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“AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN ECONÓMICA Y SOCIAL DEL PERÚ”
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
FACULTAD DE INGENIERÍA PESQUERA
- CURSO :
- Biología General.
- TEMA :
-Informes de prácticas de laboratorio.
- ALUMNO :
- Sergio Cancino Reyes.
INTRODUCCION
PRACTICA N° 01
BIOSGURIDAD Y MICROSCOPIA
OBJETIVOS
Tener precaución en el uso de instrumentos y equipos de laboratorio siguiendo las reglas dadas
Manejar correctamente el microscopio y reconocer sus partes, así como observar preparados en fresco y en seco.
MATERIALES Y EQUIPOS
- Microscopio compuesto. - Instrumentos de medición de masa. - Instrumentos de medición de volumen. - Instrumentos para mediciones aproximadas.
FUNDAMENTO TEÓRICO
I.- BIOSEGURIDAD
Conjunto de medidas que deben de tomarse en cuenta para evitar futuros
accidentes. Para esto seguimos los siguientes niveles:
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 01
En este nivel se trabaja con agentes que presentan un
peligro mínimo para el personal de laboratorio y para el
ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el
trabajo se realiza por lo general en mesas estándar de
laboratorio, no se requiere un equipo especial ni tampoco un
diseño especifico de las instalaciones. El personal de estos
laboratorios es generalmente supervisado por un científico
con entrenamiento en microbiología.
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 02
Es similar al nivel 01 y en el se manejan agentes de peligro moderado hacia el
personal y el ambiente, pero difiere del nivel 01 en las siguientes características:
1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes
patógenos.
2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se esta realizando algún trabajo.
3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzocortantes contaminados.
4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se
llevan a cabo en gabinetes de trabajo biológico.
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 03
En este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos, de diagnóstico,
algunos laboratorios universitarios y también de investigación, en el cual se realizan
trabajos con agentes exóticos o que pueden causar un daño serio y potencialmente mortal
como resultado de la inhalación o exposición a los mismos, por ejemplo el ántrax.
El laboratorio cuenta con un diseño y con características especiales y todos los materiales
so manipulados utilizan do vestimenta y equipo de protección.
Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las normas
recomendadas para este nivel de bioseguridad. En estas circunstancias, es aceptable el
realizar las siguientes prácticas para poder seguir operando de una manera segura:
1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior.
2. La ventilación de laboratorio se tiene que hacer con un flujo de aire direccional
controlado.
3. El acceso al laboratorio está restringido.
4. Seguir el estándar de prácticas microbiológicas y equipamiento de seguridad
impuesto para el nivel de bioseguridad 02.
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 04
En este nivel es el que se utiliza para trabajar en agentes biológicos que representan
un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para la vida. Los agentes
nuevos que tienen un cierto parecido con los antígenos de los agentes conocidos que
operan en el nivel 04, son confinados a este nivel hasta que se tiene suficiente
información para confirmar que pertenecen a este nivel o bien pasarlos a un nivel
adecuado.
El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento específico extensivo en el
manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en el ambiente
estéril y controlado de los mismos.
Por lo regular los científicos que trabajan aquí, utilizan trajes especiales que cubren la
totalidad de sus cuerpos y que además tienen una leve sobrepresión para evitar que
entren partículas infecciosas al mismo si este llega a desgarrarse. En estos laboratorios se
mantienen con una presión de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes
nocivos escapen al ambiente.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Uso de guardapolvo para protegernos de salpicaduras de algún químico.
No comer en el laboratorio.
Tener uñas cortas.
Cabello recogido.
Evitar pipetear sustancias toxicas.
Lavarse las manos antes y después de manipular las muestras.
Si el grupo de trabajo del laboratorio rompió algún material lo reponen.
El material de vidrio (laminas y laminillas) deben colocarse en lejía o hipoclorito
después de haber sido utilizadas, esto se coloca cuando se a procesado sustancias
clínicas.
