling cepat

3x24jam, disamping itu membutuhkan pelarut dalam jumlah yang

banyak.

Maserasi dapat dilakukan modifikasi, yaitu:

1.

Digesti

Digesti adalah cara maserasi dengan menggunakan

pemanasan lemah, yaitu pada suhu 400-500C. Cara maserasi ini

hanya dapat dilakukan untuk simplisia yang zat aktifnya tahan

terhadap pemanasan.


14/68


2.

Maserasi dengan Mesin Pengaduk

Penggunaan mesin pengaduk yang berputar terus-menerus,

waktu proses maserasi dapat dipersingkat menjadi 6 sampai 24 jam.

3. Remaserasi

Cairan penyari dibagi menjadi 2. Seluruh serbuk simplisia

di maserasi dengan cairan penyari pertama, sesudah dienap

tuangkan dan diperas, ampas dimaserasi lagi dengan cairan penyari

yang kedua.

4. Maserasi Melingkar

Maserasi dapat diperbaiki dengan mengusahakan agar

cairan penyari selalu bergerak dan menyebar. Dengan cara ini

penyari selalu mengalir kembali secara berkesinambungan melalui

sebuk simplisia dan melarutkan zat aktifnya.

5.

Maserasi Melingkar Bertingkat

Pada maserasi melingkar, penyarian tidak dapat

dilaksanakan secara sempurna, karena pemindahan massa akan

berhenti bila keseimbangan telah terjadi masalah ini dapat diatasi

dengan maserasi melingkar bertingkat (M.M.B), yang akan

didapatkan :

a. Serbuk simplisia mengalami proses penyarian beberapa kali,

sesuai dengan bejana penampung.

b.

Serbuk simplisia sebelum dikeluarkan dari bejana penyari,

dilakukan penyarian dengan cairan penyari baru.

c. Hasil penyarian sebelum diuapkan digunakan dulu untuk

menyari serbuk simplisia yang baru,hingga memberikan sari

dengan kepekatan yang maksimal.


15/68


16/68


5.

Ekstraksi secara destilasi uap air

Destilasi dilakukan dengan cara mendidihkan sampel dalam

katel atau dengan cara mengalirkan uap jenuh (saturated or

superheated) dari katel pendidih air ke dalam katel penyulingan.

6. Ekstraksi secara infusa

Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia

nabati dengan air pada suhu 900 C selama 15 menit.

7.

Ekstraksi CairCair

Ekstraksi cair-cair adalah suatu metode ekstraksi yang

menggunakan corong pisah sehingga biasa juga disebut dengan

ekstraksi corong pisah.

Pada ekstraksi cair-cair, zat yang diekstraksi terdapat didalam

campuran yang berbentuk cair. Ekstraksi cair-cair sering juga disebut

ekstraksi pelarut, banyak dilakukan untuk memisahkan zat seperti iod,

atau logam-logam tertentu dalam larutan air. (Yazid,. E,. 2005.)

Ekstraksi cair-cair digunakan sebagai cara untuk memperlakukan

sampel atau clean-up sampel untuk memisahkan analit-analit dari

komponen matrix yang mungkin menggangu pada saat kuantifikasi atau

deteksi analit. Disamping itu, ekstraksi pelarut juga digunakan untuk

memekatkan analit yang ada didalam sampel dalam jumlah kecil

sehingga tidak memungkinkan atau menyulitkan untuk deteksi dan

kuantifikasinya. Salah satu fasenya seringkali berupa air ataupun

pelarut yang sesuai dan fase yang lain pelarut organik seperti kloroform

atau petroleum eter. Senyawa-senyawa yang bersifat polar akan

ditemukan didalam fase air, sedangkan senyawa-senyawa yang bersifat

hidrofobik akan masuk pada pelarut anorganik. Analit yang tereksasi

kedalam pelarut.( Rohman,. A,. 2009).

Hubungan zat terlarut yang terdistribusi diantara dua pelarut

yang tidak saling bercampur dinyatakan pertama kali oleh Walter


17/68


nernst (1981) yang dikenal dengan hukum distribusi atau partisi jika

solut dilarutkan sekaligus kedalam dua pelarut yang tidak saling

bercampur, maka solut akan terdistribusi diantara kedua pelarut. Pada

saat setimbang perbandingan konsentrasi solut berharga tetap pada suhu

tetap.Hukum Nernst dalam bentuknya yang sederhana hanya berlaku

untuk larutan encer dan keadaan solut sama atau tidak mengalami

perubahan kedua dalam pelarut. Hukum ini tidak berlaku jika solut

yang terdistribusi mengalami asosiasi atau disosiasi pada fase pelarut.

(Yazid,. E,. 2005.)

Ekstraksi cair-cair umumnya dipilih bila pemisahan campuran

dengan cara destilasi tidak mungkin dilakukan contohnya karena

pembentukan azeotrop atau karena kepekaannya terhadap panas) atau

metode yg dihugunakan tidak ekonomis. Pada saat pencampuran terjadi

perpindahan massa, yaitu ekstrak meninggalkan pelarutyang pertarna

(media pembawa) dan masuk ke dalam pelarut kedua (media ekstraksi).

Syarat yang harus dipenuhi dalam ekstraksi cair cair adalah

bahan ekstraksi dan pelarut tidak boleh saling melarut. Agar terjadi

perpindahan masa yang baik pada ekstraksi harus diusahakan agar

terjadi bidang kontak yang luas mungkin di antara kedua cairan

tersebut. Untuk itu dalam proses ekstraksi terutama apabila

menggunakan corong pisah dilakukan pengocokan. Pengocokan

bertujuan agar ekstrak berkontak dengan pelarut. Didalam pengocokan

tidak boleh terlalu kuat, karena akan menyebabkan terbentuknya emulsi

yang tidak dapat lagi atau sukar sekali dipisah.

Untuk mencapai proses ekstraksi cair-cair yang baik, pelarut

yang digunakan harus memenuhi kriteria sebagai berikut (Martunus &

Helwani, 2004;2005):

1.

Kemampuan tinggi melarutkan komponen zat terlarut di dalam

campuran.

2. Kemampuan tinggi untuk diambil kembali.

3.

Perbedaan berat jenis antara ekstrak dan rafinat lebih besar.


18/68


4.

Pelarut dan larutan yang akan diekstraksi harus tidak mudah campur.

5. Tidak mudah bereaksi dengan zat yang akan diekstraksi.

6. Tidak merusak alat secara korosi.

7.

Tidak mudah terbakar, tidak beracun dan harganya relatif murah.

2.5 Pengertian Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan

campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui

kuantitasnya yang menggunakan. Kromatografi juga merupakan analisiscepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun

cuplikannya. KLT dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama, dipakai

selayaknya sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif, atau

preparatif. Kedua, dipakai untuk menjajaki system pelarut dan system

penyangga yang akan dipakai dalam kromatografi kolom atau kromatografi

cair kinerja tinggi.

KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawasenyawa yang

sifatnya hidrofobik seperti lipidalipida dan hidrokarbon yang sukar

dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna untuk

mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari

kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara kromatografi dan isolasi

senyawa murni skala kecil. Pelarut yang dipilih untuk pengembang

disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. Bahan lapisan

tipis seperti silika gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan pereaksi

pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat. Data yang diperoleh dari

KLT adalah nilai Rf yang berguna untuk identifikasi senyawa. Nilai Rf

untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai Rf dari senyawa

standar. Nilai Rf dapat didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh oleh

senyawa dari titik asal dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut dari

titik asal. Oleh karena itu bilangan Rf selalu lebih kecil dari 1,0.


19/68


1. PELAKSANAAN KLT

a. Fase Diam

Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan

penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30

m. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan

semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik

kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya.

Penjerap yang paling sering digunakan adalah silica dan

serbuk selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada

KLT adalah adsorpsi dan partisi.

b. Fase Gerak

Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi

lebih sering dengan mencoba-coba karena waktu yang

diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah

campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua

pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga

pemisahan dapat terjadi secara optimal.

c. Aplikasi (Penotolan) Sampel

Untuk memperoleh roprodusibilitas, volume sampel

yang ditotolkan paling sedikit 0,5 l. Jika volume sampel yang

ditotolkan lebih besar dari 2-10 l, maka penotolan harus

dilakukan secara bertahap dengan dilakukan pengeringan antar

totolan.

d. Pengembangan

Bila sampel telah ditotolkan maka tahap selanjutnya

adalah mengembangkan sampel dalam bejana kromatografi

yang sebelumnya telah dijenuhi dengan uap fase gerak. Tepi

bagian bawah lempeng tipis yang telah ditotoli sampel


20/68


21/68


f.

