Upload
others
View
22
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Histolojik YöntemlerDR. ÖĞR. ÜYESİ Ferda Topal Çelikkan
✓Hücre ve hücrelerin oluşturduğu dokuların yapısal özelliklerinin mikroskop altında incelenebilir hale getirilmesini sağlayan preparat hazırlama yöntemlerine histoloji tekniği adı verilir.
✓Hücre ve dokuları iki şekilde incelemek mümkündür.
CANLI
Histolojik Teknik
CANSIZ
Canlı İnceleme
üSıvı ortamda birbirinden ayrı duran hücreler (kan, lenf, sperm, beyin omurilik sıvısı, sinoviyal sıvı vb.)
üDokular özel işlemlerle hücrelere ayrılarak izole hale getirilip hücreler incelebilir
üKüçük memelilerin seröz zarları, ör: mezenter gibi ince zarlar
Canlı İncelemede
üFaz kontrast mikroskobuüHoffman Modülasyon Kontrast MikroskobuüDiferansiyel interferans mikroskopüVital boyalar (az toksik) Ör: Çini mürekkebi,
tripan mavisi
İnsan göbek kordonu mezenkimal kök hücreleri (hUC-MSCs) (mediyumiçinde)
Cansız İncelemeTespit edilmiş ve boyanmış ince doku kesitleri/hücreler
üzerinde yapılır
Hücreleri Mikroskobik İnceleme Yöntemleri
üRutin preparat hazırlanmasıüÖzel tekniklerin uygulanmasıüMikroskobik incelemeler
Temel AşamalarüTespit (fiksasyon)üYıkamaüSuyunu giderme (dehidratasyon)üSaydamlaştırmaüEmdirme (embeding)üGömme (bloklama)üKesmeüBoyamaüKapatma
Tespit
Hücreleri ve hücrelerarası materyali yaşamın durduğu andaki yapısal ve kimyasal
durumunda sabitleştirir
Tespitin Amacı
üZar yapısını sabitleştirip otolizi önlemek,üLipoproteinler, glikoproteinler, nükleoproteinler, karbonhidratlar,
lipitler vb. maddeleri sabitleştirmek,üProteinlerde koagülasyon ve çökme,üDokuda sertleşme ve kesilebilirlik,üBoyanmanın kolaylaştırılması, üDokuyu korumak
Tespit Yöntemleri
Kimyasal Fiziksel
üIsıüDondurmaüKurutma
Isı
üProteinler koagüle olur, yağlar erirüBüyük parçaların tesbitinde kullanılırüMikrodalgayla reaksiyon hızlandırılır
Dondurma (Freezing)
üDoku kalınlığı 2mm. ‘den küçük olmalıdırüBuz kristali oluşması kriyoprotektanlarla azaltılır. Ör:
gliserol, dimetilsülfoksit, sükrozüSıvı azot (-196 0C), solid karbon dioksit (kuru buz) (-75
0C)
Tespiti Etkileyen Faktörler
üTespit sıvısının amaca göre seçimi,üTespit sıvısının miktarı,üTespit sıvısının pH’sı,üTespit süresi (büyüklük, ısı, nitelik, diffüzyon gücü)
Tespit Teknikleri
§ İmmersiyon§Perfüzyon
Tespit sıvıları
üFormol veya Formalin; Proteinlerlehidroksimetil köprüleri oluşturur
üGluteraldehitüAsetonüOsmiyum tetroksitüEtil AlkolüBouin, Zenker vb.
YıkamaüTespitte kullanılan kimyasalların tortu ve
çökeltilerini uzaklaştırmak için yapılır. Tespit türüne göre :
üSuü%70-80 Alkol
Suyunu Giderme
ü Dokudaki suyun uzaklaştırılmasını amaçlar. Düşük dereceden başlayarak yükselen konsantrasyonlarda etil alkol
kullanılır
% 50>60>70>80>96>100
Saydamlaştırma
üDokudaki alkollü çıkarıp gömme materyalinle yer değiştirebilenbir maddenin dokuya sokulması amaçlanır.
üBu maddeler aynı zamanda ışık geçirgenliğini de arttırarakdokuyu şeffaflaştırır.
üksilolükloroformübutanolümetil benzoatüamyl asetatükarbon tetraklorür
Emdirme
üAlkollü giderilmiş doku parçaları gömme materyaline alınır
üparafinüjelatin, agarüeponüepoksi resinüselloidin, plastik
maddeler
Gömme-bloklama
Emdirme materyalin içine almış parçalar aynı materyal içinde uygun pozisyonda
özel kalıplara gömülür
Kesme
Mikrotom
Sliding RotaryBıçak hareket eder Blok hareket eder
(büyük bloklarda)
6-20 µm kalınlığında kesitler alınır