Las pipetas una ves utilizas deben sumergirse en mezcla sulfocromica.
II. MATERIAL DE LABORATORIO
1. Placa petri: sirve para colocar los medios de cultivo. Las hay de diversos tamaños.
2. Pipetas: material empleado para medir o trasvasar volúmenes de líquidos en
trabajos de análisis. Son tubos cilíndricos de diámetro pequeño, abierto por ambos
extremos y más ancho en su parte central. Su extremo inferior termina en punta,
se introduce en el líquido y al succionar por el extremo superior con ayudad de una
propipeta, el liquido asciende por la pipeta.
Pipeta de transferencia o volumétrica.- diseñada para medir y verter un
volumen determinado. Las más usadas son de: 5, 10, 25, 100 ml. La parte
superior e este tipo de pipeta tiene graduada un anillo que fija el volumen
que debe medirse.
Pipeta graduada o de medida.- pipeta marcada con una escala en
pequeñas fracciones de su volumen total, se emplean para medir
cantidades variables de líquidos. Las más usadas son de: 1, 2, 5, 10 ml.
3. Probeta: son tubos cilíndricos graduados de diámetro variable, con base plana y
ancha que les permite posarse verticalmente; en la parte superior lleva un pico
para verter con mayor facilidad los líquidos. Hay de diferentes capacidades. Su uso
se limita a la medición de líquidos de poca exactitud.
4. Mortero: sirve para triturar.
5. Laminas y laminillas:
6. Tubos de ensayo: son tubos de vidrio de diámetro pequeño con abertura en un
extremo y el fondo cerrado generalmente redondeados, los hay con borde o sin
borde, pero lo más importante es su capacidad termo resistente.
7. Vaso de precipitación: es un vaso de forma cilíndrica graduado, con una hendidura
en el borde a manera de pico que permite verter fácilmente un líquido. Hay de
diferentes capacidades: 50, 100, 250 ml., etc.
Se asume que en ellos, el volumen indicado por el fabricante se consigue si se
llenas casi hasta el borde superior. Se usan para calentar líquidos, para evaporizar,
hacer un baño maría, etc.
8. Autoclave: sirve para esterilizar el material de vidrio.
T° 121°C x 15’ /15lb de presión.
9. Estufa: equipo eléctrico que se emplea para sacar muestras o materiales. Opera a
temperaturas aproximadamente hasta de 300°C.
10. Gradilla: generalmente de madera, sirve para contener los tubos de ensayo en
forma vertical.
III. MICROSCOPIA
Etimológicamente la palabra microscopio deriva de dos voces griegas: mikros =
pequeño y scopium = ver u observar. S le define pues como un instrumento de óptica, que
se utiliza para la observación de cuerpos pequeños que a simple vista no se alcanzan a
distinguir.
El origen y el sucesivo perfeccionamiento del microscopio, es difícil de conocer
exactamente; parece ser que las primeras aplicaciones de lentes como medio de ampliar
las imágenes y algunas de las propiedades ópticas de las superficies curvas, fueron
conocidas por Tolomeo (S. IV de J.C.).
Como lentes de aumento utilizaron en un principio balones llenos de agua, peo más tarde
la fabricación de vidrios para uso óptico, permitió reemplazar estos primitivos por lentes
macizos, aunque de poder amplificador escaso, pero de resultados satisfactorios.
En 1850 el holandés Sacharías, llamado Jansen, combino dos lentes y obtuvo de esta
manera un perfeccionamiento en la observación de pequeños objetos, estableciendo de
esta manera los principios del microscopio compuesto y el telescopio.
Antón Van Leeuwenhoek, un comerciante holandés, construyo microscopios simples con
solo una lente que aumentaba los objetos 200 veces. Con ellos, observó células
sanguíneas, bacterias y organismos simples (protozoarios) que nadaban en una gota de
agua.
