Introducción a la histologíay técnicas histológicas

básicas

La Histología es la rama de la anatomía que estudia los tejidos de

animales y plantas.

En su aspecto amplio , la palabra histología se emplea como sinónimo de

anatomía microscópica ya que su materia incluye no sólo los tejidos si no

la célula, órganos y sistemas.

El cuerpo está compuesto de células, matriz intercelular y una

sustancia líquida, el líquido extracelular (líquido tisular), que impregna

estos componentes.

El líquido extracelular, que deriva del plasma sanguíneo, transporta

nutrientes, oxígeno y moléculas de señalamiento a las células del

cuerpo. Por el contrario las moléculas de señalamiento, los productos

de deshecho y el dióxido de carbono que liberan las células del

organismo llegan a la sangre y los vasos sanguíneos a través del

líquido tisular. Este no se observa en preparaciones histológicas pero

es importante reconocer su presencia invisible.

El objeto de la histología ya no aborda simplemente la estructura del

cuerpo, si no también su funcionamiento. Esta ciencia guarda una

estrecha relación con la biología celular, la bioquímica, fisiología y,

según sea apropiado, la patología.

Métodos aplicados para estudiar

la anatomía microscópica del

cuerpo

•Microscopia de Luz

•Microscopia

electrónica

Microscopia de Luz

Preparación de los tejidos

Con el fin de estudiar los tejidos de manera que se asemejen

más a su estado natural en vivo, se han creado diversas

técnicas.

-Fijación

- Deshidratación y aclaramiento

- Inclusión en un medio estable

- Sección en cortes delgados

- Montajes y tinción.

FIJACIÓN

Se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que no

sólo retardan las alteraciones tisulares subsecuentes a la muerte si no

que también conservan su configuración normal.

Los agentes para fijación más comunes son formalina y fijador de

Bouin, debido a que ambas permiten el entrecruzamiento de las

proteínas y por lo tanto conservan una imagen del tejido similar al

vivo.

DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO

Debido a la gran parte de a

gua que constituye el tejido, se aplica una serie gradual de alcohol

para deshidratar. A continuación, el tejido se trata con xileno (una

sustancia química que es miscible con parafina fundida) y éste lo

torna transparente.

*La miscibilidad es una propiedad que tienen

algunas sustancias para mezclarse y formar

soluciones.

INCLUSIÓN

Se incluyen los tejidos en un medio apropiado (en este caso seria la

parafina) y se seccionan en cortes delgados.

La muestra se recubre con parafina fundida y se deja endurecer y

enfriar para formar un bloque de parafina incluyendo al tejido.

SECCIÓN

Se elimina el material de inclusión redundante de los bloques de tejido

y se montan para seccionarlos mediante un micrótomo que es un

aparato equipado con una hoja y un brazo que desciende en el bloque

el tejido en incrementos específicos iguales. Para esta microscopia, el

grosor fluctúa entre 5 y 10 µm.

También es posible realizar el corte en especímenes congelados, ya

sea en nitrógeno líquido o en un porta muestras para congelación

rápida en crióstato.

MONTAJE Y TINICIÓN

Los corten se montan en un portaobjetos con adhesivo y se tiñen,

debido a sus diversas densidades, principalmente con colorantes

hidrosolubles.

Primero es necesario retirar la parafina del tejido,

después rehidratarlo y teñirlo, un vez hecho esto

se deshidrata el corte para fijarlo

permanentemente al cubreobjetos.

Los colorantes pueden agruparse en tres clases:

-Los que diferencian los componentes ácidos y

básicos de la célula.

-Los que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.

- Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de

metales en ellos.

Puesto que casi todos los componentes ácidos son ADN y ARN el

núcleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se tiñen de color

azul oscuro; éstos elementos se denominan basofílicos.

La eosina es un ácido que tiñe los componentes básicos de la célula en

color rosado. Debido a que muchos constituyentes del citoplasma se

tiñen de este tono se dice que estos elementos son acidófilos.

Se dice que un tejido o componente celular que se tiñe de color púrpura

es metacromático y que el azul de toluidina muestra metacromasia

(debido a que tiñe de púrpura los tejidos ricos en polianiones.

