INOKULASI DAN PEREMAJAAN BIAKAN DALAM MEDIA PADAT DAN
CAIRI.Tujuan Percobaan 1. Memahami proses inokulasi 2. Melakukan
inokulasi dan peremajaan biakan secara goresan maupun tusukan pada
media padat maupun media cair 3. Melakukan inokulasi dengan teknik
kerja aseptis 4. Mengetahui pertumbuhan dan warna koloni
bakteri
II.Teori Dasar Penanaman bakteri atau biasa disebut juga
inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang
lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat
tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih
dahulu diusahakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan
medium agar tetap steril,hal ini agar menghindari terjadinya
kontaminasi (Dwijoseputro, 1998). Inokulasi adalah menanam inokula
secara aseptis ke dalam media steril baik pada media padat maupun
media cair. Inokula merupakan bahan yang mengandung mikroba atau
biakan mikroba baik dalam keadaan cair maupun padat. Biakan murni
diperlukan untuk keperluan diagnostic, karakterisasi
mikroorganisme, industry farmasi atau kegiatan lain yang berkaitan
dengan mikroorganisme. Nutrias dan lingkungan yang menunjang
pertumbuhan mikroorganisme serta suatu teknik kerja aseptis yang
dapat mencegah adanya kontaminan dalam biakan diperlukan unutk
mendapatkan kultur yang murni. Identifikasi biakan mikroorganisme
seringkali memerlukan pemindahan ke biakan segar tanpa terjadi
pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan dengan teknik
aseptic untuk mempertahankan kemurnian biakan selama pemindahan
berulangkali. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan cair
atau padat. Kekeruhan dalam kaldu menunjukkan
terjadinya pertumbuhan mikroorganisme. Bila mikroorganisme
menumpuk pada dasar tabung maka akan membentuk sedimen, sedangkan
pada permukaan kaldu pertumbuhan terlihat sebagai partikel. Teknis
aseptis sangat diperlukan pada saat memindahkan biakan dari suatu
tempat ke tempat lainnya. Penggunaan teknik aseptis mencegah
terjadinya kontaminasi dengan biakan yang mungkin bersifat
pathogen. Teknik kerja aseptis, teknik dekontaminasi, serta
penyelesaian pekerjaan secara cepat dan efisien perlu dipahami
untuk menunjang pekerjaan yang berkaitan dengan mikroorganisme.
Semua pekerjaan pada praktikum ini dilakukan dengan memperhatikan
prosedur aseptic. Prinsip utama menginokulasi mikroba pada media
padat adalah menumbuhkan mikroba tersebut dan mengamati
karakteristik morfologinya. Inokulasi pada media padat dapat
dilakukan dengan teknik agar miring, teknik agar tegak dan teknik
lempeng agar. Inokulasi mikroba dengan teknik lempeng agar dapat
dilakukan dengan metode: Metode gores Teknik ini lebih
menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapi
memerlukan ketrampilan-ketrampilan yang diperoleh dengan latihan.
Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah.
Inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam cawaan
petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis
goresan akan terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat
tumbuh menjadi koloni (Winarni, 1997). Cara penggarisan dilakukan
pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila dilakukan dengan
baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya
terkadang berbeda pada masing-masing laboratorium tapi tujuannya
sama yaiitu untuk membuat goresan sebanyak mungkin pada lempeng
medium pembiakan (Kus Irianto, 2006) Ada beberapa teknik dalam
metode goresan, yakni : a. Goresan T b. Goresan kuadran c. Goresan
Radian d. Goresan Sinambung
Metode tebar Setetes inokolum diletakan dalam sebuah medium agar
nutrien dalam cawan petridish dan dengan menggunakan batang kaca
yang bengkok dan steril. Inokulasi itu disebarkan dalam medium
batang yang sama dapat digunakan dapat menginokulasikan pinggan
kedua untuk dapat menjamin penyebaran bakteri yang merata dengan
baik. Pada beberapa pinggan akan muncul koloni koloni yang
terpisah-pisah (Winarni, 1997).
