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Annales d’Endocrinologie 75 (2014) 270–272

SFE Lyon 2014Communications orales SFE

Gonades – Reproduction�

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Mutation of palmitoylation site of EstrogenReceptor ER alpha in vivo revealstissue-specific roles for membrane versusgenomic effects of estrogensM. Adlanmerini a,∗, R. Solinhac (Dr) a,∗, A. Abot (Dr) a,∗, A. Fabre (Dr) a,∗,I. Raymond-Letron (Dr) b, F. Boudou a, S.H. Kim (Dr) c, P. Lière (Dr) d,C. Fontaine (Dr) a, A. Krust (Dr) e, P. Chambon (Pr) e,J.A. Katzenellenbogen (Dr) f, P. Gourdy (Dr) a, P.W. Shaul (Dr) g,D. Henrion (Dr) h, J.F. Arnal (Dr) a, F. Lenfant (Dr) a

a INSERM U1048, Université de Toulouse, Toulouseb ENVT, Université de Toulouse, Toulousec Department of Chemistry, University of Illinois, Urbana, Illinoisd INSERM-Université Paris Sud, Parise Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Collège deFrance, Université de Strasbourg, Strasbourgf Department of Chemistry, University of Illinois, Urbana, Illinoisg Department of Pediatrics, University of Texas Southwestern Med. Ctr, Dallash CNRS UMR 6214, Université d’Angers, Angers∗ Corresponding authors.E-mail address: marine.adlanmerini@gmail.com (M. Adlanmerini)

Introduction Estradiol (E2) binds to Estrogen Receptor alpha (ER�) activa-tion functions (AF-1 and -2) and regulates gene transcription. A fraction of ERais targeted to plasma membrane and elicits membrane-initiated steroid signalling(MISS) but its physiological role has never been directly investigated in vivo.Methods We thus generated a mouse mutated for the palmitoylation site(C451A-ER�) by homologous recombination, leading to an abrogation of mem-brane localization of ER�.Results Surprisingly, this single mutation leads to total female infertility withabnormal ovaries lacking corpus luteum and hence low progesterone production.However, E2 proliferative action was completely preserved in the uterus ofC451A-ERa mutant mice and endometrial epithelial proliferation was similarto wild-type. On the opposite, E2 vascular effects, such as rapid dilatation,acceleration of endothelial healing and endothelial NO synthase phosphorylationwere abrogated in arteries of C451A-ERa mice.In striking contrast, in mice inactivated for genomic effects (ERa-AF2◦),acceleration of re-endothelialization using membrane-selective activatorestrogen-dendrimer conjugate (EDC) was preserved, demonstrating the integrityof the MISS actions in ERa-AF2◦. Using a large scale analysis of uterine geneexpression, almost all uterine E2-dependent gene expression was abrogated inERa-AF2◦, whereas in C451A mice, gene regulation was essentially similar to

� Résumés présentés lors du 31e Congrès de la Société francaised’Endocrinologie Lyon 2014.

wild-type, revealing that this uterine transcriptional response depends primarilyon genomic/nuclear functions of ER�.Conclusion These models provide evidence for the first time of the physio-logical role of MISS effects of ER� in vivo and delineate tissue specific rolesof membrane and nuclear actions of ER�.

Disclosure of interest The authors have not supplied their declaration ofconflict of interest.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.062

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R-spondin 2, un acteur de la physiologieovarienne : recherche de variants dans unecohorte de patientes atteintes d’insuffisanceovarienne primaireS. Barraud a,∗, J. Bouilly (Dr) a, V. Bernard (Dr) a, A.C. Hécart (Pr) b,B. Delemer (Pr) b, J. Young (Pr) c, N. Binart (Dr) a

a INSERM U693, Université Paris-Sud, Le Kremlin-Bicêtre, LeKremlin-Bicêtre, Franceb CHU de Reims, Hôpital Robert Debré, Serviced’Endocrinologie-Diabète-Nutrition, Reims, Francec AP–HP, hôpital de Bicêtre, Service d’endocrinologie et des maladies de lareproduction, INSERM U693, Université Paris-Sud, Le Kremlin-Bicêtre, LeKremlin-Bicêtre, France∗ Auteur correspondant.Adresse e-mail : sara.barraud@gmail.com (S. Barraud)

