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UNIVERSITA' DEGLI STUDI DI TRIESTEUNIVERSITA' DEGLI STUDI DI TRIESTE
Dipartimento di Scienze della Riproduzione e dello SviluppoU.C.O. di Ginecologia ed OstetriciaDirettore: Prof. Secondo Guaschino
DottorandaDottoranda Dott. ssa STEFANIA INGLESE Dott. ssa STEFANIA INGLESE
Tutor: Tutor: Dott.ssa MONICA PICCOLIDott.ssa MONICA PICCOLI
FATTORI GENETICI COINVOLTI NEL PARTO PRETERMINE , FATTORI GENETICI COINVOLTI NEL PARTO PRETERMINE ,
NELLA PREECLAMPSIA E NEL RITARDO DI CRESCITA NELLA PREECLAMPSIA E NEL RITARDO DI CRESCITA
INTRAUTERINO: ANALISI DEI POLIMORFISMI GENICI CHE INTRAUTERINO: ANALISI DEI POLIMORFISMI GENICI CHE
CARATTERIZZANO LA RISPOSTA IMMUNITARIA INNATACARATTERIZZANO LA RISPOSTA IMMUNITARIA INNATA
IL SISTEMA IMMUNITARIOIL SISTEMA IMMUNITARIO
INNATO:INNATO: ACQUISITO:ACQUISITO:
•PEPTIDIPEPTIDI•via alternativa del COMPLEMENTOvia alternativa del COMPLEMENTO•FAGOCITIFAGOCITI
•LINFOCITI LINFOCITI
TT
•LINFOCITI LINFOCITI
BB
•LINFOCITI T ATTIVATILINFOCITI T ATTIVATI
•LINFOCITI B ATTIVATILINFOCITI B ATTIVATI
prostaglandine
IL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZAIL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZA
PARTO PARTO PRETERMINEPRETERMINE
IL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZAIL SISTEMA IMMUNITARIO E LA GRAVIDANZA
PREECLAMPSIAPREECLAMPSIA IUGRIUGR
LA GRAVIDANZA COMPORTA L’INTERAZIONE TRA TESSUTI LA GRAVIDANZA COMPORTA L’INTERAZIONE TRA TESSUTI ANTIGENETICAMENTE DIFFERENTIANTIGENETICAMENTE DIFFERENTI
È NECESSARIA UN’ADEGUATA OMEOSTASI IMMUNOLOGICA È NECESSARIA UN’ADEGUATA OMEOSTASI IMMUNOLOGICA
PER CONSENTIRE L’IMPIANTO E UN’ADEGUATA PER CONSENTIRE L’IMPIANTO E UN’ADEGUATA
PLACENTAZIONEPLACENTAZIONE
ABORTOABORTO
IL SISTEMA IMMUNITARIO INNATO E LA IL SISTEMA IMMUNITARIO INNATO E LA GRAVIDANZAGRAVIDANZA
ATTIVAZIONE DEI ATTIVAZIONE DEI GRANULOCITI GRANULOCITI
MBL MBL (140%)(140%)
•ATTIVAZIONE DEL COMPLEMENTOATTIVAZIONE DEL COMPLEMENTO•OPSONIZZAIONEOPSONIZZAIONE
L’ evidenza:L’ evidenza:
Il deficit di MBL è associato ad aborto Il deficit di MBL è associato ad aborto ricorrentericorrente
ATTIVAZIONE DEL ATTIVAZIONE DEL SISTEMA IMMUNITARIO SISTEMA IMMUNITARIO
INNATOINNATO
PREECLAMPSIAPREECLAMPSIA
IUGRIUGR
ABORTOABORTO
PARTO PARTO PRETERMINEPRETERMINE
METODIMETODIDISEGNO DELLO DISEGNO DELLO
STUDIO:STUDIO:STUDIO CASO-CONTROLLO ANNIDATO IN STUDI DI STUDIO CASO-CONTROLLO ANNIDATO IN STUDI DI
COORTE IN CORSO PRESSO L’ISTITUTOCOORTE IN CORSO PRESSO L’ISTITUTO
POPOLAZIONE:POPOLAZIONE:
TUTTE LE DONNE CHE AFFERISCONO AL SERVIZIO DI TUTTE LE DONNE CHE AFFERISCONO AL SERVIZIO DI DIAGNOSI PRENATALE IN OCCASIONE DELL’ECOGRAFIA DEL DIAGNOSI PRENATALE IN OCCASIONE DELL’ECOGRAFIA DEL PRIMO TRIMESTRE E CHE PARTORIANNO PRESSO QUESTO PRIMO TRIMESTRE E CHE PARTORIANNO PRESSO QUESTO
ISTITUTOISTITUTO(3000 pz)(3000 pz)