Metode tuang Isolasi menggunakan media cair dengan cara
pengenceran. Dasar melakukan pengenceran adalah penurunan jumlah
mikroorganisme sehingga pada suatu saat hanya ditemukan satu sel di
dalam tabung (Winarni, 1997).
Metode tusuk Metode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan
atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum,
kemudian dimasukkan ke dalam media (Winarni, 1997).
III.Alat dan Bahan Alat : - Cawan petri steril - Tabung reaksi
steril - Rak tabung reaksi - pipet agar 20 mL steril - Pipet ukur 5
mL dan 10 mL steril - Pinset - Ose bundar dan lurus - Bunsen -
Papan pembentuk agar miring - Inkubator 370C
Bahan : -Media Nutrien Agar cair bersuhu 500C -Media Nutrien
Broth -Biakan bakteri (Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa Bacillus sutilis Escherichia coli)
IV.Prosedur Kerja Pembuatan plat agar, agar miring, agar tegak,
dan media cair dalam tabung. - Nyalakan bunsen dan atur nyala api
bunsen sehingga diperoleh nyala api biru dan biarkan menyala selama
10 menit. - Siapkan dan letakkantabung reaksi steril pada rak
tabung reaksi dan cawan steril diantara dua api bunsen.
a. Pembuatan plat agar Membuat plat agar dengan memipet 20ml cc
media nutrient agar 50oC
Ke dalam cawan petri steril
Biarkan hingga memadat
b. Pembuatan agar miring Membuat plat agar dengan memipet 5ml cc
media nutrient agar 50oC
Ke dalam tabung reaksi steril
Letakkan miring pada papan miring
Biarkan hingga memadat
c. Pembuatan agar tegak
Membuat plat agar dengan memipet 10ml cc media nutrient agar
50oC
Ke dalam tabung reaksi steril
Letakkan tegak pada rak tabung reaksi
Biarkan hingga memadat
d. Pembuatan media cair dalam tabung
Membuat media cair dengan memipet 10ml cc media nutrien broth
yang bersuhu ruangan
Kedalam tabung reaksi steril
Semua pekerjaan diatas dilakukan dengan memperhatikan prosedur
kerja aseptis.
Teknik inokulasi pada plat agar, agar miring, agar tegak, dan
media cair. a. Inokulasi pada plat agar Buatlah empat tanda
berdasarkan nama bakteri pada plat agar di permukaan luar cawan
petri
Ambil inokula menggunakan jarum ose bundar
Inokulasikan bakteri pada bagian plat agar dengan goresan
rapat
b. Inokulasi pada plat miring Buatlah empat tanda berdasarkan
nama bakteri pada plat agar di permukaan luar tabung reaksi
Ambil inokula menggunakan jarum ose bundar
Inokulasikan bakteri pada media dengan goresan rapat secara
zigzag dimulai dari bagian bawah sampai bagian atas media agar
c. Inokulasi pada agar tegak Buatlah empat tanda berdasarkan
nama bakteri pada plat agar di permukaan luar tabung reaksi
Ambil inokula menggunakan jarum ose bundar
Inokulasikan bakteri pada media dengan cara menusukkan jarum ose
tepat pada bagian tengah tabung sampai mendekati dasar tabung dan
tarik secara berlahan
d. Inokulasi pada media cair Buatlah empat tanda berdasarkan
nama bakteri pada plat agar di permukaan luar tabung reaksi
Ambil inokula media cair dengan pipet pasteur jika inokula dari
biakan cair dan apabila inokula dari agar miring maka menggunakan
jarum ose bundar
Suspensikan pada nutrien broth
- Inkubasikan semua media yang telah di inokulasi kedalam
inkubator 37oC selama 1x24 jam. - Amati dan catat pertumbuhan yang
terjadi pada masing-masing media.