La folliculogenèse est un phénomène complexe continu, marqué par une suc-cession d’étapes mal comprises, un défaut de l’une d’entre elles peut conduireà l’Insuffisance Ovarienne Primaire (IOP). Une des multiples causes d’IOPest l’identification de mutations du gène codant Newborn Ovary Homeobox(NOBOX). Son invalidation chez la souris conduit à une infertilité due à larépression de plusieurs gènes de la folliculogenèse dont le ligand R-spondin 2(Rspo2). Rspo2 active la voie Wnt et joue un rôle clé dans la maturation ovocy-taire. Les souris Rspo2–/– meurent à la naissance mais les Rspo2+/– deviennentinfertiles vers l’âge de 4 mois représentant un bon modèle d’IOP. Nous avonsidentifié in silico trois éléments putatifs de liaison de NOBOX dans le promo-teur humain de RSPO2 que nous avons cloné. Afin de valider RSPO2 commeune nouvelle cible de NOBOX des essais transcriptionnels sont en cours. Parailleurs, nous avons recherché des mutations de RSPO2 dans une cohorte de108 patientes présentant une IOP idiopathique, sans prémutation de FMR1 oud’anomalie du caryotype. Seuls des polymorphismes connus ont été identifiés etretrouvés dans les cohortes contrôles du 1000 Genomes et de l’Exome VariantServer à des fréquences élevées. Malgré l’haploinsuffisance de Rspo2 respons-able de l’infertilité chez la souris, nos données suggèrent que les mutations dece facteur ne sont pas une cause fréquente de la pathologie humaine. Il serait

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souhaitable de poursuivre la recherche de mutations potentielles de ce gène surde plus grandes cohortes.

Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-flits d’intérêts.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.063

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Rôle de Foxl2 dans la maturation et lafonction utérineB. Bellessort a,∗, A. Bachelot (Dr) b, M. Le Cardinal a, M. Treier (Pr) c,G. Levi (Pr) a

a MNHN, CNRS, Paris, Franceb Groupe hospitalier Pitié-Salpetrière, Paris, Francec Université de Cologne, Cologne, France∗ Auteur correspondant.Adresse e-mail : bellessort@mnhn.fr (B. Bellessort)

Contexte Foxl2 est un facteur de transcription forkhead/HNF3 essentiel dansla maturation folliculaire et le maintien de la fonction ovarienne. Des mutationsdans le gène codant pour FOXL2 sont responsablesdu syndrome Blépharophimo-sis, ptosis, épicanthus inversus, caractérisé par des malformations des paupièresassocié, dans certaines formes, à une insuffisance ovarienne précoce. Des don-nées préliminaires ont montré la présence de Foxl2 dans l’utérus chez la souris.Objectif Caractérisation de la fonction de Foxl2 dans l’utérus de souris aucours du développement.Matériel et méthodes Le profil d’expression de Foxl2 a été réalisé grâce auxsouris Foxl2LacZ/+ et par IHC. L’inactivation spécifique de Foxl2 dans l’utérus aété réalisé par croisement des souris invalidée pour Foxl2 avec une lignée por-teuse du gène de la recombinase-cre sous le contrôle du promoteur du récepteurà la progestérone.Résultats Les souris femelles adultes Foxl2Δ/Δ ;Pgrcre/+ sont infertiles. Dansl’utérus, Foxl2 est observé dès la naissance dans les cellules mésenchymateuses.A maturité, l’expression de Foxl2 persiste dans la couche stromale différen-ciée, mais plus dans le myomètre. À 6 et 15 jours après la naissance, les sourisFoxl2Δ/Δ ;Pgrcre/+ présentent une hypertrophie et une désorganisation de lacouche myométriale interne et une diminution spectaculaire de la couche stro-male. À 25 jours, et chez l’adulte, les vaisseaux sanguins de la couche stromalesont anormaux.Discussion Nos données suggèrent que Foxl2 a un rôle crucial dans la matu-ration postnatale du mésenchyme utérin et dans l’implantation et pourrait fournirdes pistes pour mieux comprendre certaines pathologies de la réceptivité utérinechez la femme.

Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-flits d’intérêts.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.064

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Devenir à long terme des patientes ayant uneinsuffisance ovarienne primaire : une étudelongitudinaleA. Bachelot (Dr) ∗, C. Nicolas (Dr) , S. Gricourt (Dr) , J. Dulon ,J.L. Golmard (Dr) , P. Touraine (Pr)Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière, Paris, France∗ Auteur correspondant.Adresse e-mail : anne.bachelot@psl.aphp.fr (A. Bachelot)