METODIMETODICASI:CASI:•Parto pretermine spontaneo (<34 settimane)Parto pretermine spontaneo (<34 settimane)
•Aborto spontaneo tardivo (12-24 settimane); morte Aborto spontaneo tardivo (12-24 settimane); morte endouterina (>24 settimananeendouterina (>24 settimanane
•Preeclampsia (PA >140-90 mmHg + proteinuria >300 Preeclampsia (PA >140-90 mmHg + proteinuria >300
mg/24h)mg/24h)
•Ritardo di crescita (peso alla nascita < 10° centile; Ritardo di crescita (peso alla nascita < 10° centile; deflessione ecografica della curva di crescita > 50 centili) deflessione ecografica della curva di crescita > 50 centili)
•Pazienti inviate da ospedali periferici al momento di Pazienti inviate da ospedali periferici al momento di esordio di patologia ostetrica: preeclampsia, minaccia di esordio di patologia ostetrica: preeclampsia, minaccia di parto pretermine, IUGRparto pretermine, IUGR
(150 pz)(150 pz)
(15 pz)(15 pz)
(100 pz)(100 pz)
(300 pz)(300 pz)
CONTROLLI:CONTROLLI:•Soggetti con decorso fisiologico della gravidanza fino al Soggetti con decorso fisiologico della gravidanza fino al
terminetermine
METODIMETODI
RACCOLTA DATI:RACCOLTA DATI:
•Consenso informatoConsenso informato
•Prelievo di sanguePrelievo di sangue
•Tampone vaginaleTampone vaginale
•Scheda clinico-Scheda clinico-
anamnesticaanamnestica
1. Al reclutamento1. Al reclutamento2. Dopo il 2. Dopo il
partoparto
•Tampone buccale Tampone buccale
neonataleneonatale
•Esame istologico della Esame istologico della
placentaplacenta
CRITERI DI CRITERI DI ESCLUSIONE:ESCLUSIONE:
Malformazioni fetali, anomalie Malformazioni fetali, anomalie cromosomichecromosomiche
Il sangue materno verrà in parte sottoposto Il sangue materno verrà in parte sottoposto all’estrazione del DNA, in parte conservato come all’estrazione del DNA, in parte conservato come banca di DNA genomico potenzialmente utilizzabile banca di DNA genomico potenzialmente utilizzabile in ricerche futurein ricerche future
METODIMETODI
ESTRAZIONE DEL DNA:ESTRAZIONE DEL DNA:
Sistema Custom Golden-Gate Genotyping: reazione di Sistema Custom Golden-Gate Genotyping: reazione di
estrazione allele specifica iniziale seguita da una reazione di estrazione allele specifica iniziale seguita da una reazione di
amplificazione mediante PCRamplificazione mediante PCR
165 GENI 165 GENI implicati a vari implicati a vari livelli nella risposta livelli nella risposta immunitaria innataimmunitaria innata
1536 1536 SNPsSNPs
ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI1.1. Suddivisione in gruppi per l’identificazione degli Suddivisione in gruppi per l’identificazione degli
specifici SNPs eventualmente associati ai singoli specifici SNPs eventualmente associati ai singoli
esiti in studio (parto esiti in studio (parto
pretermine, preeclampsia, IUGR);pretermine, preeclampsia, IUGR);
2.2. In ciascun gruppo, esclusione di casi imputabili a In ciascun gruppo, esclusione di casi imputabili a
