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Consenso Internacional sobre Nomenclatura
Estandarizada de Patrones de Células HEp-2 de los
Anticuerpos (ICAP) 2014-2017 y Consenso sobre
nomenclatura en España (SEQC/SEI-GEAI)
Ángela Carrasco Sayalero F.E.A. en Inmunología
Servicio de Inmunología, Hospital Ramón y Cajal
Málaga 2017
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
SE DENOMINAN AC NATURALES A LOS AC QUE ESTAN PRESENTES EN EL SUERO DE INDIVIDUOS SANOS EN
AUSENCIA DE INMUNIZACION DELIBERDA DE CUALQUIER ANTIGENO, UNA GRAN MAYORIA DE AC NATURALES
REACCIONA CON UNO O MAS AUTO-ANTIGENOS Y SON DENOMINADOS AUTOANTICUERPOS NAURALES… ESTA
DEMOSTRADO QUE LOS AUTOANTICUERPOS REACTIVOS DE CELULAS «B» Y CELULAS «T» ESTAN PRESENTES EN
INDIVIDUOS SANO Y VIRTUALMENETE EN TODOS LOS VERTEBRADOS
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
ANA/Hep2
Hep2 son líneas de células tumorales epiteliales obtenidas de carcinoma de laringe humana, que se utilizan como sustrato antigénico estandarizado para la determinación de los anticuerpos antinucleares
ANA grupo heterogéneo de Auto-ac dirigidos frente antígenos localizados en el núcleo celular y citoplasma que se detecta en pacientes con diferentes EAS y especialmente las enfermedades del tejido conectivo (CTD) como prueba diagnostica
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Lisosomas
membrana plasmática Centriolo
microfilamentos mitocondria
Ribosomas ret. endoplásmico liso
núcleo
nucleolo
membrana nuclear ANTI-CELL PATTERNS
(AC)
Golgi
cromatina ret. endoplásmico rugoso
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
ANA EN LA PRÁCTICA CLÍNICA
Infecciones EMTC LES
APS
ANA SSc
+ Procesos
inflamatorios
Ancianos
SS CREST
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
ANA/IFI
• ANA mediante IFI es obligado en el diagnóstico de CTD según el Colegio Americano de Reumatología
• ANA mediante IFI es un marcador de inflamación inespecífico
• La IFI exige un tratamiento de la muestra individualizado e interpretación de resultado por expertos.
• La detección de ANA mediante IFI en HEp-2 es necesario ESTANDARIZAR
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Wiik AS. Proposal of partipants in the CANTOR project 2000
• Taxonomía y clasificación de 29 patrones IFI diferentes.
• Programa de «sofftware» DOORS.
• Lecturas de imagines digitalizadas de patrones Hep2 en un monitor LCD.
• Respaldado por proyecto CANTOR (UE) ( junio1998-julio2000)
• Consenso entre centros de expertos de inmunología clínica.
• Colaborar y lograr una versión para evaluar cualitativa y cuantitativamente el reconocimiento de imágenes.
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
The first Brazilian consensus for standardization of ANA in HEp-2 cells
Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial (2001) 38:207–16
3° Consenso Brasileiro para pesquisa de autoanticorpos em células HEp-2 Rev Bras Reumatol (2009) 49:89–109.
Padrões de PAAC-IFI em HEp-2, descrição, principais autoanticorpos associados e associações clínicas mais frequentes
Patrones/ Descripcion/ Relevancia clinica
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
First Argentine consensus for standardization of antinuclear antibodies by indirect immunofluorescence-HEp-2. Acta Bioquím Clín Latinoam (2012)
. Padrões de PAAC-IFI em HEp-2, descrição, principais autoanticorpos associados e associações clínicas mais frequentes
Consideraciones metodológicas para la calidad de los IFI, Recomendaciones técnicas , Patrón obligatorio
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Brazilian guidelines for autoantibodies on HEp-2 cells.