Perhitungan Nilai Rf

Gambar 6 : Perbandingan jarak bercak dan jarak tempuh eluen.

Perhitungan nilai Rf didasarkan atas rumus :

Rf= jarak yang ditempuh oleh komponenjarak yang ditempuh oleh pelarut

Nilai Rf dinyatakan hingga angka 1,0 beberapa pustaka

menyatakan nilai Rf yang baik yang menunjukkan pemisahan

yang cukup baik adalah berkisar antara 0,2-0,8.

g. Altertatif Prosedur KLT

Adanya variasi prosedur pengembangan KLT dilakukan

untuk meningkatkan resolusi, sensitifitas, kecepatan,

reprosudibilitas dan selektifitas. Beberapa pengembangan ini

meliputi KLT 2 dimensi, Pengembangan kontinyu dan

Pengembangan gradient.

KLT 2 dimensi atau KLT 2 arah ini bertujuan untuk

meningkatkan resolusi sampel ketika komponen-komponen

solute mempunyai karakteristik kimia yang hampir sama,karenanya nilai Rf juga hampir sama sebagaimana dalam asam-

asam amino. Selain itu, system 2 fase gerak yang sangat

berbeda dapat digunakan secara berurutan pada suatu campuran

sehingga memungkinkan untuk melakukan pemisahan analit

yang mempunyai tingkat polaritas yang berbeda.


22/68


2. Penggunaan KLT

Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan

banyaknya komponen dalam campuran, identifikasi senyawa,

memantau berjalannya suatu reaksi, menentukan efektivitas

pemurnian, menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi

kolom, serta memantau kromatografi kolom, melakukan screening

sampel untuk obat. Analisa kualitatif dengan KLT dapat dilakukan

untuk uji identifikasi senyawa baku. Parameter pada KLT yang

digunakan untuk identifikasi adalah nilai Rf. Analisis kuantitatif

dilakukan dengan 2 cara, yaitu mengukur bercak langsung pada

lengpeng dengan menggunakan ukuran luas atau dengan teknik

densitometry dan cara berikutnya dalaha dengan mengerok bercak

lalu menetapkan kadar senyawa yang terdapat dalam bercak dengan

metode analisis yang lain, misalnya dengan metode spektrofotometri.

Dan untuk analisis preparatif, sampel yang ditotolkan dalam

lempeng dengan lapisan yang besar lalu dikembangkan dan dideteksi

dengan cara yang nondekstruktif. Bercak yang mengandung analit

yang dituju selanjutnya dikerok dan dilakukan analisis lanjutan.

2.6 Spektrofotometri

Spektrofotometri adalah ilmu yang mempelajari tentang penggunaan

spektrofotometer. Spektriofotometer adalah alat yang terdiri dari

spektrofotometer dan fotometer. Spektofotometer adalah alat yang

digunakan untuk mengukur energi secara relative jika energi tersebut

ditransmisikan, direfleksikan, atau diemisikan sebagai fungsi dari panjang

gelombang. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spectrum dengan

panjang gelombang tertentu, dan fotometer adalah alat pengukur intensitas

cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi.

Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri

dari spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari


23/68


spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat

pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Jadi

spektrofotometer digunakan untuk mengukur energi secara relatif jika

energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan sebagai fungsi

dari panjang gelombang. Kelebihan spektrofotometer dibandingkan

fotometer adalah panjang gelombang dari sinar putih lebih dapat terseleksi

dan ini diperoleh dengan alat pengurai seperti prisma, grating ataupun celah

optis. Pada fotometer filter, sinar dengan panjang gelombang yang

diinginkan diperoleh dengan berbagai filter dari berbagai warna yang

mempunyai spesifikasi melewatkan trayek panjang gelombang tertentu.

Pada fotometer filter, tidak mungkin diperoleh panjang gelombang yang

benar-benar monokromatis, melainkan suatu trayek panjang gelombang 30-

40 nm. Sedangkan pada spektrofotometer, panjang gelombang yang benar-

benar terseleksi dapat diperoleh dengan bantuan alat pengurai cahaya seperti

prisma. Suatu spektrofotometer tersusun dari sumber spektrum tampak yang

kontinyu, monokromator, sel pengabsorpsi untuk larutan sampel atau

blangko dan suatu alat untuk mengukur perbedaan absorpsi antara sampel

dan blangko ataupun pembanding (Khopkar SM,1990).

1. Spektrofotometer UV-Vis

Spektrofotometri UV-Vis adalah anggota teknik analisis

spektroskopik yang memakai sumber REM (radiasi elektromagnetik)

ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan

memakai instrumen spektrofotometer. Spektrofotometri UV-Vis

melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yang

dianalisis, sehingga spektrofotometri UV-Vis lebih banyak dipakai

untuk analisis kuantitatif dibandingkan kualitatif.

Spektroskopi UV/VIS merupakan metode penting yang mapan,

andal dan akurat. Dengan menggunakan spektroskopi UV/VIS, substansi

tak dikenal dapat diidentifikasi dan konsentrasi substansi yang dikenal


24/68


dapat ditentukan. Pelarut untuk spektroskopi UV harus memiliki sifat

pelarut yang baik dan memancarkan sinar UV dalam rentang UV yang

luas.

Spektrofotometer Uv-Vis adalah alat yang digunakan untuk

mengukur transmitansi, reflektansi dan absorbsi dari cuplikan sebagai

fungsi dari panjang gelombang. Spektrofotometer sesuai dengan

namanya merupakan alat yang terdiri dari spektrometer dan fotometer.

Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang

gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitascahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorbsi. Jadi spektrofotometer

digunakan untuk mengukur energi cahaya secara relatif jika energi

tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan sebagai fungsi

dari panjang gelombang. Suatu spektrofotometer tersusun dari sumber

spektrum sinar tampak yang sinambung dan monokromatis. Sel

pengabsorbsi untuk mengukur perbedaan absorbsi antara cuplikan

dengan blanko ataupun pembanding.

Spektrofotometer Uv-Vis merupakan spektrofotometer yang

digunakan untuk pengukuran didaerah ultra violet dan didaerah tampak.

Semua metode spektrofotometri berdasarkan pada serapan sinar oleh

senyawa yang ditentukan, sinar yang digunakan adalah sinar yang

semonokromatis mungkin.

Spektrofotometri UV/Vis melibatkan energi elektronik yang

cukup besar pada molekul yang dianalisis, sehingga spetrofotometer

UV/Vis lebih banyak dpakai ntuk analisis kuantitatif dibanding

kualitatif.

Molekul-molekul yang memerlukan lebih banyak energi untuk

promosi elektron, akan menyerap pada panjang gelombang yang lebih

pendek. Molekul yang memerlukan energi yang lebih sedikit akan

menyerap pada panjang gelombang yang lebih panjang. Senyawa yang

menyerap cahaya dalam daerah visible (yakni senyawa berwarna)


25/68


26/68


Tabel 2 : Rentang Serapan Spektrum UV-Vis Flavonoid

Keuntungan Spektrofotometer

Keuntungan dari spektrofotometer adalah yang pertama

penggunaannya luas, dapat digunakan untuk senyawa anorganik,

organik dan biokimia yang diabsorpsi di daerah ultra lembayung atau

daerah tampak. Kedua sensitivitasnya tinggi, batas deteksi untukmengabsorpsi pada jarak 10-4 sampai 10-5 M. Jarak ini dapat

diperpanjang menjadi 10-6 sampai 10-7 M dengan prosedur modifikasi

yang pasti. Ketiga selektivitasnya sedang sampai tinggi, jika panjang

gelombang dapat ditemukan dimana analit mengabsorpsi sendiri,

persiapan pemisahan menjadi tidak perlu. Keempat, ketelitiannya baik,

kesalahan relatif pada konsentrasi yang ditemui dengan tipe

spektrofotometer UV-Vis ada pada jarak dari 1% sampai 5%.

Kesalahan tersebut dapat diperkecil hingga beberapa puluh persen

dengan perlakuan yang khusus. Dan yang terakhir mudah,

spektrofotometer mengukur dengan mudah dan kinerjanya cepat.