V.Data Pengamatan Inokulasi Pada Plat Agar No 1 Bakteri Sebelum
diinkubasi Sesudah diinkubasi
Staphylococcus aureus Warna media NA = kuning Warna kuning
bakteri =
y
Setelah
diinkubasi,
terbentuk
koloni bakteri diatas permukaan media sesuai dengan goresan yang
dibentuk. y Warna koloni yang terbentuk
adalah krem y Warna media NA berubah menjadi bening
2
Pseudomonas aeruginosa
Warna media NA = kuning Warna bakteri = hijau
y
Terbentuk koloni bakteri dengan jumlah banyak di atas permukaan
media sesuai dengan goresan yang dibentuk
y
Waran
koloni
yang
terbentuk
adalah putih kehijauan y Warna media NA berubah menjadi
bening
3
Bacillus subtilis
Warna media NA = kuning Warna kuning bakteri =
y
Setelah
diinkubasi,
terbentuk
koloni bakteri diatas permukaan media sesuai dengan goresan yang
dibentuk. y Warna koloni yang terbentuk
adalah krem y Warna media NA berubah
menjadi bening
4
Escherichia coli
Warna media NA = kuning Warna kuning bakteri =
y
Setelah
diinkubasi,
terbentuk
koloni bakteri diatas permukaan media sesuai dengan goresan yang
dibentuk. y Warna koloni yang terbentuk
adalah krem y Warna media NA berubah menjadi bening
Inokulasi Pada Agar Miring No 1 Bakteri Sebelum diinkubasi
Setelah diinkubasi
Staphylococcus aureus Warna media NA = kuning Warna kuning
bakteri =
y
Terbentuk koloni bakteri berwarna putih diatas permukaan media
NA
y
Koloni yang terbentuk berbentuk bulatan-bulatan
y 2 Pseudomonas aeruginosa Warna media NA = kuning Warna bakteri
= hijau
Warna media NA berubah menjadi kuning bening
y
Terbentuk koloni bakteri dengan goresan berwarna hijau kebiruan
zig-zag agak melebar diatas
permukaan media NA
y
Koloni yang terbentuk berbentuk bulatan-bulatan
y 3 Bacillus subtilis Warna media NA = kuning Warna kuning
bakteri =
Warna media NA berubah menjadi kuning media
y
Terbentuk koloni bakteri dengan goresan zig-zag berwarna putih
diatas permukaan media NA
y
Koloni yang terbentuk berbentuk bintang
y 4 Escherichia coli Warna media NA = kuning Warna kuning
bakteri =
Warna media NA berubah menjadi kuning bening
y
Terbentuk koloni bakteri dengan goresan zig-zag berwarna
putih
diatas permukaan media NA y Koloni yang terbentuk berbentuk
seperti bunga y Warna media NA berubah menjadi kuning bening
Inokulasi Pada Agar Tegak No 1 Bakteri Staphylococcus aureus
Sebelum diinkubasi Warna media NA = kuning Warna kuning y 2
Pseudomonas aeruginosa Warna media NA = kuning Warna bakteri =
hijau bakteri = y Setelah diinkubasi y Terbentuk koloni bakteri
berwarna putih diatas permukaan media NA Terbentuk koloni berwarna
putih dibekas tusukan jarum ose tegak Warna media NA menjadi kuning
bening
y
Terbentuk koloni bakteri berwarna hijau kebiruan diatas
permukaan media NA
y
Terbentuk koloni berwarna hijau keputihan dibekas tusukan jarum
ose tegak
y 3 Bacillus subtilis Warna media NA = kuning Warna kuning y 4
Escherichia coli Warna media NA = kuning Warna kuning bakteri =
bakteri = y
Warna media NA menjadi kuning bening
y
Terbentuk koloni bakteri berwarna putih diatas permukaan media
NA Terbentuk koloni berwarna putih dibekas tusukan jarum ose tegak
Warna media NA menjadi kuning bening
y
Terbentuk koloni bakteri berwarna putih dan cairan keruh diatas
permukaan media NA
y