Rev Bras Reumatol (2014) 54:44–50. Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
ICAP
(Consenso internacional en patrones de anticuerpos antinucleares)
GRUPO DE TRABAJO PARA LLEGAR A UN CONSENSO SOBRE PATRONES MORFOLOGICOS OBSERVADOS EN LA IFI DE Hep2
• SE ESTABLECIO EN EL 12 SIMPOSIUM IWAA ( interantional workshop autoantibodies and autoimmunity) BRASIL 2014
• SE INSPIRO EN EL SISTEMA DE ESTRANDARIZACION DE PATRONES ANAs, CON 10 AÑOS DE HISOTIRA FORMADO POR MIEMBROS DE ASC ( comité de estandarización de anticuerpos ) IUIS (subcomité de la unión internacional de las sociedades de inmunología) y QAS (control de estandarización y calidad )
ICAP ACTUA COMO SUBCOMITE DE ASC
NIVEL DE MIEMBROS
• APORTAR IDEAS Y CONTRASTAR INICIATIVAS DE LA ICAP
• CORREGIR ERRORES PONTECIALES Y PROMOCIONAR LA IMPLANTAICON DE LA CLAISFICACION ICAP
• ESTAR AL IDA DE LAS ACTIVIDADES DE ICAP Y DESCARGARSE POSTER Y ARCHIVOS DE LA WEB DE ICAP
MIEMBROS PLENOS: COMITÉ EJECUTIVO DE ICAP
MIMBROS ASOICADOS : DESIGNACION DEL COMITÉ EJECUTIVO PARA CONSTRUIR MANTNER Y AVANZAR EN EL ICAP
MIEMBROS AFILIADOS : USUARIOS DE ICAP REGISTRADOS
QAS ( COMITÉ DE CONTROL DE ESTANDARIZACION Y CALIDAD)
• MANTENER EL APOYO AL SUBCOMITE EXISTENTE
• HACER PUBLICO LAS ACITVIDADES DE ESTNDARIZACION A TRAVES DE LA ORGANIZACIÓN DE SIMPOSIUM EN IUIS
• CONTRIBUIR CON ARTICULOS DE REVISON GENERAL EN LA REVISTA « FRONTIERS IN INMUNOLOGY»
• BUSQUEDA DE INVERSORES PARA INCREMENTAR ACTIVIDADES
2019 IUIS BEIJING ( CHINA) EN EL 17º CONGRESO INTERANCIONAL DE INMUNOLOGIA
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
El 1º ICAP Se crea el comité internacional de estandarización de patronas ANAs con una pagina web titulada ANApatterns.org con imágenes de patrones e información relacionada con cada patrón de ANA
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Nivel competente: Deben ser reconocidos fácilmente.
Clínicamente relevantes.
Nivel experto: Difíciles de reconocer
Nivel de experiencia considerable.
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Marcadores diagnósticos : E. Neurológicas , Miositis inflamatorias, E. Neuromusculares
Estandarización de Test de Anticuerpos ; IAS, ICAP
Valor de los Ac. a nivel de Predicción , Pronostico y Prevención
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
3º ICAP, oct del 2016, 13 IWAA EN Kyoto (Japan)
• PROMOCIONAR EL USO DEL GLOSARIO ANA-PATTERNES
• UTILIZAR NIVELES DE COMPETENTE Y EXPERTO EN LOS LABORATORIOS EN FUNCION DE SU
COMPLEJIDAD
• AUMENTAR TRADUCCIONES A TURCO, JAPONES Y ALEMAN EN LA WEB
• PROMOBER LA INCLUSION DE NUEVAS IMÁGENES
• NUEVOS SUSTRATOS PARA HEP2 ( INDUSTRIA)
• EDUCACION ON-LINE CON DIFERENTES NIVELES DE MODULOS
• CONSENSO EN INFORMES DE ANA
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
AC-1 2.1 Nuclear homogéneo Nuclear homogéneo
2.1.1
2.1.2
AC-2
NUEVO
AC-3 2.2.6 Patrón centromérico
Puntos discretos bastante uniformes localizados en
todo el núcleo (de 40 a 60 puntos por núcleo). Las
células en telofase y metafase siempre muestran estos puntos en el cinetocoro de los cromosomas, y
pueden reconocer varias proteínas centroméricas
(CENP-A, B, C, D, E).