Komponen-komponen Pada spektrofotometer

Yang pertama adalah sumber cahaya, Sebagai sumber cahaya

pada spektrofotometer, haruslah memiliki pancaran radiasi yang stabil


27/68


dan intensitasnya tinggi.Sumber energi cahaya yang biasa untuk daerah

tampak, ultraviolet dekat, dan inframerah dekat adalah sebuah lampu

pijar dengan kawat rambut terbuat dari wolfram (tungsten). Lampu ini

mirip dengan bola lampu pijar biasa, daerah panjanggelombang ( )

adalah 3502200 nanometer (nm). sumber cahaya ini digunakan untuk

radiasi kontinyu :

Untuk daerah UV dan daerah tampak

Lampu wolfram (lampu pijar) menghasilkan

Spektrum cahaya tampak (visible)

Hal kedua yang diperlukan adalah pembaur cahaya yang

kerennya disebut monokromator yang di video memberikan sinar

pelangi, karena dari sana lah kemudian kita bisa memilih panjang

gelombang yang diinginka/diperlukan. Pada video yang diperlihatkan

sinar tampak atau untuk spektro visible, tapi untuk UV pun kerjanya

sama, hanya saja tidak akan terlihat oleh mata kita.

Hal ketiga adalah tempat sampel atau kuvet, pada praktikum

tempat meletakan kuvet ada dua karena alat yang dipakai tipe double


28/68


beam, disanalah kita menyimpan sample dan yang satu lagi untuk

blanko. Pada pengukuran di daerah sinar tampak digunakan kuvet kaca

dan daerah UV digunakan kuvet kuarsa serta kristal garam untuk daerah

IR.

Keempat adalah detektor atau pembaca cahaya yang diteruskan

oleh sampel, disini terjadi pengubahan data sinar menjadi angka yang

akan ditampilkan pada reader (komputer). Komponen lain yang nampak

penting adalah cermin-cermin dan tentunya slit (celah kecil) untuk

membuat sinar terfokus dan tidak membaur tentunya, jadi satu halpenting dalam pekerjaan dengan spektrofotometer Uv-Vis adalah harus

dihindari adanya cahaya yang masuk ke dalam alat, biasanya pada saat

menutup tenpat kuvet, karena bila ada cahaya lain otomatis jumlah

cahaya yang diukur menjadi bertambah.

Tipe Instrumen Spektrofotometer

Pada umumnya terdapat dua tipe instrumen spektrofotometer,yaitu single-beam dan double-beam. gambar Single-beam instrument

danDouble-beam instrument

1. Single-beam instrument

Single-beam instrument dapat digunakan untuk kuantitatif

dengan mengukur absorbansi pada panjang gelombang tunggal.

Single-beam instrument mempunyai beberapa keuntungan yaitu

sederhana, harganya murah, dan mengurangi biaya yang ada

merupakan keuntungan yang nyata. Beberapa instrumen

menghasilkansingle-beam instrument untuk pengukuran sinar ultra

violet dan sinar tampak. Panjang gelombang paling rendah adalah

190 sampai 210 nm dan paling tinggi adalah 800 sampai 1000 nm

(Skoog, DA, 1996).


29/68


2. Double-beam instrument

Double-beam dibuat untuk digunakan pada panjang

gelombang 190 sampai 750 nm. Double-beam instrument dimana

mempunyai dua sinar yang dibentuk oleh potongan cermin yang

berbentuk V yang disebut pemecah sinar. Sinar pertama melewati

larutan blangko dan sinar kedua secara serentak melewati sampel,

mencocokkan foto detektor yang keluar menjelaskan perbandingan

yang ditetapkan secara elektronik dan ditunjukkan oleh alat

pembaca (Skoog, DA, 1996).

2. Spektrofotometri Inframerah

Konsep radiasi inframerah diajukan pertama kali oleh Sir

Wiliam Hershel (tahun 1800) melalui percobaannya mendespersikan

radiasi matular dengan prisma. Pada daerah sesudah sinar merah

menunjukkan adanya kenaikan temperatur tertinggi yang berarti pada

daerah X radiasi tersebut banyak kalori (energy tinggi). Daerah

spektrum tersebut selanjutnya disebut inframerah.

Spektrofotometri IR sangat penting dalam kimia modern,

terutama (meskipun bukan satu-satunya) dalam daerah organik.

Spektrofotometer ini merupakan alat untuk mendeteksi gugus

fungsional, mengidentifikasi senyawa dan menganalisis campuran.

Bila sinar inframerah dilewatkan melalui cuplikan senyawa

organik, maka sejumlah frekuensi diserap sedangkan frekuensi yang

lain dilepaskan atau ditranmisikan tanpa diserap. Jika digambarkan

antara % A atau % T lawan t ,maka akan dihasilkan suatu spektrum

inframerah.

Kedudukan pita serapan dapat dinyatakan dalam satuan

frekuensi, V (det-1atau hz) atau panjang gelombang (mikrometer) atau

bilangan gelombang

(cm

-1

).


30/68


Interaksi radiasi IR dengan molekul

Radiasi IR yang dipakai untuk analisis instrumental adalah

radiasi IR yang rentang bilangan gelombangnya ( ) antara 4000

hingga 670cm-1.

Radiasi IR tersebut terbagi lagi atas dua daerah ,yaitu :

1.

Daerah gugus fungsi pada rentang () antara 4000 hingga 600cm-1

2. Daerah sidik jari pada rentang antara 1600 hingga 670 cm-1

Radiasi IR yang dipakai tersebut harus berada pada rentang

frekuensi yang sesuai dengan rentang getaran alamiah (natural

vibrations) dan molekul, supaya memperoleh informasi gugus-gugus

molekul dari zat yang dianalisis.

Bentuk dari struktur molekul juga menjadi penentu terjadinya

interaksi IR dengan molekul-molekul yang simetris, yaitu gugus

molekul atau atom mempunyai keelektronegatifan yang sama, tidak

akan diperlukan perubahan netto moment dwi kutub sehingga tidak

terjadi perbedaan muatan listrik pada kedua kutub. Dengan demikian

medan listrik IR tidak berinteraksi dengan molekul dan lebih jauh

molekul tersebut tidak akan mengalami perubahan-perubahan vibrasi

karenanya tidak menyerap radiasi IR.

8 Daerah Terpenting Yang Digunakan Pada Pemeriksaan

Pendahuluan Spectrum IR

( m ) () Ikatan yang menyababkan Absorpsi

2,7 3,3

3,03,4

3000 - 2750

33002900

Regang OH, NH

(Regang CH) - CCH, C = CH, Ar

H


31/68


3,33,7

4,24,9

7,36,1

5,96,2

6,87,7

10,015,4

30002700

24002100

19001650

16751500

14751300

1000650

( Regang Ch )CH3, CH2, CH, H

C = O

Regang C C , C N

Regang C = O ( asam, aldehida,keton,

amida, ester, anhilida

Regang C = C ( alifatik dan aromatic )

C = N

Lentur CH

Lentur C = C H , Ar H ( luar

bidang).

LINGKUP KEGUNAAN SPEKTROFOTOMETRI IR

Berdasarkan pernyataan bahwa tidak mungkin 2 senyawa

memberikan serapan fundamental radiasi IR yang sama serta tidak

mungkin juga 2 senyawa (kecuali isomer optic) memberikan spectra IR

yang sama, maka spektrofotometri IR khusus digunakan untuk tujuan

analisis kualitatif yang difokuskan pada identifikasi gugus fungsi.

Sasaran analisis kualitatif spektrofotometri IR secara umum

adalah zat-zat organik walaupun dapat yang untuk zat anorganik,

namun demikian dari yang telah diuraikan masih banyak kelemahan

analisis kualitatif dengan spektrofotometri IR,sehingga sistem optic dan

instrumennya perlu dikembangkan, saat ini telah dikenal FT-IR (fourier

transform IR) yang dapat menutup beberapa kelemahan

spektrofotometer IR yang konvensional.


32/68


INSTRUMENTASI SPEKTROFOTOMETER IR

Bagian utama dari spektrofotometer inframerah adalah

sumber cahaya inframerah monokromator dan detector. Cahaya dari

sumber dilewatkan melalui cuplikan, dipecah menjadi frekuensi-

frekuensi individunya dalam monokromator dan intensitas relative

dan frekuensi individu diukur oleh detector.

Instrumentasi spektrofotometer IR susunannya hampir sama

dengan spektrofotometer UV-VIS. Perbedaannya adalah sampel

berhadapan langsung dengan sumber radiasi.

SUMBER RADIASI

Prinsip sumber radiasi IR dipancarkan oleh padatan lembam

yang dipanaskan sampai pijar dengan aliran listrik.

3 macam sumber radiasi IR :

1.

Kawat nikhrom yang dipijar dengan aliran listrik sampai

temperature 1100 oC akan memancarkan radiasi IR akan tetapi

pancaran radiasi IR dari pijaran kawat nikhrom ini memberikan

bilangan gelombang lebih dari 5000 cm-1 dengan intensitas yang

lemah.

2.