El desarrollo de la microscopia en los últimos tres siglos, ha permitido ampliar el campo
delas investigaciones biológicas y se a convertido en el instrumento básico para abrir
nuevas fronteras en las biología. Se han construido microscopios altamente especializados
para una gran variedad de usos. Estos microscopios comprenden: el simple (una sola
lente), el compuesto convencional (campo claro), el binocular o de disección, el de campo
oscuro, el de contraste de fases, el metalográfico y el electrónico.
DESCRIPCIÓN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
El microscopio tiene dos partes una óptica y otra mecánica, las cuales serán
reconocidas en el desarrollo de la práctica:
PARTE ÓPTICA
1. Ocular.- denominado así porque va cerca del ojo del observador, consta de un
sistema de dos lentes planos convexos, dispuestos en un tubo cilíndrico de metal,
con diafragma intermedio; ambas lente presentan las caras planas hacia el ojo del
observador y las convexas hacia el objeto.
La lente que va cerca del ojo del observador se denomina ocular propiamente
dicho y la lente inferior se le conoce con el nombre de lente de campo.
El la parte lateral o superior del tubo cilíndrico lleva una numeración 5x, 10x, 15x,
que indica el número de aumentos propios del ocular. El ocular da la imagen
virtual y derecha y se forma a la altura del diafragma.
2. Objetivos.- denominados así porque va cerca del objeto para observar. Un objetivo
esta constituido por un tubo metálico cilíndrico-cónico, lleva en su interior un
sistema de lentes destinados a dar la imagen real e invertida del objeto.
La lente de la parte inferior se denomina “lente frontal”. En la parte lateral del
tubo metálico, lleva inscrita una numeración 4x, 10x, 20x, 40x, 60x, 100x, etc. Que
indica el número de aumentos propios del objetivo.
Clases de objetivos
a. Objetivos a seco.
Son aquellos que se emplean generalmente para observar preparados en
fresco, aunque también pueden utilizarse para observar preparados en seco;
no se utiliza ningún tipo de sustancia refractante para realizar la observación.
Por el número de aumentos son de tres clases:
1.- de pequeño aumento = mayor de 0x y menor de 10x.
2.- de mediano aumento = mayor de 10x y menor de 30x.
3.- de gran aumento = mayor de 30x y menor de 90x.
b. Objetivos de inmersión.
Son aquellos que entre la lente frontal y el preparado a observar, se interpone
una sustancia líquida, comúnmente el aceite de cedro, cuyo índice de
refracción es de 1,5.
Se utiliza solo para observaciones de preparados en seco.
Características:
1.- Es el de mayor aumento (100x, 150x) 2.- La lente frontal es más pequeña.
3.- Lleva inscrita una fracción: 1/2; ó un decimal: 1,20; 1,30 o la palabra oíl inmersión.
4.- De acuerdo a la procedencia lleva una franja o una raya negra para facilitar su
identificación. Distancia focal Es la distancia que media entre la parte inferior de la lente frontal y el objeto a
observar, cuando se tiene un enfoque perfecto. Estas distancias focales para los diferentes objeticos son:
- Pequeño aumento = entre 0,5 y 3 cm.
- Mediano aumento = entre 3mm y 5mm. - Gran aumento = entre 1mm y 3mm.
- Inmersión = entre 0,8mm y 1,20mm.
3. Sistema de iluminación
Se encuentra ubicado en la parte inferior de la platina y comprende:
a. Espejo o lámpara de iluminación.
Es de forma circular presenta dos caras una plana y otra cóncava, sujeto por medio de un eje giratorio. Se utiliza para enviar los rayos de luz hacia el
preparado. Para trabajo con poco aumento puede utilizarse la superficie plana, mientras
que para el trabajo con gran aumento es necesario utilizar la parte cóncava.
b. Diafragma. Es un dispositivo constituido por laminillas metálicas dispuestas concéntricamente, de tal forma que permite cerrar y abrir, regulando de esta manera la entrada de luz emitida por el espejo.
c. Condensador.