Centrómero
GLOSSARIO PATRONES ANA-HEp2
ICAP 2016 Wiik AS (CANTOR project, 2000)
NUCLEARES
Nuclear homogeneous
Fluorescencia homogénea y regular a través de todo el
nucleoplasma, los nucléolos pueden o no fluorecer
dependiendo del sustrato celular. Las células en mitosis (metáfase, anáfase y telófase) tienen la
cromatina intensamente fluorescente de manera
homogénea.
Fluorescencia difusa uniforme cubriendo la totalidad del nucleoplasma. Se asocia con distintos anticuerpos,
principalmente dirigidos contra componentes
cromosómicos (DNA, histonas,…). Marcaje nucleolar homogéneo. En metafase y telofase, puede
observarse marcaje homogéneo o periférico de la
dsADN, histonas, nucleosomas Patrón nuclear homogéneo con nucléolos negativos.
Patrón nuclear homogéneo con marcaje nucleolar
homogéneo
LES, lúpus inducido por medicamentos, artritis idiopática
juvenil.
Nuclear granular fino denso
Nuclear dense fine speckled
Patrón granular distribuido por todo el núcleo de las células en interfase, con heterogeneidad en tamaño,
brillo y distribución de los gránulos. A lo largo del
núcleo en interfase, hay algunas zonas más densas y más débiles de los gránulos (rasgo muy
característico). La placa metafásica muestra un fuerte
patrón granular destacándose algunas manchas
DFS70/LEDGF
Raro en SSj, ES y LES
Centrómero
Centromere
Granular grueso discreto (40-80/célula) dispersos en
los núcleos de las células en interfase y alineados en la masa de la cromatina en las células mitóticas. Por
ejemplo anti-CENP-B
CENP-A/B (C)
ES cutánea limitada, CBP
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DFS 70/LEDGFp75
Clinica Técnica %
Cistitis Intersticial IFI WB 9
Dermatitis atópica IFI WB ELISA 16 – 38
Dermetitis atópica
con cataratas
IFI WB ELISA 100
Alopecia Areata IFI WB ELISA 19,8
Vogt-Koyanagi-
Harada
ELISA 66,7
Behcet ELISA 34,4
Asma IFI WB 16
ANA + IFI 7,8- 38
Robert L.Ochs et al. Clin Exp Med (2016) 16: 273-293
Anti DFS 70 en diferentes grupos de pacientes
Proteína relacionada con la respuesta al Stress Radiación UV Peróxido de Hidrogeno Alcohol .. SIDA, Cáncer, inflamación..
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Autoimmun Highlights (2016)
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4ªICAP, Sep26 2017, 13º Simposio de Autoanticuerpos Dresden ( Alemania)
• ESTABLECER GUIA DE RECOMENDACIONES Y UTILIDAD CLINICA DE AC-1 a AC-14 P. Nuclear y AC-15 a AC-23 P.
Citoplasmático
• ESTABLECESR 2 NUEVOS PATRONES AC- 0 NEGATIVO y AC- 29 DNA-TOPOISOMERASAS, DESCRIPCION Y
RELEVANCIA CLINICA
• DESARROLLAR CONSENSO DE INFORMES ANA CON PATOLOGIA
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
AC-0 SE CONSIDERA NEGATIVO CUANDO NO EXIXSTE ESTRUCTURAS CELULARES CLARAMENTE DEFINIDAS Y DELIMITADAS (SUBJETIVO Y SEMICUANTITATIVO)
IMPORTANTE EL TIPO DE SUSTRATO UTILIZADO POR LOS DISTINTOS LABORATORIOS FABRICANTES Y LOTES , DILUCION DE SUERO, CONJUGADO, Y CARACTERISTICAS DE MICOROSCOPIO Y CAMARA
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AC-29
Sinónimo : Scl-70-like
Antígeno asociado: DNA topoisomerasa I
Descripción subcelular: Patrón Topo I-like, ( se observan 5 regiones subcelulares)
1.Punto fino prominente tipo AC-4.