Nernst Glower, juga sebagai hasil pijaran Zirkonium oksida yang

dijepit kedua ujungnya dengan keramik pada temperature 1200 K

2200 K

3. Global, senyawa silicon karbida yang mempunyai kehandalan

dapat dipijarkan langsung sampai temperature 1300 1500

K,sumber radiasi sangat banyak dipakai


33/68


34/68


2.7 Lada Putih

Lada atau merica adalah rempah-rempah berwujud biji-bijian yang

dihasilkan tanaman Piper nigrum L.Lada sangat penting dalam komponen

masakan dunia dan dikenal luas sebagai komoditi perdagangan penting

di dunia. Piperin merupakan suatu senyawa yang sangat bermanfaat dalam

kesehatan. Piperin banyak ditemukan pada simplisia yang termasuk dalam

keluarga piperaceae, yaitu pada Piperis nigrii fructus, Piperis albi fructus,

Piperis retrofracti fructus, dll. Tanaman yang termasuk dalam keluarga

piperaceae sangat banyak ditemukan hampir seluruh dataran rendah diIndonesia, karena tanaman ini tidak tahan dengan genangan air. Piperis nigri

sangatlah mudah ditemukan di seluruh daerah di Indonesia dengan harga

yang relative rendah. Pada umumnya kandungan piperin dalam piperis nigri

sebanyak 1,7- 7,4%.

Lada mengandung minyak atsiri, pinena, kariofilena, lionena,

filandrena alkaloid piperina, kavisina, piperitina, piperidina, zat pahit dan

minyak lemak. Rasa pedas disebabkan oleh resin yang disebut kavisin.

Kandungan piperine dapat merangsang cairan lambung dan air ludah. Selain

itu lada bersifat pedas, menghangatkan dan melancarkan peredaran darah

(Septiatin, Eatin, 2008).

Klasifikasi ilmiah

Kerajaan : Plantae

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliophyta

Ordo : Piperales

Famili : Piperaceae

Genus :Piper

Spesies :Piper nigrum L


35/68


P. nigrum (lada) menghasilkan lada hitam dan lada putih. Lada

hitam yaitu buah lada yang belum masak dikeringkan bersama kulitnya

hingga kulit keriput dan berwarna hitam. Lada putih yang berasal dari buah

lada yang masak yang setelah diberssihkan dari kulitnya lalu dikeringkan,

hingga berwarna putih (Gembong Tjitrosoepomo, 2000).

Nama lain dari lada adalah pedes (Sunda) dan merica (Jawa). Lada

dengan nama latin; Piper Nigrum, sudah dikenal sebagai penyedap

makanan,mengatasi bau dan rasa makanan yang beraroma tak sedap, serta

pengawet daging (Septiatin, 2008).

Ada dua macam lada yang menjadi komoditi perdagangan yaitu lada

hitam dan lada putih. Lada hitam diperoleh dengan memetik buah yang

masih hijau,mengupasnya, difermentasi untuk menambah rasa lada,

kemudian dikeringkan di bawah sinar matahari, dan rasanya lebih pedas.

Sedangkan lada putih diperoleh dengan memetik biji masak merah, diremas

perlahan-lahan dan direndam dalam air, kulit dan daging buah dibuang

sebelum dikeringkan di sinar matahari(Septiatin, 2008).

Sifat Lada

Lada memiliki rasa pedas, berbau khas dan aromatik. Rasa pedas

dari buah lada hitam, 90-95% disebabkan oleh adanya komponen trans-

piperin yang ada dalam buah kering kadarnya 2-5% dan terdiri atas senyawa

asam amida piperin dan asam piperinat. Rasa pedas piperin masih ada

walaupun diencerkan 1:200000. Rasa pedas juga disebabkan oleh adanya

kavisin yang merupakan isomer basa piperin. Kandungan lain yang

menghasilkan bau aromatic adalah minyak atsiri dengaan kadar 1-2.5%

yang mengandung piperonal, eugenol, safrol, metil eugenol, dan miristissin.

Lada hitam juga mengandung monoterpen dan seskuiterpen

(Wiryowidagdo, Sumaali, 2007)


36/68


Khasiat dan Kegunaan

Penggunaan, lada digunakan sebagai stomakik, karminatif, dan

bumbu masak. Khasiat dari buah lada yaitu dapat mengobati kaki bengkak

pada ibu hamil, kolera, nyeri haid, rematik, salesma, air mani yang encer,

dan impoten(septiatin, 2008).

Efek farmakologis lada diantara lain:

1.

Kamfena merangsang timbulnya kejang.

2. Boron meluruhkan haid, merangsang keluarnya hormone androgen dan

estrogen.3. Mencegah pengeroposan tulang, menghambat prostaglandin, relaksasi

otot, menghilangkan kelelahan

4.

Merangsang semangat, calamine dan chavicine

5. Merangsang syaraf pusat calamine.

Piperin

Piperin (1piperilpiperidin ) C17H19O3N merupakan alkaloid dengan

inti piperidin. Piperin berbentuk kristal berwarna kuning dengan titik leleh

127-129,50C, merupakan basa yang tidak optis aktif, dapat larut dalam

alkohol, benzena, eter, dan sedikit larut dalam air (Anwar,dkk.1994).

Piperin terdapat dalam beberapa spesies piper dan dapat dipisahkan

baik dari lada hitam maupun lada putih perdagangan piperin juga dapat

ditemukan pada cabe jawa. Kandungan piperin biasanya berkisar antara 5-

92% (Anwar,dkk.1994).

Struktur piperin adalah sebagai berikut :

N

CO CH

HC CH

HC

O

O

CH2


37/68


Piperin merupakan amida (R-CONH2). Reaksi hidrolisis amida dapat

dilakukan baik dalam suasana asam maupun suasana basa. Dalam kedua

kondisi ini, asam dan basa berfungsi sebagai pereaksi dan bukan sebagai

katalis. Dalam suasana asam, terjadi penyelangan air terhadap amida

sedangkan dalam suasana basa terjadi penyerangan ion hidroksil terhadap

atom karbon karbonil amida.

O

O

H

HH

H

O

N

Isochavisin

O

O

H

O

N

Isopiperin

H

H

H

O

O

H

H

N

Chavisin

H

H O

O

O

H

H

H

H

O

N

Piperin

Reaksi hidrolisis amida dalam suasana basa digambarkan sebagai

berikut :

R C

O

NH2

+ -OH R C

O-

NH2

OH R C

O

O-

NH3+


38/68


39/68


Dua metode yang paling banyak digunakan untuk menyeleksi

tanaman yang mengandung alkaloid. Prosedur Wall meliputi ekstraksi

sekitar 20 gram bahan tanaman kering yang di refluks dengan 80%

etanol. Setelah dingin dan disaring, residu dicuci dengan 80% etanol

dan kumpulan filtrat diuapkan. Residu yang tertinggal dilarutkan

dalam air, disaring, diasamkan dengan asam klorida 1% dan alkaloid

diendapkan baik dengan pereaksi Mayer atau dengan siklotungstat.

Bila hasil test positif, maka konformasi test dilakukan dengan cara

larutan yang bersifat asam tersebut dibasakan, alkaloid diekstrak ke

dalam pelarut organik, dan kemudian alkaloid diekstrak kembali ke

dalam larutan asam. Jika larutan asam ini menghasilkan endapan

dengan pereaksi tersebut di atas, ini berarti tanaman mengandung

alkaloid. Fasa basa berair juga harus diteliti untuk menentukan adanya

alkaloid quartener(Sastrohamodjojo, 1996).

2. Isolasi

Karakter dasar berbagai alkaloid digunakan untuk

mengisolasinya. Alkaloid diambil ke dalam larutan asam berair

(umumnya asam hidroklorida, sitrat, atau tartarat) dan

komponennetral atau bersifat asam dari campuran asal dipisahkan

dengan ekstraksi pelarut. Setelah larutan berair dibasakan, maka

alkaloid diperoleh dengan ekstraksi ke dalam pelarut yang

sesuai(Sastrohamodjojo, 1996).


40/68


BAB III

METODE PERCOBAAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat yang digunakan

1. Tabung reaksi

2.

Cawan penguap

3.

Pipet tetes4.

Spatula

5. Batang pengaduk

6. Beaker glass

7.

Erlenmeyer

8. Gelas kimia

9. Gelas ukur

10. Mortir dan stamper

11. Penangas air

12. Wadah maserasi

13.

Vial

14. Rotari efavorator

15. Corong gelas

16.

Coroh pisah

17. Sendok tanduk

18. Statif

19. Timbangan analitik

20. Plat KLT : Silika Gel GF 254

21. Bejana KLT (Chamber) + tutup

22.