Esta constituido por un sistema de dos o más lentes (ABBE), montados dentro
de u cilindro cónico truncado de metal. Esta situado por debajo de la platina. Sirve para concentrar o condensar los rayos luminosos emitidos por el espejo y función accionado por un tornillo.
d. Porta filtro. Es un dispositivo que permite colocar filtro de diferentes colores, con la finalidad de facilitar la observación.
PARTE MECÁNICA
Tiene por misión sostener la parte óptica y permite los desplazamientos necesarios para el
enfoque e iluminación del objeto por observar, esta constituido por:
1. El pie Sostiene el microscopio asegurando una perfecta estabilidad del aparato en posición vertical, inclinado u horizontal. Presenta diferentes formas, siendo la más común de herradura.
2. La columna o brazo
Es la parte articulada al pie por medio de una bisagra llamada charnela, sostiene a
la platina, a la subplatina, al tubo óptico, lleva los tornillos macrométrico y micrométrico. Generalmente tiene la forma de un arco, que es por donde se toma
para su traslado y manejo.
3. Platina
Es una plancha metálica colocada en posición horizontal, presenta un orificio en la
parte central que permite el paso de la luz proveniente del sistema de iluminación. En los modelos perfeccionados, esta platina puede desplazarse por los tornillos
macro y micrométrico, hacia arriba y hacia abajo. Además lleva adherida un par de pinzas que sirven para sujetar a la lamina porta-objeto, ó u carro móvil (charriot)
para el desplazamiento del preparado durante la observación.
4. Tubo óptico
Es metálico y de forma cilíndrica, ennegrecido interiormente para evitar la reflexión de la luz. En el extremo superior del tubo se inserta el ocular y extremo inferior el objetivo, directamente o por intermedio de un dispositivo llamado revolver. La longitud del tubo puede modificarse en los modelos perfeccionados por medio de un mecanismo que divide al tubo en dos partes; una inferior fija y otra superior
que se introduce o se saca de la anterior.
5. Revolver
Es un dispositivo metálico de forma circular, entornillado en la parte inferior del tubo óptico, gira sobre su eje central. Presenta varios orificios en los que van atornillados los objetivos. Este dispositivo permite realizar el cambio de objetivos
durante la observación.
6. Tornillo macrométrico Se encuentra ubicado en la parte superior o inferior de la columna, permite grandes desplazamientos del tubo óptico.
7. Tornillo micrométrico
Se encuentra ubicado en la parte superior o inferior de la columna, por debajo del macrométrico ó superpuestos él, accionados por un solo tornillo. Permite desplazamientos en términos de micras.
ILUMINACIÓN Y ENFOQUE La iluminación y enfoque son dos condiciones principales para realizar una buena
observación microscópica. La iluminación se consigue utilizando fuentes luminosas adecuadas, que pueden ser natural o artificial.
Los rayos de luz son reflejados por el espejo o por la lámpara de iluminación, hacia e l objeto o preparado. Cuando se examina con grandes aumentos, la luz debe ser intensa, en
cambio cuando se hace con aumentos menores, la luz debe ser menos intensa, lo que se consigue desplazando en sentido vertical (arriba o abajo) el condensador y graduando la
abertura del diafragma. Obtenida la iluminación conveniente, se efectúa el enfoque del preparado, utilizando
primero el macrométrico hasta encontrar la imágen (enfoque aproximado), y luego accionando en micrométrico permite el enfoque perfecto (visualización de la imágen).
DISCUCIÓN
1. ¿Cuál es la diferencia entre un microscopio óptico y un microscopio electrónico?
- Un microscopio óptico es un microscopio basado lentes ópticas. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek.
El microscopio óptico tiene un limite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm). Este limite se debe a la longitud de onda de la luz (0.4-0.7 µm). Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas.