Terbentuk koloni berwarna putih dibekas tusukan jarum ose
tegak
y
Warna media NA menjadi kuning bening
Inokulasi Pada Media Cair No 1 Bakteri Staphylococcus aureus
Sebelum diinkubasi Warna media NB = kuning Warna bakteri = kuning
Setelah diinkubasi y Terbentuk koloni bakteri berwarna putih
dibawah
permukaan media NB y 2 Pseudomonas aeruginosa Warna media NB =
kuning Warna bakteri = hijau y Terbentuk koloni bakteri berwarna
putih diatas Warna media NB tetap berwarna kuning bening
permukaan media NB y 3 Bacillus subtilis Warna media NB = kuning
Warna bakteri = kuning Warna media NB tetap berwarna kuning bening
y Terbentuk koloni bakteri berwarna putih diatas
permukaan media NB y 4 Escherichia coli Warna media NB = kuning
Warna bakteri = kuning Warna media NB tetap berwarna kuning bening
y Terbentuk koloni bakteri berwarna putih dibawah
permukaan media NB y Warna media NB tetap berwarna kuning
bening
VI.Pembahasan Percobaan kali ini adalah inokulasi dan peremajaan
biakan dalam media padat dan cair. Sebelum melakukan percobaan,
ruangan tempat penanaman bakteri harus bersih dan dalam keadaan
steril. Hal ini dilakukan agar tidak terjadi kesalahan dalam
pengamatan atau percobaan dalam laboratorium. Setelah melakukan
pensterilan ruangan, meja sebagai tempat melakukan penanaman
inokula pun harus dibersihkan menggunakan alcohol. Hal ini
dilakukan agar tidak terjadinya kontaminasi. Mikroorganisme ada
dimana-mana. Karena ukurannya yang sangat kecil, mereka mudah lepas
dalam udara dan permukaan. Maka dari itu, kita harus
mensterilisasikan medium kultur secepatnya setelah preparasi untuk
pemindahan mikroorganisme siap dikontaminasikan ini biasanya
terbunuh. Bagaimanapun, itu sama pentingnya untuk tindakan
pencegahan sampai penanganan berikutnya mediun kultur harus
tetap steril. Demikian materi yang lain yang akan kontak juga harus
tetap terjaga kesterilannya. Semua pekerjaan pada praktikum ini
dilakukan dengan memperhatikan prosedur teknik aseptic. Kerja
aseptic dilakukan dengan bekerja diantara dua nyala api Bunsen
dengan jarak +/20 cm. Hal ini dilakukan untuk meminimalkan
kontaminasi. Sebelum melakukan jerja, alat-alat harus diflambir
untuk menjaga kesterilan, sedangkan bunsen dinyalakan 10 menit
sebelum bekerja bertujuan agar terjadi radiasi sehingga
mikroorganisme menjauh. Tahap yang pertama dilakukan adalah membuat
plat agar dengan cara flambir pipet volume dan 4 buah cawan petri
steril kemudian pipet 20 ml cc media nutrient Agar cair 50 derajat
Celcius dan dimasukkan ke dalam cawan petri steril dan biarkan
memadat. Untuk membuat plat agar dibutuhkan media NA. Media NA pada
labu erlenmeyer yang telah disterilkan, dipanaskan di atas kompor
listrik selama 10-15 menit. Tujuan pemanasan untuk mencairkan media
sehingga dapat dituangkan untuk media agar datar pada cawan petri.
Media NA ini berwarna kuning bening. Disediakan delapan buah cawan
petri dan sekeliling pinggirnya dipanaskan dekat api bunsen atau
diflambir. Berfungsi untuk mensterilisasi cawan petri dari
kontaminan mikroorganisme yang lain. Dituangkan Media NA dengan
suhu 500 C ke dalam cawan petri steril. Media NA berfungsi sebagai
tempat menggoreskan bakteri dan tempat pertumbuhan koloni bakteri.