Botol semprot

23. Pipa kapiler

24. Kertas saring (Kertas Whatman)

25.

Alumunium foil


41/68


42/68


20.

Aquadest

21. Toluen

22. Silika gel GF 254

23.

Toluene

24.AlCl3 1%

25. Penampak bercak :

a) Uap Amonia

b) AlCl3 1%

c) FeCl3

d)

Dragenderof

e) Vanilin 1%

26.Metanol PA

27.

KOH

28.Metanol

29.Etanol

30.

Biji lada putih

3.2 Prosedur kerja

3.2.1 Penapisan Fitokimia

a. Golongan Senyawa Alkaloid

1. Serbuk simplisia dibasahi dengan 5 ml amonia.

2.

Ditambahkan 20 ml kloroform.

3. Digerus kuatkuat.

4.

Lapisan kloroform yang dihasilkan dipipet.

5.

Ditambahkan 5 ml asam klorida 2 N.

6. Dikocok kuatkuat hingga terbentuk 2 lapisan.

7. Lapisan asam dipipet.

8. Dibagi ke dalam 3 tabung reaksi.

9. Tabung reaksi 1 ditambahkan pereaksi Mayer. Bila terjadi

kekeruhan atau endapan berwarna putih, berarti di dalam

simplisia tersebut kemungkinan mengandung alkaloid.


43/68


10.

Tabung reaksi 2 ditambahkan pereksi Dragendorff. Bila

terjadi kekeruhan atau endapan jingga kecoklatan, berarti

di dalam simplisia tersebut kemungkinan mengandung

alkaloid.

11.reaksi 3 digunakan sebagai blanko sehingga tidak

ditambahkan apapun.

b. Golongan Senyawa Polifenol

1. Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi.

2.

Dipanaskan, lalu disaring.

3. Filtrat yang dihasilkan ditambahkan sedikit pereaksi

besi(III)klorida. Terbentuknya warna hijau biru hitam

hingga hitam menunjukkan adanya senyawa fenolat.

c. Golongan Senyawa Tanin

1.

Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi.

2.

Dipanaskan, lalu disaring.

3. Filtrat yang dihasilkan ditambahkan sedikit larutan gelatin

10%. Adanya endapan berwarna putih menandakan

adanya senyawa tanin.

d.

Golongan Senyawa Flavonoid

1. Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi.

2.

Ditambahkan serbuk magnesium, lalu ditambahkan 1 ml

asam klorida.

3. Dipanaskan dan disaring. Filtrat yang dihasilkan

ditambahkan 12 ml amil alkohol.

4. Dikocok kuat kuat. Adanya senyawa flavonoid ditandai

dengan terbentuknya cincin berwarna kuning hingga

merah di sekitar tabung reaksi.


44/68


e.

Golongan Senyawa Monoterpenoid dan Seskuiterpenoid

1. Serbuk simplisia digerus dengan eter, kemudian disaring.

2. Filtratnya dimasukkan ke dalam cawan penguap. Lalu

diuapkan hingga kering.

3. Ditambahkan larutan vanilin 10% dalam asam sulfat pekat

melalui selasela dinding cawan. Adanya perubahan

warna yang terjadi menunjukkan simplisia tersebut

mengandung senyawa monoterpenoid dan

seskuiterpenoid.

f. Golongan Senyawa Steroid dan Triterpenoid

1. 12 gram serbuk simplisia digerus dengan eter, kemudian

disaring.

2. Filtrat yang dihasilkan dimasukkan ke dalam cawan

penguap, lalu diuapkan hingga kering.

3.

Ditambahkan pereaksi Liebermann Burchard pada sela

sela dinding cawan. Terjadinya warna ungu menunjukkan

adanya senyawa triterpenoid sedangkan adanya warna

hijau biru menunjukkan adanya senyawa steroid.

g. Golongan Senyawa Kuinon

1.

Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi.

2. Dipanaskan, lalu disaring.

3.

Filtrat yang dihasilkan ditambahkan dengan larutan kalium

hidroksida 5%. Adanya warna kuning kemerahan

menandakan adanya senyawa kuinon dalam simplisia

tersebut.

3.2.2 Ekstraksi

1. Simplisia daun kecubung ditimbang sebanyak 250 gram.

2.

Wadah maserasi dilapisi dengan kapas secukupnya.


45/68


3.

Daun kecubung yang telah ditimbang dimasukkan kedalam

wadah maserasi.

4. Etanol ditambahkan kedalam wadah maserasi hingga

merendam simplisia daun kecubung.

5. Diaduk selama 15 menit, kemudian wadah ditutup dan

didiamkan selama 24 jam.

6. Maserat ditampung, residu ditambahkan etanol dan dilakukan

langkah kerja yang sama hingga tiga kali.

7. Maserat dirotav menggunakan alat rotasi efavorator, kemudian

diuapkan diatas waterbath hingga menjadi ekstrak kental.

8. Ekstrak kental sebanyak 10 gram dilarutkan dalam campuran

etanol dan air dengan perbandingan 80 ml : 20 ml (ekstrak air).

9.

Ekstrak air sebanyak 100 ml dimasukkan kedalam corong

pisah 250 ml dan ditambahkan dengan nheksan 100 ml.

10.Ekstrak dikocok dalam corong pisah selama 15 menit dengan

frekuensi tiga kali pengocokan dalam satu menit.

11.

Setelah dikocok campuran di diamkan sampai terbentuk dua

fase dalam corong pisah.

12.

Setelah memisah, fraksi air dan n heksan ditampung dalam

wadah terpisah (lapisan di bawah adalah fraksi air dan lapisan

yang berada di atas adalah fraksi n - heksan).

13.

Fraksi air dimasukkan kembali kedalam corong pisah lalu

ditambah n heksan 100 ml dan dilakukan pengulangan

prosedur seperti langkah 3, 4, dan 5. Prosedur terus diulang

sampai fraksi n - heksan menjadi jernih.

14.Setelah fraksi n heksan jernih, fraksi air dimasukkan ke

dalam corong pisah kembali dan ditambahkan dengan etil

asetat 100 ml.

15.Lakukan prosedur seperti langkah no 3 dan 4. Setelah memisah

fraksi air dan etil asetat ditampung dalam wadah terpisah

(fraksi etil asetat diatas dan fraksi air dibawah).


46/68


16.

Fraksi air dimasukkan kembali kedalam corong pisah lalu

ditambah etil asetat 100 ml dan dilakukan pengulangan

prosedur seperti langkah 3 dan 4 sampai fraksi etil asetat

menjadi jernih. Setelah jernih setiap fraksi disimpan di dalam

wadah terpisah.

17.Fraksi air diuapkan hingga menjadi fraksi kental.

18.Fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat dirotav hingga volume

berkurang menjadi setengahnya.

19.Fraksi n heksan dan fraksi etil asetat yang telah di rotav di

uapkan hingga menjadi fraksi kental.

3.2.3 Kromatografi Lapis Tipis

1.

Disiapkan chamber pengembangan kromatografi lapis tipis

yang berisi larutan pengembang. Dibiarkan hingga bagian

dalam camber pengembangan jenuh dengan uap larutan

pengembangan

2.

Disiapkan lempeng kromatografi lapis tipis dengan penjerap

Silika Gel GF 254. Ukuran lempeng yang disiapkan adalah

3x10 cm

3. Ditandai batas bawah (garis awal) pada lempeng kromatografi

dengan jarak kurang lebih 1 cm dari tepi lempeng

4.

Ditutulkan larutan ekstrak pada garis awal, dibiarkan kering.

Diulangi penutulan hingga beberapa kali dan konsentrasi

ekstrak dalam tutulan diperkirakan cukup.

5.

Dimasukan lempeng kromatografi lapis tipis tersebut secara

hati-hati dan tegak lurus ke dalam tangki pengembangan yang

berisi larutan pengembang. Dipastikan bahwa garis awal tidak

terendam oleh larutan pengembang. Dibiarkan terjadi

pengembangan beberapa saat hingga larutan pengembang

mencapai batas lebih kurang dari 1 cm dari tepi atas lempeng

kromatografi.


47/68


6.

Diangkat lempeng dari tangki pengembang, dibiarkan kering

diudara terbuka. Setelah kering, diamati dibawah sinar

ultraviolet 254 nm, tandai bercak yang teramati. Setelah itu

lempeng disemprot dengan penampak bercak, amati dan tandai

bercak yang terjadi.

7. Dihitung nilai Rf dari bercak yang teramati dengan cara

mengukur jarak bercak dan dibandingkan dengan jarak rambat

larutan pengembang.