El microscopio normal u óptico está formado por dos lentes. El objeto que se quiere estudiar se estudiar se coloca en la platina. La luz procedente del objeto penetra en el microscopio por el objetivo, que desempeña la función de una lupa; es decir, produce una imagen muy ampliada del objeto. Ésta imagen se modifica mediante otro sistema de lentes, el ocular. El aumento final conseguido es igual al producto de los aumentos del objetivo por los del ocular. En el microscopio óptico este
aumento tiene un límite, que se denomina "poder de resolución" y que es aproximadamente de 1200 aumentos.
10 de julio del 2006.
- Ambos pueden utilizarse para el examen microscópico de microorganismos. Para la mayoría de los análisis de rutina se usa el microscopio óptico, mientras que para el exámen de las estructuras intracelulares se utiliza el electrónico como un complemento. Todos los microscopios utilizan lentes para aumentar la imagen del tamaño de las estructuras y poder ver los detalles, pero la resolución (ver
dos puntos adyacentes como unidades distintas) es 100 veces mayor en el microscopio electrónico que en el óptico. "Microscopios ópticos": *de campo claro: formado por dos series de lente (objetivo y ocular) que
funcionan conjuntamente para producir la imagen, aquí la muestra se visualiza por contraste entre ella y el medio que la rodea. Se utilizan tinciones para favorecer el contraste. Se utilizan colorantes con cargados positivamente porque se combinan con los componentes celulares que están cargados negativamente.
*de contraste de fases: aumenta el contraste, no hace falta teñir la célula
porque se basa en los distintos índices de refracción entre la célula y el
medio desviando los rayos de luz; formándose una imagen oscura con un fondo brillante. *campo oscuro: en este la luz incide sobre la muestra sólo desde los lados, la luz al ser dispersada por la muestra entra en el objetivo, observándose la muestra brillante sobre el fondo oscuro.
"Microscopio electrónico": *de transmisión: se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la función de las lentes la realizan electro magnetos, operándose al vacío. Tiene alta resolución, pero los haces electrolitos poseen bajo poder de
penetración por eso se utilizan técnicas de cortes ultrafinos. Para aumentar el contraste se preparan las muestras con compuestos como el ácido ósmico, permanganato, uranio, lantano o plomo porque desvían adecuadamente los electrones. *de barrido: la muestra se recubre con una fina capa de un metal pesado, como el oro. el haz de electrones barre la superficie de la
muestra, los electrones desviados por la capa de metal son recogidos y proyectados sobre una pantalla para producir una imagen. "Todos los microscopios electrónicos incorporan cámaras que permiten fotografiar las muestras".
- Fuente (s): - Microbiología de Brok
2. ¿Por qué se utiliza el aceite de cedro en la observación con los objetivos de inmersión?
- Es una técnica de observación que no compete a la preparación misma
de la placa, sino a la corrección de un problema de difracción de la luz en el microscopio. Para ello se utiliza en aceite de cedro o de inmersión, una gota del cual debe ir colocado entre el objeto y el objetivo de 100x, necesitando estos, estar en contacto directo.
- Sabemos que el aire tiene también un índice de difracción de la luz aunque no muy considerable. En el microscopio, la luz que sale de la
fuente y atraviesa el condensador, llega al objeto al cual debe iluminarlo a trasluz, para luego recorrer una columna de aire hasta llegar al lente objetivo. Este último tiene un índice de difracción de la luz equivalente a 1.1515, muy superior al de la columna de aire, lo cual produce una alteración en la visualización del objeto. El aceite de cedro que tiene un índice muy parecido al del objetivo, es colocado desplazando a la
columna de aire y resolviendo este problema en forma aceptable. Sólo debe usarse, sin embargo, con el objetivo de inmersión.
CONCLUSIONES
- La bioseguridad pretende asegurar la integridad del personal del laboratorio y para el ambiente.
- La microscopia es la mejor manera de producir imágenes visibles de estructuras o detalles demasiados pequeños para poder ser percibidos a simple vista.
- En la microscopia evidenciamos los grandes aportes que la física a hecho a la biología.