cause note di quel determinato esito;cause note di quel determinato esito;
3. In ciascun gruppo, analisi multivariata in base alla 3. In ciascun gruppo, analisi multivariata in base alla
presenza di fattori di rischio aggiuntivi, noti per presenza di fattori di rischio aggiuntivi, noti per
quel determinato esitoquel determinato esito
Costruzione di modelli predittivi di outcome Costruzione di modelli predittivi di outcome sfavorevolesfavorevole
ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI
I GRUPPO: I GRUPPO: PARTO PARTO PRETERMINEPRETERMINE
Parto pretermine iatrogeno Parto pretermine iatrogeno (indicazione materna o fetale, (indicazione materna o fetale, placenta previa)placenta previa)
•GemellaritàGemellarità
•PolidramniosPolidramnios
•Fumo di sigaretta/sostanze Fumo di sigaretta/sostanze
d’abusod’abuso
•Precedente parto preterminePrecedente parto pretermine
ESCLUSIONEESCLUSIONE
FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO
ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI
II GRUPPO: II GRUPPO: ABORTO SPONTANEO TARDIVO-MEUABORTO SPONTANEO TARDIVO-MEU
FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO
•Anomalie cromosomicheAnomalie cromosomiche•Sindromi geneticheSindromi genetiche
•DiabeteDiabete
•PreeclampsiaPreeclampsia
•Isoimmunizzazione RhIsoimmunizzazione Rh
•Distacco intempestivo di Distacco intempestivo di
placentaplacenta
ESCLUSIONEESCLUSIONE
ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI
III GRUPPO: III GRUPPO: PREECLAMPSIAPREECLAMPSIA
FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO
•Età, parità, familiarità, BMIEtà, parità, familiarità, BMI
•Ipertensione, diabete, nefropatie Ipertensione, diabete, nefropatie
pregestazionalipregestazionali
•LES, APLsLES, APLs
•gemellarità gemellarità
• precoce (< 34 precoce (< 34
settimane)settimane)
• a terminea termine
± ± IUGRIUGR
ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI
IV GRUPPO: IV GRUPPO: IUGRIUGR
FATTORI DI FATTORI DI RISCHIORISCHIO
•Anomalie cromosomicheAnomalie cromosomiche•Sindromi geneticheSindromi genetiche
•Diabete pregestazionaleDiabete pregestazionale
•PreeclampsiaPreeclampsia
•Fumo, alcol, sostanze Fumo, alcol, sostanze
d’abusod’abuso
ESCLUSIONEESCLUSIONE
± ± alterazioni flussimetriche alterazioni flussimetriche
placentariplacentari
ANALISI DEI DATIANALISI DEI DATI
CORRELAZIONE GENOTIPO-FENOTIPOCORRELAZIONE GENOTIPO-FENOTIPO
IDENTIFICAZIONE DI SPECIFICI POLIMORFISMI “A IDENTIFICAZIONE DI SPECIFICI POLIMORFISMI “A RISCHIO” CHE, IN ASSOCIAZIONE A PARAMETRI RISCHIO” CHE, IN ASSOCIAZIONE A PARAMETRI
ANAMNESTICI, FLUSSIMETRICI E BIOCHIMICI, ANAMNESTICI, FLUSSIMETRICI E BIOCHIMICI, CONSENTA UNO SCREENING COMBINATO CONSENTA UNO SCREENING COMBINATO
(MULTIPLE MARKERS) PREDITTIVO DI OUTCOME (MULTIPLE MARKERS) PREDITTIVO DI OUTCOME SFAVOREVOLESFAVOREVOLE