Colorantes y reacciones histológicas comunes

Reactivo Resultado

Hematoxilina Azul: núcleo, regiones del citoplasma;

matriz de cartílago.

Eosina Rosa: Regiones básicas del citoplasma;

fibras de colágeno.

Tricrómica de Masson Azul oscuro: núcleo; Rojo: músculo,

queratina y citoplasma.

Colorante de orceína para fibras elásticas. Pardo: fibras elásticas

Colorante Weigert para fibras elásticas. Azul: fibras elásticas.

Tinciones argénticas. Negro: Fibras reticulares

Hematoxilina férrica Negro: Estriaciones de músculo, núcleos,

eritrocitos

Ácido peryódico de schiff Magenta: moléculas ricas en glucógeno y

carbohidratos

Colorantes de Wright y Giemsa Se utiliza para tinciones deferenciales de

células hemática.

Rosa: eritrocitos, gránulos de eosinofilos.

Púrpura: núcleos de leucocitos, gránulos

basofilos.

Azul: citoplasma de monocitos y linfocitos.

Los microscopios compuestos están constituidos por una disposición

específica de lentes que permiten una gran amplificación y una buena

resolución de los tejidos observados.

Técnicas de imágenes

digitales

Se emplea una computadora para capturar y manipular imágenes

histológicas.

Mediante estas técnicas podemos:

-Observar de manera inmediata la

imagen adquirida

- Modificar digitalmente la imagen

- Realzar la imagen mediante el

uso de programas.

- Guardar la imágenes en un

formato digital

- Transmitir electrónicamente las

imágenes

Interpretación de cortes

microscópicos

Aprender a interpretar un corte bidimensional como si fuera

tridimensional.

Procedimientos avanzados de

observación

HISTOQUÍMI

CA

La histoquímica es un método de tinción de

tejidos que proporciona información sobre la

presencia y localización de macromoléculas

intracelulares y extracelulares.

.

Con frecuencia se efectúa en tejidos congelados

y se aplica en cualquier microscopía.

Se utiliza regularmente el reactivo ácido

Peryódico Schiff (PAS).

INMUNOCITOQUÍMI

CA

Se utilizan anticuerpos marcados con

fluorescencia (fluoresceína o rodamina) y

anticuerpos para identificar una localización

intracelular y extracelular de las macromoléculas

más precisa de la que es posible con la

histoquímica.

AUTORRADIOGRAFÍA

Es un método en el que se incorporan isótopos radioactivos en

macromoléculas, que a continuación se observan con el uso de la

película de emulsión superpuesta.

Es un método particularmente útil para localizar e investigar una

secuencia temporal específica de fenómenos

Microscopia Confocal

Utiliza un rayo láser como fuente de luz que pasa por un espejo dicroico

para enfocarse en el espécimen y una pantalla con un agujero minúsculo

que permite enfocar la vista al objetivo.

Puede repetirse a mayor profundidad el examen y tendremos una buena

imagen tridimensional.

Microscopia electrónica

El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia electrónica

permite lograr una ampliación y resolución mucho mayores que las

obtenidas con la microscopia de luz.

Se utiliza un haz de electrones en lugar de fotones como fuente de luz, el

cual se amplía y enfoca por medio de electroimanes.

Microscopia electrónica de transmisión (MET)

Se utilizan cortes más delgados para teñir los tejidos y se requieren

técnicas de precipitado de metales pesados en lugar de colorantes

hidrosolubles.

Técnica de fractura por congelación (criofractura)

Este método permite mostrar las proteínas transmembranales de

membranas celulares.

Se lleva a cabo mediante el choque de los especímenes congelados

con una hoja de corte muy fría causando así fracturas.

Se crea una réplica del tejido agregando platino y carbono al corte y se

analiza.

Microscopia electrónica de barrido

Proporciona una imagen tridimensional del espécimen. Sólo se usa

para observar superficies

Texto Atlas de Histología

Leslie P. Gartner

James L. Hiatt

3 Edición

pp. 1-10