3.2.4 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

1. Dibersihkan pelat kaca dan disusun di atas alat pembuat plat

KLTP.

2.

Dibuat bubur silica gel dengan cara mencampurkan 10 gram

silica gel dengan 20 ml aquades hingga homogeny.

3. Dituangkan semua bubur silica gel ke dalam alat dan dorong

kaca hingga terkena bubur silica gel.

4.

Didiamkan lapisan silica gel hingga mengering (6-12 jam)

5. Setelah kering plat di oven terlebih dahulu sekitar 30 menit

untuk pengaktifan.

6. Plat KLTP dapat digunakan, Caranya: sejumlah fraksi

dilarutkan dalam larutan pengembang yang telah disiapkan dan

totolkan culikan secara berderet sehingga membentuk pita

sebagai garis awal pengembangan. Dikeringkan di udara

beberapa saat.

7.

Plat dimasukan kedalam chamber yang telah di jenuhkan oleh

larutan pengembang hingga tanda batas.

8. Amati spot yang terbentuk dibawah sinar UV 254 dan sinar

UV 366 nm.

9. Dikerok salah satu pita yang terbentuk dan saring hasil

kerokan dengan pelarut pengembang yang digunkanan.


48/68


3.2.5 Kromatografi Lapis Tipis Dua Dimensi

1.

Alat dan bahan yang akan digunakan disiapkan

2. Plat KLT disiapkan dengan ukuran 6x6 cm

3. Plat KLT dibuat garis untuk batas atas dan batas bawah dengan

menggunakan pensil ,untuk batas atas dibuat jarak 0,5 cm dari

sisi atas plat dan batas bawah dibuat jarak 1 cm dari sisi bawah

plat

4.

Plat KLT diberi tanda untuk tempat sampel yang akan

ditotolkan5.

Isolat hasil dari KLTP ditambahkan etil asetat sebanyak 1 ml

6. Hasil pelarutan di totolkan sekitar 0,5cm dari pojok plat KLT

dengan menggunakan pipa kapiler

7.

Plat KLT dimasukkan kedalam chamber yang berisi

pengembang Etil Asetat : Toluen (7:3) yang telah dijenuhkan

terlebih dahulu selama 15 menit

8.

Pengembangan dilakukan sampai eluen atau pelarut hampir

mencapai batas atas

9. Plat KLT dikeluarkan setelah eluen hampir mencapai batas

atas dan dibiarkan beberapa saat sampai kering

10.Kemudian plat KLT dilihat dibawah sinar UV pada panjang

gelombang 254 nm dan 366 nm

11.

Apabila pada saat dilihat pada sinar UV hanya terdapat satu

spot maka dilakukan pengembangan kembali dengan cara

memutar plat 90o

12.

Dilakukan langkah yang sama seperti pada langkah no. 3-10

3.2.6 Pengukuran Spektrofotometri UV-Vis

1.

Alat dan bahan yang akan digunakan disiapkan


49/68


50/68


2.

Disimpan di erlenmeyer, di tambahkan 100ml etanol dan

batu didih kemudian diaduk.

3. Dipanaskan selama 2 jam memakai bunsen dan tutup

dengan kaca arloji yang diatasnya disimpan kapas yang

sudah dibasahi, bila pelarut sudah mulai habis tambahkan

50ml etanol kembali.

4. Disaring dan filtratnya di uapkan di cawan penguap pada

penangas air.

Isolasi Piperin Dengan Metode Rekristalisasi

1. Ekstrak kental diambil dan disimpan kedalam dua buah

vial.

2. Setiap vial ditambahkan 10 ml KOH-etanolik 10 % pada

ekstrak kental sambil diaduk aduk. sampai timbul

endapan.

3. Setelah mengendap dipisahkan sari dari bagian yang tak

larut.

4. Sari yang didapat didiamkan vial 1 didiamkan di suhu

ruang sedangkan vial 2 didalam lemari pendingin selama

satu malam sampai terbentuk kristal.

7. Identifikasi Kristal

1. Kristal piperin dilarutkan dalam etanol .

2.

Ditotolkan pada plat KLT kemudian di keringkan.

3. Dielusi dalam pengembang benzene-etil asetat (2:1).

4. Dilihat spotnya di lampu UV.

5. Kristal sisa dilarutkan dengan metanol untuk diuji pada

alat sprektofotomotri pada panjang gelombang 342 nm.


51/68


BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Percobaan

4.1.1 Penapisan Fitokimia

No.Golongan

Senyawa

Pereaksi Hasil

1. AlkaloidMayer

Dragendorf

(-) tidak ada endapan putih

(-) tidak terbentuk endapan

jingga coklat

2. Polifenol FeCl3 (+) biru kehitaman

3. Tannin Gelatin 1%(-) tidak terbentuk endapan

putih

4. Flavonoid Serbuk Magnesium,HCl, Amil alkohol

(+) lapisan amil alkoholberwarna kuning

5.Monoterpen dan

SeskuiterpenVanilin 10% (+) terbentuk warna ungu

6.Steroid dan

Triterpenoid

Liebermann-

Bouchard

(-) tidak terbentuk warna

hijau biru dan ungu

7. Kuinon KOH 5%(-) tidak terbentuk warna

kuning kemerahan8. Saponin HCl 2N (+) busa stabil


52/68


4.1.2 Ekstraksi

Maserasi

Hari

ke-

Volume etanol yang

ditambahkan (liter)

1 2,1

2 1,6

3 1,5

Hasil rendemen ekstrak

No. Bahan Hasil

1. Simplisia yang dipakai 250 gram

2. Ekstrak kental etanol 30 gram

Persen rendemen 12%

Ekstraksi Cair-Cair

Jenis fraksi Bobot fraksi kental % Rendemen fraksi

Nheksan 3,66 gram 36,6 %

Etil asetat 2,471 gram 24,71 %

Air 3,399 gram 33,99 %

Total 9, 53 gram 95,3 %


53/68


4.1.3 Kromotografi Lapis Tipis (KLT)

Pemilihan fraksi terbaik setelah dilihat di UV

FraksiKeterangan

N-Heksan Etil Asetat

Eter 3 : 7 EAAda spot di atas

(ketinggian) berekor

Ada spot di atas

(ketinggian)

N-Heksan 6 : 4 EA

Ada spot tidak ber ekor

tetapi numpuk pada satu

spot

Ada spot ber ekor

Toluene 3 : 7 EA Spot di tengahSpot merata bagus

tidak berekor

Replikasi

Toluene 3 : 7 EA pada fraksi EA (Etil Asetat)

Di dapatkan Rf : 2,6 / 5,1 = 0,5098

Jadi kita gunakan fraksi EA (Etil Asetat) karena fraksi ini lebih bagus.

Di lanjutkan ke metode KLTP dengan larutan pengembang yang sama

ada fraksi EA (Etil Asetat)

Di dapatkan Rf : 9 / 17,5 = 0,5142

No Fraksi Secara

Visual

UV

368 nm

UV

254 nm

Dragendorf AlCl3 FeCl3

1. EA 7:3

Toluene

Tidak

Terlihat

Ada

spot

Biru

Hijau - - -

No Fraksi Secara Visual UV366 nm UV254 nm1. EA 7:3

Toluene

Hijau memanjang Ada spot Biru Hijau


54/68


55/68


4 Rekristalisasi dengan KOH selama

semalam didapatkan Kristal

sebanyak

Bobot kristal :1,73 gram

Presentase kristal : 57,67%

5 Penotolan sampel Kristal dalam

etanol didapatkan ke plat KLT

dihaslkan Rf

Suhu kamar : 0,5454 (warna

hijau)

Suhu dingin : 0,5454 (warna

hijau)

Pembanding : 0,5818 (warna

hijau)

6 Perbandingan absorban kristal

suhu kamar,dingin dan

pembanding

Suhu kamar : 0,26

Suhu dingin : 0,2

Pembanding :0,193

4.2 Pembahasan

Skrining fitokimia merupakan analisis kualitatif terhadap senyawa

senyawa metabolit sekunder. Suatu ekstrak dari bahan alam terdiri atasberbagai macam metabolit sekunder yang berperan dalam aktivitas

biologisnya. Senyawasenyawa tersebut dapat diidentifikasi dengan

pereaksipereaksi yang mampu memberikan ciri khas dari setiap golongan

dari metabotit sekunder.

Senyawasenyawa yang akan diidentifikasi dengan uji pereaksi

kimia pada praktikum ini adalah senyawa alkaloid, polifenol, tannin,

flavonoid, monoterpen dan seskuiterpen, steroid dan triterpenoid, kuinon

dan saponin. Sampel yang akan di uji adalah simplisia daun kecubung

(Datura metel L.).