2. Cromatina en células mitóticas.
3. NORs .
4. Citoplasma debil en C.interfase y mitóticas.
5. Nucleolar en células en interfase.
Diagnostico
Afectación cutánea asociada o difusa
Esclerosis Sistémica 30%
LES
Autoimmun Rev.2013;12:340-54
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
EASI Actividades European Autoimmunity Standardisation Initiative (2002)
OPTIMIZAR LA COMUNICACION ENTRE CLINICOS Y ESPECIALISTAS DE LABORATORIO
• PREGUNTAS Y RECOMENDACIO EN DE EASI
• PRACTICA CLINICA DE LOS CUESTIONARIOS DE ANA, RF, ACPA
• CONSENSO INTERANCIONAL DEL “TEST“ DE ANCA
• PROYECTOS LOCALES DE LOS 15 GRUPOS QUE FORMAN PARTE DE EASI
• APOYO EN LA CERTIFICACION DE LABORATORIO
ARMONIZAR & ESTANDARIZAR
• EN EL PROCESO DE PREPARCION DE ESTANDARES PARA MAXIMIZAR LAS COMPATIBILIDADES DE LOS RESULTADOS Y TENDER A LA UNIFORMIDAD DE RESULTAODS
• ARMONIZAR Y AJUSTAR DIFERENCIAS ENTRE METODOS DE MEDIDA Y PROCEDIMIENTOS, HACERLOS MAS UNIFORMES Y COMPATIBLES (RECOMENDACIONES Y/O GUIAS )
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
LOS RESULTADOS HAN SIDO POSIBLE ARMONIZARSE POR RECOMENDACIONES Y CONSENSO
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OPTIMIZAR COMUNICACIÓN : SIMPOSIUM DRESDEN EN AUTOANTICUERPOS CONGRESO INTERANCIONAL DE AUTOINMUNIDAD LIBROS : GUIA PRACTICA DEENFERMEDADES AUTOINMNES (INGLES 2012/ ALEMAN 2014/ RUSO 2017)
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
GEAI
Grupo español de enfermedades autoinmunes
Constituye una red de cooperación entre especialistas
implicados en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades autoinmunes. Coordina iniciativas y realiza proyectos comunes destinados a expandir el conocimiento de estas enfermedades y mejorar la
calidad de la atención a los pacientes.
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
ACTIVIDADES DE GEAI
• TRABAJOS MULTICENTRICOS
• COMITES DE EXPERTOS ( EAS, TRATAMIENTO CON INMUNOGLOBULINAS,MIOSISTIS)
• TALLERES NACIONALES (Patologías Autoinmunes e Imágenes por IFI)
• CURSOS DE FORMACION, MESAS REDONDAS
• FORO DE DEBATES Y DUDAS
• DIRECTORIO DE LABORATOIRIOS DE REFERENCIA PARA DETERMINACIONES POCO FRECUENTES
• ESTUDIOS EUROPEOS( EASI)
Método y valoración clínica para informar los ANA, ENA, anti-ds DNA (según informe Delphi)
Determinación, Interpretación, Especificidad de Auto-Ac
Estudio de ANCAs (MPO,PR3)
• REFERENTE EN GUIAS CLINICAS
• EDICION
Monografías
Casos clínicos en autoinmunidad
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
CONCLUSIONES
Promover el uso del «Consenso Internacional sobre nomenclatura estandarizada de Patrones de células Hep2»
Utilizar los algoritmos de consenso internacionales para el diagnóstico de enfermedades autoinmunes
Establecer objetivos para armonizar y consensuar guías que compartan criterios internacionales
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