Cawan Petri yang berisi media NA 500 C didiamkan selama beberapa
menit. Pendiaman ini berfungsi agar media NA menjadi padat seperti
agar. Setelah media NA padat, ambil bakteri yang akan digoreskan
pada permukaan agar menggunakan jarum ose bundar. Sebelum mengambil
bakteri, jarum ose bundar harus dipanaskan sampai membara ini
berfungsi untuk mensterilisasi jarum sehingga tidak ada
mikroorganisme lain yang menempel disana. Sumbat tabung reaksi yang
berisi bakteri dilepaskan lalu bibir tabungnya dipanaskan atau
diflambir ini berfungsi untuk mensterilisasi tabung dan biakan dari
mikroorganisme lain. Lalu masukkan jarum ose bundar pada bakteri
lalu goreskan jarum ose bundar untuk mengambil bakteri. Pengambilan
bakteri dengan menggoreskan ujung bulat pada jarum ke media biakan
induk, memungkinkan bakteri dapat terambil banyak. Setelah bakteri
terambil, mulut tabung reaksi diflambir kembali dan disumbat dengan
kapas. Ini berfungsi untuk mensterilisasi tabung dan biakan dari
mikroorganisme lain. Setiap perlakuan di usahakan dilakukan sesuai
dengan prosedur teknik aseptis (di dekat api bunsen). Teknik
aseptic ini berfungsi agar saat inokulasi, bahan serta alat gelas
yang digunakan tetap steril. Inokula atau bakteri digoreskan
diatas
permukaan media NA yang ada di dalam cawan petri yang telah
disediakan menggunakan metode gores mulai dari sisi samping secara
merata. Metode gores yang dipakai adalah metode kuadran. Alasan
digunakan media NA karena komposisinya yang terdiri dari ekstrak
daging sapi didalamnya yang mengandung protein, karbohidrat,
vitamin, dan sedikit lemak, juga terdapat adanya faktor pertumbuhan
yang tidak mampu disintesis mikroorganisme dan supaya koloni yang
terbentuk tersebar merata, tampak jelas dan tidak bertumpukan.
Setelah itu cawan petri ditutup dan diflambir kembali, ini
berfungsi untuk mensterilisasi cawan petri dan biakan dari
mikroorganisme lain. Cawan petri diinkubasi di inkubator pada suhu
370 C. Inkubator sebagai tempat penyimpanan steril cawan petri
dengan menyeting suhu optimum bakteri untuk tumbuh. Saat dimasukkan
ke dalam incubator, posisi cawan petri harus terbalik. Posisi cawan
petri terbalik untuk menghindari uap air hasil metabolisme bakteri
akan menetes dari tutup cawan ke permukaan media. Hal ini akan
menghasilkan suatu masa pertumbuhan yang menganak sungai dan
menghancurkan pembentukan koloni secara individu. Sehingga untuk
menghindari hal ini, maka ketika diinkubasi, bagian bawah cawan
petri diletakkan di atas atau terbalik. Tahap kedua yang dilakukan
adalah membuat agar miring dengan cara flambir pipet volume dan 3
buah tabung reaksi kemudian pipet 5 ml cc media nutrient Agar cair
50 derajat Celcius dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril,
lalu letakkan miring pada papan miring dan biarkan memadat. Untuk
mendapatkan agar miring dibutuhkan media NA yang sudah dicairkan.
Lalu dituangkan ke dalam tabung reaksi dan diamkan sampai memadat.
Media NA yang padat dibutuhkan untuk sebagai tempat penggoresan
bakteri dan tempat pertumbuhan koloni bakteri. Lalu jarum ose
bundar dipanaskan sampai membara, ini berfungsi untuk mensterilkan
jarum sebelum digunakan dari mikroorganisme lain. Sumbat tabung
reaksi yang berisi bakteri dilepaskan lalu bibir tabungnya
dipanaskan atau diflambir ini berfungsi untuk mensterilisasi tabung
dan biakan dari mikroorganisme lain. Lalu masukkan jarum ose bundar
pada bakteri lalu goreskan jarum ose bundar untuk mengambil
bakteri. Pengambilan bakteri dengan menggoreskan ujung bulat pada
jarum ke media biakan induk, memungkinkan bakteri dapat terambil
banyak. Setelah bakteri terambil, mulut tabung reaksi diflambir
kembali dan disumbat dengan kapas. Ini berfungsi untuk
mensterilisasi tabung dan biakan dari mikroorganisme lain. Setiap
perlakuan di usahakan dilakukan sesuai dengan prosedur teknik
aseptis (di dekat api bunsen). Teknik aseptic ini berfungsi agar
saat inokulasi, bahan serta alat
gelas yang digunakan tetap steril. Inokula atau bakteri
digoreskan diatas permukaan media NA yang ada di dalam tabung
reaksi menggunakan metode gores dari sisi samping arah zig-zag
secara merata. Digunakan arah zig-zag agar memungkinkan koloni yang
terbentuk tersebar merata, tampak jelas dan tidak bertumpukan.