Contexte L’insuffisance ovarienne primaire (IOP) est à l’origine d’unecarence hormonale et d’une infertilité. Le devenir des patientes et le retentisse-ment de la maladie à long terme ne sont pas connus.Objectif Étude longitudinale d’une cohorte de patientes avec IOP au mini-mum 5 ans après leur premier bilan.Patients et méthodes Evaluation des patientes avec IOP en terme de suivimédical, prise de traitement hormonal substitutif (THS), étude de la densitéminérale osseuse (DMO) et réalisation d’un projet parental.Résultats Sur la cohorte de 542 patientes, 103 patientes ont été réévaluées.L’âge moyen au bilan de suivi était de 37,1 ± 0,1 ans. Le suivi était de

7,43 ± 3,1 ans. Soixante neuf patientes (57 %) avaient arrêté leur THS pendantplus d’un an au cours de la période de suivi, du fait de l’absence de bénéficedirect ressenti de celui-ci. Une altération de la DMO au cours du suivi était notée,avec une ostéopénie chez 59 % et une ostéoporose chez 6 % des patientes. Enanalyse univariée et multivariée, l’arrêt du THS était un facteur indépendant sig-nificativement associé à la diminution de la DMO (p = 0,007). Un projet parentalavait abouti chez 35 des 84 couples ayant ce projet (10 grossesses spontanées,18 après don, 8 enfants adoptés).Discussion . Cette première étude longitudinale de patientes avec IOP met enévidence la faible adhésion des patientes à leur THS, et l’importance de celui-cidans la prévention de la déminéralisation osseuse. Un suivi spécialisé à longterme est donc primordial, afin de prévenir les conséquences de cette maladie.

Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-flits d’intérêts.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.065

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Caractérisation fonctionnelle de 6 variantsoriginaux de KISS1R dans une cohorte de640 patients atteints d’hypogonadismehypogonadotrope congénital isoléC. Paul a,∗, B. Francou (Dr) a, F. Brioude (Dr) b, M.L. Raffin-Sanson c,M. Lombès d, A. Guiochon-Mantel e, J. Young f, J. Bouligand g

a Inserm, U693, Faculté de médecine Paris Sud., Le Kremlin-Bicêtre, Franceb AP–HP, Explorations fonctionnelles, Hôpital Trousseau, Paris, Francec AP–HP, Service d’endocrinologie diabétologie, GHU Paris Ile-de-FranceOuest, Hôpital Ambroise-Paré, Boulogne, Franced U693, Faculté de médecine Paris Sud, Le Kremlin-Bicêtre, Francee AP–HP, Service de Génétique Moléculaire, Pharmacogénétique etHormonologie, Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, LeKremlin-Bicêtre, Francef AP–HP, Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction,Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, Franceg AP–HP, Service de Génétique Moléculaire, Pharmacogénétique etHormonologie Hôpitaux universitaires Paris Sud, Hôpital Bicêtre, LeKremlin-Bicêtre, France∗ Auteur correspondant.Adresse e-mail : paulcharlotte50@hotmail.com (C. Paul)

Les hypogonadismes hypogonadotropes congénitaux (HHC) entraînent uneabsence de puberté et une infertilité. Le gène KISS1R code KISS1R, récep-teur à 7 domaines transmembranaires couplé à la protéine Gq. Son ligand estla kisspeptine (Kp10). Des pertes de fonction du récepteur et du ligand ont étéidentifiées dans de rares cas d’HHC normosmiques selon un mode de transmis-sion récessif. Nous avons séquencé 640 patients HHC de la cohorte du serviced’Endocrinologie du Kremlin Bicêtre et identifié 23 variants originaux (18 faux-sens, 3 non-sens, 2 épissages). De plus, une étude génétique large par séquencagemoyen débit des gènes impliqués dans les HHC a identifié 10 patients porteursd’un seul variant hétérozygote de KISS1R. Nous rapportons ici la caractérisa-tion fonctionnelle de 8 variants identifiés (5 faux-sens, 2 non-sens) de KISS1Rretrouvés dans 6 familles. Ces variants de KISS1R créés par mutagénèse dirigéepuis transfectés dans des cellules HEK293 T, ont été évalués après stimulationpar Kp10 en étudiant deux approches complémentaires : la cinétique de phos-phorylation de ERK1/2 par western blot et des courbes doses-réponses d’ungène rapporteur luciférase. Quatre variants déjà caratérisés ne montrent aucunetransduction du signal. Notre travail est indispensable pour valider l’implicationde différents variants de KISS1R identifiés chez des patients atteints d’HHC,établir une prévalence fiable des mutations de KISS1R et étudier finement lescorrélations génotype/phénotype. D’un point de vue fondamental, les mutationsétant situées sur différents domaines du récepteur, cette étude permettra ausside préciser les relations structure/fonction.

Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de con-flits d’intérêts.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.066