Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme sous les tropiques

Perspectives :Perspectives :

Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme

sous les tropiquessous les tropiques

Elisabeth Elisabeth RavaoarisoaRavaoarisoa, , PhDPhD studentstudent

Avec le concours de Milijaona Avec le concours de Milijaona RandrianarivelojosiaRandrianarivelojosia, , PhDPhD, HDR, HDR

88èèmeme éédition du Cours international Atelier Paludismedition du Cours international Atelier Paludisme

Institut Pasteur de Madagascar, 22/03/2011Institut Pasteur de Madagascar, 22/03/2011

Test de Diagnostic Rapide du paludismeTest de Diagnostic Rapide du paludisme

• Diagnostic biologique, clé de la gestion du paludisme

• Test de Diagnostic Rapide (TDR) : facile à réaliser, pas de besoin particulier en formation ni en matériels spécifiques

• Utilisation d’anticorps monoclonaux pour la détection d’antigènes parasitaires

• 10 à 20 min avec la possibilité de lancer plusieurs tests à la fois

TDR du paludisme : TDR du paludisme : immunocaptureimmunocapture

Adapté de Bell D et al. 2006

TDR du paludisme : qualitTDR du paludisme : qualitéé

• Manufacture ?

• Transport et stockage ?

• Conduite du test et interprétation ?

Contrôle de Qualité (CQ) des TDR

essentiel

Contrôle de qualitContrôle de qualitéé des TDR des TDR

avant la dissavant la disséémination sur le terrainmination sur le terrain

TDR du paludisme : contrôle de qualitTDR du paludisme : contrôle de qualitéé

• Evaluation du seuil de détection des TDR (sensibilité) avantla dissemination sur le terrain (seuil habituel : 200 parasites/µl)

• Utilisation des aliquots standards calibrés

> Test initial: dans les 5 jours suivant la réception

> Test à long terme: tous les 3 mois durant le stockage

Methods Manual for Laboratory Quality Control Testing of Malaria RDTs, version six, WHO/FIND, June 2010


• Test initial pour SD Bioline (2 lots )

détection de HRP-II spécifique de P. falciparum

et pLDH pan-spécifique.

• Réalisation du test initial selon SOP 3.12





• Seuil de détection de la protéine HRP-II correcte

• Seuil de détection de l’enzyme pLDH:

P. falciparum ? (détection à 200 parasites/µl=0)

P. vivax > 500 parasites/µl

Contrôle de qualité des TDR

après la dissémination sur le terrain


Evaluation de la sensibilité de TDR CareStart™ comparée à la

microscopie, la PCR et RT-PCR

Réalisation des TDR sur le terrain

Prélèvements sanguins positifs acheminés en chaîne de froid

TDR refaits à l’URP

Confection des frottis et lecture par un microscopiste référant

PCR et RT-PCR au laboratoire


• Lecture des frottis épais et mince

Lecture à l’aveugle par un microscopiste référant

Estimation de la parasitémie sur 500 leucocytes lus

Relecture en cas de discordance

• Detection des 4 espèces plasmodiales (Snousnou G et al. 1993; Mangold KA et

al. 2005)

Mangold KA et al. 2005

Diagnostic par PCR : illustrationDiagnostic par PCR : illustration

TDR utilisé à Madagascar actuellement : CareStart™

Sur 231 isolats positifs par TDR selon les résultats du centre de santé :

11/231 (4,7%) négatifs par TDR au laboratoire

46/231 (19,9%) négatifs par microscopie

30/231 (13%) négatifs par PCR

24/201 (12%) infection mixte (P. falciparum + P. vivax) par PCR

19/231 (8,2%) négatifs par Real Time-PCR

Contrôle des rContrôle des r éésultats de TDRsultats de TDR : illustration: illustration

Quels types de TDR à utiliser?

QuantitQuantitéé de TDR de TDR àà utiliser?utiliser?

Elimination du paludisme

Diminution de la prévalence (fièvre ≠ paludisme)

Diminution du contact homme-parasite

Charge parasitaire faible = accès grave

⇒ Diagnostic par TDR avant traitement (tous les groupes d’ âges)

- Taux de couverture en TDR?

- Traitements des patients asymptomatiques et symptomatiques?

Type de TDR Type de TDR àà utiliser ?utiliser ?

Détection de HRP-II

Persistance , faux positif

Test basé sur HRP-II non pratique pour le suivi des traitements

⇒ A prendre ou à laisser?

- Peut être bénéfique dans les zones hypoendémique

- Test positif en HRP-II avec microscopie négative signifie t-il parasitémie

initiale, tendance au neuro-paludisme ou risque de recrudescence?

- Traitement des patients HRP-II positif , gaspillage des ACT? Or réduction

de la prévalence en paludisme, nombre d’ACT non utilisés?

Type de TDR Type de TDR àà utiliser?utiliser?

Détection de pLDH

Témoin de la viabilité des parasites

Pratique pour le suivi des traitements

⇒ A prendre ou à laisser?

- Bénéfice pour le malade dans détection précoce de la recrudescence

- Seuil de détection?

- Efficacité dans le suivi des traitements, présence des gamétocytes = non

détection pLDH?

TDR de demain?TDR de demain?

Qualité des tests importants

Balance entre les avantages et les limites

Apport de la recherche

Adhésion de tous dans l’efficacité et l’utilisation des TDR

Accès aux diagnostics et soins pour tous

Nouvelles gNouvelles géénnéérations de TDR plus sensibles, plus rations de TDR plus sensibles, plus spspéécifiques, plus robustes pour rcifiques, plus robustes pour réésister aux conditions sister aux conditions rrééelles dans les sites delles dans les sites d’’utilisations (humiditutilisations (humiditéé, chaleur), chaleur)

Perspectives :Perspectives :

Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme

sous les tropiquessous les tropiques

Elisabeth Elisabeth RavaoarisoaRavaoarisoa, , PhDPhD studentstudent

Avec le concours de Milijaona Avec le concours de Milijaona RandrianarivelojosiaRandrianarivelojosia, , PhDPhD, HDR, HDR

88èèmeme éédition du Cours international Atelier Paludismedition du Cours international Atelier Paludisme

Institut Pasteur de Madagascar, 22/03/2011Institut Pasteur de Madagascar, 22/03/2011

Documents

Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme sous les tropiques