Pada uji alkaloid, saat penambahan pereaksi mayer dan pereaksi

dragendorf sampel yang kami uji tidak terbentuk endapan putih dan endapan

jingga coklat. Sedangkan pada literatur, daun kecubung positif mengandung

alkaloid. Hal ini mungkin dikarekan pada saat penelitian, pereaksi yang


56/68


kami gunakan kurang baik, sehingga tidak memberikan hasil yang

signifikan.

Pada uji polifenol, saat penambahan pereaksi FeCl3 memberikan

hasil perubahan warna menjadi biru hitam, yang berarti menandakan bahwa

daun kecubung positif mengandung senyawa polifenol. Hasil yang diperoleh

sesuai dengan literatur.

Identifikasi uji tannin pada daun kecubung, memberikan hasil negatif

pada saat penambahan gelatin 1% yang ditunjukkan dengan tidak adanya

endapan putih. Pada literarut yang kami peroleh, hasil yang didapat sesuai

dengan literatur.

Pada uji flavonoid, saat penambahan amil alkohol menghasilkan

cincin berwarna kuning yang menunjukkan adanya flavonoid. Hal ini

dikarenakan flavonoid termasuk dari senyawa fenol. Bila fenol direaksikan

dengan basa akan terbentuk warna yang disebabkan terjadinya sistem

konjugasi dari gugus aromatik.

Pada uji monoterpen dan seskuiterpen, saat penambahan vanilin pada

sela sela dinding cawan penguap mengalami perubahan dari warna hijau

menjadi ungu yang menandakan daun kecubung mengandung senyawa

monoterpen dan seskuiterpen. Namun pada literatur, senyawa monoterpen

dan seskuiterpen tidak terkandung di dalam daun kecubung.

Pada uji steroid dan triterpenoid digunakan pereaksi Liebermann

Butchard. Uji warna Liebermann- Burchard (LB) berguna untuk mengetahui

adanya senyawa saponin baik triterpenoid maupun steroid. Pada pengujian

yang kami lakukan, daun kecubung tidak mengandung senyawa tersebut

karena pada saat penambahan pereaksi Liebermann Butchard tidak

memberikan perubahan warna.

Pada uji kuinon, sampel larutan daun kecubung yang diberikan KOH

5% tidak memberikan warna kuning kemerahan. Hal ini menunjukkan

bahwa daun kecubung negatif mengandung senyawa kuinon.

Setelah dilakukan penapisan fitokimia, simplisia daun kecubung

yang telah diserbukkan, diekstraksi secara maserasi dengan pelarut etanol.


57/68


Pelarut yang digunakan bukan air, karena maserasi dilakukan berhari-hari

dan air merupakan media yang baik untuk pertumbuhan mikroba. Ekstraksi

dilakukan dengan cara merendam simplisia pada wadah maserasi yang

sebelumnya dilapisi dengan kapas. Pelapisan dengan kapas bertujuan supaya

tidak ada serbuk simplisia yang terbawa saat akan dilakukan penampungan

maserat.

Penambahan pelarut pada hari kesatu sebanyak 2,1 liter, pada hari

kedua sebanyak 1,6 liter dan pada hari ketiga sebanyak 1,5. Pada hari

pertama penambahan pelarut lebih banyak daripada hari kedua dan ketiga,

karena pelarut menyerap pada kapas sehingga volume lebih banyak.

Maserasi dilakukan selama tiga hari, supaya senyawa yang terdapat

pada simplisia daun kecubung dapat tertarik secara sempurna. Setelah

simplisia direndam dengan pelarut etanol dan didiamkan selama 24 jam,

maserat ditampung kemudian dilakukan rotav terhadap maserat

menggunakan alat rotasi efavorator. Perotavan dilakukan hingga ekstrak

mengalami penurunan volume, setelah volume ekstrak berkurang, ekstrak

diuapkan diatas waterbath hingga didapatkan ekstrak kental. Persen

rendemen ekstrak etanol yang didapatkan adalah 12%.

Setetah menjadi ekstrak kental. Ekstrak dari hasil maserasi dibuat

menjadi fraksi dengan cara ekstraksi cair-cair. Metode ini dipilih karena

metode dapat dilakukan dalam skala mikro maupun makro, pemisahannya

tidak memerlukan alat khusus (hanya menggunakan corong pisah), metode

bersifat sederhana, dan proses pemisahan hanya memerlukan waktu yang

relatif singkat.

Pada metode ekstraksi cair-cair, ekstraksi dilakukan dengan kontinyu

atau dengan cara bertahap. Ekstraksi cair-cair dimulai dari fase non polar ke

fase semi polar dan terakhir ke fase polar. Hal ini bertujuan agar proses

ekstraksi berjalan sempurna.Apabila pemisahan dimulai dari fase polar ke

fase semi polar kemudian ke fase non polar, maka dikhawatirkan fase semi

polar akan ditemukan pada fase polar.


58/68


Ekstrak kental diencerkan dengan pelarut yang dipakai pada saat

maserasi yaitu etanol kemudian ditambahkan dengan pelarut polar yaitu air.

Ekstrak diencerkan dengan pelarut maserasi bertujuan agar zat mudah

bercampur dengan pelarutnya yaitu air. Apabila tidak diencerkan ekstrak

kental akan susah bercampur dengan air. Setelah terbentuk ekstrak air,

ekstrak ditambahkan dengan pelarut non polar (n-heksan) kemudian

dikocok dalam corong pisah.

Hasil pemisahan umumnya akan menghasilkan dua fase yaitu fase

polar (air) dan fase nonpolar (n-heksan). Fase air umumnya berada dibawah

hal ini dikarenakan bobot jenis air lebih berat dari pada nheksan. Pada saat

pengocokan, ekstrak tidak boleh dikocok terlalu kuat. Apabila terlalu kuat

maka akan terbentuk fase tambahan yaitu fase suspensi yang mana yang

tidak dapat lagi atau sukar sekali dipisah. Selain itu pada saat pengocokan

sekali-sekali keran corong dibuka. Hal ini bertujuan agar pada saat ekstraksi

tekanan di dalam corong tidak terlalu besar. Apabila tekanan di dalam

corong terlalu besar maka corong yang digunakan akan pecah. Ekstraksi

dengan pelarut nheksan dilakukan sampai warna hasil ekstraksi menjadi

jernih. Hasil ekstraksi yang jernih menandakan bahwa semua senyawa non

polar telah tertarik kedalam n-heksan. Semua fraksi n-heksan yang telah

didapat, disatukan kedalam satu wadah.

Fraksi air hasil ekstraksi dengan n-heksan kemudian dicampurkan

dengan etil asetat 100 ml. Hal ini bertujuan agar didapatkan senyawa semi

polar dan senyawa non polar. Senyawa semi polar akan tertarik dalam fraksi

etil asetat senyawa polar akan tertarik kedalam fraksi air. Proses ekstraksi

dilakukan sampai fraksi etil asetat menjadi jernih. Setelah jernih fraksi etil

asetat dan fraksi air di masukkan dalam wadah terpisah.

Fraksi air diuapkan diatas waterbath hingga terbentuk fraksi yang

kental. Sedangkan fraksi n heksan dan etil asetat di rotav terlebih dahulu

hingga volume fraksi menjadi setengahnya sebelum diuapkan. Fraksi di

rotav terlebih dahulu agar proses penguapan tidak memakan waktu yang

lama. Setelah selesai di rotav fraksi n heksan dan etil asetat diuapkan hingga


59/68


menjadi fraksi kental. Dalam proses penguapan perlu diingat bahwa suhu

yang digunakan dalam penguapan tidak boleh terlalu tinggi karena

dikhawatirkan senyawa senyawa yang tidak tahan panas akan ikut menguap

bersama pelarut.

Setelah diuapkan dari hasil dari tiap fraksi diuapkan, ditimbang dan

dihitung persentasi rendemen fraksinya. Hasil persentase rendemen yang

didapat sebesar 36,6 % ( fraksi n heksan) 24,71 % (fraksi etil asetat) dan

33,99% (fraksi air). Total persentase rendemen fraksinya adalah 95,3% .

Rendemen adalah persentase produk yang kita hasilkan dibanding

dengan bahan baku yang terolah. Jadi ekstraksi daun kecubung dengan

menggunakan metode ekstraksi cair cair memberikan perolehan produk

fraksi yang besar.