Sekeliling mulut dipanaskan kembali lalu sumbat dengan menggunakan
kapas. Ini berfungsi untuk mensterilisasi tabung reaksi dan biakan
dari mikroorganisme. Lalu disimpan ke dalam incubator pada suhu 370
C dan amati bentuk koloni yang terbentuk setelah diinkubasi selama
1x24 jam. Incubator sebagai tempat pentimpanan steril dengan
menyeting optimum bakteri untuk tumbuh.
a. Staphylococcus aureus y Staphylococcus aureus pada plat agar
Bakteri ini tumbuh membentuk bulatan-bulatan yang bersatu mengikuti
goresan-goresan yang telah dibuat oleh praktikan. Bakteri yang
tampak berwarna krem atau kuning dan berada diatas permukaan plat.
Bakteri ini bersifat aerob dan anaerob fakultatif. Bakteri aerob
adalah organisme yang membutuhkan oksigen. Bakteri anaerob
fakultatif adalah organism yang masih bisa hidup ditempat yang
mengandung oksigen. Karena sifatnya itu, bakteri ini dapat tumbuh
baik di media plat, media miring, media tegak dan media cair. y
Staphylococcus aureus pada agar miring Bakteri ini tumbuh diatas
permukaan agar sesuai dengan goresan yang diberikan diatas
permukaan agar dan tidak ada bakteri yang tembus ke bawah permukaan
agar. Karena itu bakteri ini bersifat aerob. y Staphylococcus
aureus pada agar tegak Bakteri ini tumbuh diatas permukaan agar
sampai ke dasar tabung sesuai dengan tusukan yang berikan. Karena
itu bakteri bersifat anaerob fakultatif. y Staphylococcus aureus
pada media cair Bakteri ini tumbuh hamper diseluruh media cair
tetapi banyak koloni bakteri yang mengendap di bawah permukaan
media. Warna media berubah menjadi agak keruh dan ini menandakan
bahwa bakteri tumbuh di dalam media. Walaupun di media cair,
bakteri
ini tetap akan tumbuh. Karena bersifat anaerob fakultatif,
bakteri ini tidak bergerak mendekati permukaan media.
b. Pseudomonas aeruginosa y Pseudomonas aeruginosa pada plat
agar Bakteri ini tumbuh membentuk warna hijau kebiruan yang tumbuh
di atas permukaan plat. Bakteri ini bersifat aerob. Aerob adalah
organism yang membutuhkan oksigen y Pseudomonas aeruginosa pada
agar miring Bakteri tumbuh diatas permukaan miring sesuai dengan
goresan yang dibuat oleh praktikan dan berwarna hijau kebiruan. ini
menandakan bahwa bakteri ini bersifat aerob. y Pseudomonas
aeruginosa pada agar tegak bakteri tumbuh dipermukaan atas agar
sampai dasar tabung yang diberi tusukan. Warna bakteri ini adalah
hijau kebiruan tetapi di bekas tusukan warna bakteri putih. Bakteri
ini tidak menyebar keseluruhan pada agar. Oleh karena itu bakteri
ini bersifat aerob. y Pseudomonas aeruginosa pada media cair
Bakteri ini menyebar keseluruhan dari atas permukaan hingga dasar
tabung tetapi banyak koloni bakteri yang terbentuk diatas permukaan
media NB. Warna bakteri adalah putih dan memiliki sifat aerob.
c. Bacillus subtilis y Bacillus subtilis pada plat agar Bakteri
ini tumbuh diatas permukaan media, ini menunjukkan bahwa bakteri
ini bersifat aerob. Aerob ini adalah organism yang membutuhkan
oksigen ini ditunjukkan dengan pertumbuhan bakteri yang menuju ke
atas untuk mendapatkan oksigen yang lebih banyak. Pertumbuhan
bakteri ini lebih banyak dibandingkan dengan pertumbuhan bakteri di
media lain ini disebabkan karena luas permukaan sentuh media plat
dengan oksigen lebih banyak. y Bacillus subtilis pada agar miring
Bakteri ini tumbuh di atas permukaan agar miring sesuai dengan
goresan yang dibentuk oleh praktikan. Warna bakteri ini adalah
putih dan bakteri ini memiliki sifat aerob. Pada agar miring ini,
pertumbuhan bakteri banyak sama halnya dengan pertumbuhan
bakteri
pada media plat karena agar miring atau media miring ini
memungkinkan tersentuk oleh oksigen untuk mendapat nutrisi bagi
bakteri. y Bacillus subtilis pada agar tegak Pertumbuhan bakteri
pada agar tegak lebih sedikit dibandingkan dengan pertumbuhan
bakteri pada media plat agar dan media miring. Bakteri ini tumbuh
melintang ke dalam media tegak hingga hampir dasar tabung tetapi
pertumbuhan bakteri pada permukaan agar lebih banyak. Ini karena
bakteri bersifat aerob yang bergerak ke atas untuk mendapatkan
oksigen sehingga pertumbuhan bakteri lebih banyak tumbuh di atas
permukaan media tegak ini. y Bacillus subtilis pada media cair
Warna media NB menjadi keruh setelah dimasukkan bakteri, ini
menunjukkan bahwa bakteri ini tumbuh di media cair ini secara
menyebar. Bakteri pun banyak tumbuh di atas permukaan media cair
ini dikarenakan bakteri bergerak ke atas untuk mendapatkan oksigen
lebih banyak.
d. Escherichia coli y Escherichia coli pada plat agar Bakteri
ini tumbuh di atas permukaan plat agar dengan warna putih. y
Escherichia coli pada agar miringDari hasil pengamatan dapat
dilihat mulai terbentuknya satu koloni bakteri dan terdapat goresan
yang nampak samar. Pada suatu percobaan pada umumnya bentuk koloni
yang terbentuk di medium agar miring adalah berwarna putih.
Keuntungan media agar miring ini yaitu luas permukaan yang kecil
sehingga peluang kontaminasi rendah dan dapat memperluas bidang
untuk digunakan strain murni (indukan murni). Sedangkan kerugiannya
hanya memuat sedikit mikroorganisme. Media agar untuk bakteri
digunakan media NA (Nutrien Agar) karena komposisinya yang terdiri
dari ekstrak daging sapi di dalamnya yang mengandung protein,
karbohidrat, vitamin, dan sedikit lemak, juga terdapat adanya
faktor pertumbuhan yang tidak mampu disintesis mikroorganisme.
y
Escherichia coli pada agar tegak
Bakteri ini tumbuh di atas permukaan agar tegak dan ada sedikit
cairan keruh yang terdapat pada permukaan atas media tegak ini.
Warna bakterinya adalah putih. Terdapat juga bakteri pada bekas
tusukan jarum ose lurus. y Escherichia coli pada media cair Pada
media cair ini, bakteri banyak tumbuh di bawah permukaan media cair
sehingga mempunyai sifat anaerob. Anaerob ini merupakan organism
yang tumbuh tanpa oksigen molecular.
VII. Kesimpulan 1. Teknik inokulasi merupakan menanam inokula
secara aseptic ke dalam media steril baik pada media padat maupun
cair. 2. Inokulasi dapat dilakukan pada media plat agar, media agar
miring, media agar tegak dan media cair. 3. Hasil dari inokulasi
yaitu o Staphylococcus aureus bersifat aerob. o Pseudomonas
aeruginosa bersifat aerob. o Bacillus subtilis bersifat aerob. o
Escherichia coli bersifat anaerob. 4. Beberapa metode yang
dilakukan dalam proses inokulasi adalah metode gores dan metode
tusuk. 5. Proses inokulasi harus benar-benar aseptic atau steril
supaya tidak terjadi kontaminasi oleh mikroorganisme lain.
VIII. Daftar Pustaka Dwidjoseputro, D. 1998. Dasar-Dasar
Mikrobiologi. Djambatan : Malang. Winarni, D. 1997. Diktat Teknik
Fermentasi. Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS : Surabaya.
Diliello.R.L.2002. Methods In Rood and Dairy Microbiology. Avy
Publishing. Inc. New York. Stanier, Y.R. Dkk. 2001. The Microbial
World. Prenticel Hall. Inc. EigleWood. New Jersey.