Setelah dillakukan ekstraksi, dilakukan identifikasi daun kecubung

dengan menggunakan metode kromatografi lapis tipis. Kromatografi Lapis

Tipis (KLT) adalah suatu teknik yang sederhana yang banyak

digunakan,metode ini menggunakan lempeng kaca atau lembaran plastik

yang ditutupi penyerap atau lapisan tipis dan kering. Perubahan warna yang

terjadi pada KLT adalah pada saat dilihat dibawah sinar UV 254nm dan 366

nm. Fase diam pada sebuah lempengan lapis tipis seringkali memiliki

substansi yang ditambahkan kedalamnya agar menghasilkan pendaran

flouresensi ketika dilihat dibawah sinar UV . Sehingga pada saat dilihat

dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 366nm, akan tampak spot.

Ketika memisahkan dua atau lebih senyawa melalui kromatografi,sangat penting untuk memilih pelarut yang benar sebagai fase gerak. Jika

terlalu lemah pelarut yang dipilih dari eluting, akan memakan waktu yang

sangat lama dan volume pelarut yang digunakan sangat besar untuk

mengelusi senyawa. Jika terlalu kuat pelarut yang dipilih dari eluting, semua

senyawa akan segera dielusi. Senyawa polar dengan mudah larut dalam

pelarut polar dan memiliki afinitas rendah untuk pelarut nonpolar. Senyawa


60/68


61/68


ekstrak tanaman. Pemilihan sistem pelarut yang sesuai untuk ekstrak

tanaman tertentu hanya dapat dicapai dengan menganalisa nilai Rf

senyawa pada sistem pelarut yang berbeda-beda. Dengan demikian

informasi ini dapat membantu untuk pemilihan sistem pelarut yang sesuai

untuk pemisahan senyawa lebih lanjut dari ekstrak tanaman.

Dari hasil percobaan dengan ketiga campuran eluen yang berbeda

didapatkan jarak totolan pada perbandingan eluen toluen:etil asetat = 3:7

adalah 2,6 cm sehingga Rf 0,5098. Berdasarkan literature diketahui bahwa

toluen adalah senyawa non polar dan etil asetat adalah senyawa polar,Silica yang merupakan fase diam bersifat polar.

Seharusnya, semakin rendah polaritas senyawa, semakin tinggi

afinitas untuk pelarut dan semakin besar nilai Rf. Namun pada percobaan

ini, fraksi yang bersifat non polar lebih tertarik ke fase gerak yang bersifat

paling non polar metode ini sesuai dengan prinsip like dissolve like.

Kesalahan yang terjadi pada praktikum ini disebabkan karena

beberapa hal. Diantaranya perhitungan dan pengukuran toluene dan etil

asetat yang digunakan sebagai eluen sehingga polaritas campuran berbeda.

Saat memasukkan campuran eluen, kemungkinan pelarut kurang

homogen, serta saat memasukkan pelarut ke dalam chamber kurang hati-

hati sehingga sebelum chamber ditutup pelarut ada yang menguap terlebih

dahulu. Kontaminasi dapat pula terjadi akibat pembilasan pipa kapiler

dengan etanol yang kurang sempurna sehingga mengkontaminasi fraksi

standar. Kesalahan juga dapat terjadi saat mentotolkan fraksi tidak dalam

kondisi yang benar-benar tegak sehingga terbentuk hasil noda yang

berbentuk lonjong yang seharusya bulat. Hal tersebut dapat mempengaruhi

nilai Rf yang didapatkan.

Setelah didapatkan satu spot pada pengujian KLT, dilakukan

langkah selanjutnya yaitu KLTP dengan tujuan untuk mendapatkan isolat

dari daun kecubung. KLTP dilakukan dengan pembuatan plat KLTP


62/68


terlebih dahulu. Plat KLTP yang dibuat dibuat dengan menggunakan kaca

yang berbentuk persegi dengan ukuran 20x20 cm. Bubur selulosa sebagai

fase diam dibuat dengan mencampurkan 10 gram silica gel G60 F254

dengan 20 ml aquadest. Bubur selulosa dicetak pada plat kaca, kemudian

didiamkan selama 24 jam.

Sebelum plat akan digunakan, plat diaktivasi terlebih dahulu

kedalam oven selama 30 menit pada saat yang bersamaan fase gerak yang

akan digunakan yaitu EA dan toluene dengan perbandingan 7 : 3

dijenuhkan terlebih dahulu selama 30 menit. Setelah sampel ditotolkanpada plat KLTP, plat di elusi sampai tanda batas kemudian spot yang

terbentuk diamati dibawah sinar UV 254nm dan 366nm. Spot yang

berwarna biru dipisahkan untuk diisolasi.

Tahap selanjutnya dilakukan kromatografi lapis tipis 2 dimensi

dengan tujuan untuk mengetahui dan memastikan kemurnian senyawa

yang terkandung pada isolat. Pada percobaan KLT 2 dimensi ini yang

perlu diperhatikan adalah saat melakukan penotolan ,harus serba hati-hati

jangan terlalu tebal dan jangan terlalu tipis. Penandaan pada plat KLT

mengunakan pensil dan tidak menggunakan bolpoint karena pada bolpoint

akan menganggu saat dicelupkan di fase gerak, tinta akan ikut masuk dan

menganggu pengamatan. Dari hasil percobaan pada saat dilakukan

pengembangan pertama dengan menggunakan fase geraknya EA : Toluen

( 7 : 3 ) pada plat KLT muncul 1 spot berwarna biru ketika dilihat dibawah

sinar UV-366 nm, kemudian pada proses pengembangan kedua plat KLTdi putar 90o dan setelah dielusi dengan menggunakan fase gerak EA :

Toluen ( 6 : 4 ) spot yang muncul pada pengembangan pertama terelusi

kembali pada pengembangan kedua dengan kepolaran yang berbeda dan

spot yang muncul sama seperti pada pngembangan pertama. Hal ini

menandakan bahwa kandungan senyawa yang terdapat dalam isolate telah

murni.


63/68


64/68


merupakan daerah gugus fungsi lentur C-H. Bilangan gelombang ()

968,27-802,39 cm-1 yang masuk kedalam rentang 1000-650 cm-1, yang

merupakan daerah gugus fungsi lentur C=C-H dan Ar-H.

Berdasarkan hasil spektrum yang didapat, dapat diinterprestasikan

bahwa daun kecubung memiliki gugus O-H, C-H, C=O, C=C dan Ar-H.

Gugus fungsi tersebut dimililiki oleh senyawa flavonoid. Senyawa

flavonoid mempunyai gugus fungsi inti C-H, C=O, C=C dan Ar-H. Hasil

spektrum yang didapatkan dari percobaan, terdapat gugus O-H. Flavonoid

dengan gugus fungsi tambahan O-H merupakan flavonol, flavonolol.Sehingga kemungkinan sampel daun kecubung mengandung senyawa

flavonol atau flavonolol.

Identifikasi Dan Isolasi Biji Lada Putih

Simplisia dapat digunakan untuk pengobatan bila simplisia tersebut

memiliki zat aktif berkhasit. Misalnya saja pada lada putih, salah satu

kandungan senyawa aktifnya adalah piperin. Piperin juga merupakan

kandungan utama dari beberapa genus Piper, misalnya Piper nigrum,

Piper cubeba, danPiperretrofractum. Piperin sering digunakan pada obat

tradisional dan juga digunakan sebagai insektisida.Piperin juga berkhasiat

sebagai antioksidan, antidiare.

Pada percobaan ini dilakukan penetapan kadar piperin dalam

simplisia, piperin yang diukur kadarnya adalah piperin dari simplisia lada

putih. Awalnya dilakukan ekstraksi biji lada putih dengan metode sokhlet

sederhana . Dalam proses soxhletasi pada percobaan ini, menggunakan

pelarut berupa etanol. Pelarut etanol digunakan untuk melarutkan zat yang

diinginkan dari dalam lada putih. Etanol digunakan karena baik piperin

maupun etanol memiliki kepolaran yang sama yaitu bersifat polar

sehingga etanol mampu melarutkan piperin sesuai dengan prinsip like

dissolved like. Dari literature diperoleh bahwa piperin merupakan senyawa


65/68


66/68


67/68


BAB V

KESIMPULAN

Dari percobaan yang kami lakukan pada simplisia daun kecubung (Datura

metelL.) disimpulkan bahwa:

1.

Senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalam daun kecubung

(Datura metel) ialah golongan polifenol, flavonoid, monoterpen dan

seskuiterpen, serta saponin.

2.

Maserasi merupakan metode ekstraksi dengan cara dingin.

3. Ekstraksi cair-cair dapat dilakukan pada tingkat mikro maupun makro.

4. Ekstraksi cair-cair umumnya dilakukan secara kontinyu atau bertahap.

5.

Ha

Documents

Penafisan Fitokimia (Autosaved) 2