Actividad de autoestudio.Observacin de microorganismos tincin de Gram.1. Que es una tincinLa tincin es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de los microorganismos poder realizar la observacin en microscopio ptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento previo. De acuerdo a la reaccin que ocurre, existen diferentes tipos de tincin.2. Clasifique los tipos de tinciones y porque se clasifican de esa manera.Tincin simple:Tincin diferencial:Tincin especifica:

En este tipo de tincin el colorante a utilizar solo va a denotar la morfologa celular: tamao, arreglo y forma.En este procedimiento se utiliza solo un colorante. Puede ser de manera directa: tie a la bacteria. Indirecta: tie el fondo no a la bacteria.En este tipo de tincin el colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre clulas bacterianas o entre partes de una misma clula. Separa los microorganismos observados de acuerdo a sus caractersticas.

Se utiliza ms de un tinte o bien ciertos reactivos complementarios para la tincin.

Este tipo de tincin se utiliza para identificar estructura celulares especficas. Un ejemplo d este tipo de tincin es la tincin selectiva de esporas, flagelos o capsula.

3. Para que se utilizan cada una de las tcnicas mencionadas.Los diferentes tipos de tinciones tiene un objetivo especifico, el uso de cada una de ellas nos revelan datos que importantes de la estructura celular bacteriana.Tincin simple: solo se denota la morfologa celular: la forma, tamao, agrupacin. En las tinciones simples se usa un nico colorante de carcter bsico. Todas las clulas de la preparacin quedan teidas y se observan del mismo color. Se realiza la fijacin, por calor, de la muestra al portaobjetos. Se aade el colorante y se deja actuar el tiempo necesario para que se absorba. Posteriormente se retira el exceso de colorante y la preparacin est lista para ser observada.Tincin diferencial: separa los microorganismos de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas. Las tinciones diferenciales se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. Se basan en el uso de dos colorantes. Se realiza una tincin primaria, con la misma tcnica de la tincin simple y posteriormente una tincin de contraste para teir las clulas que no se hayan teido previamente. La tinciones diferenciales ms importantes son la tincin de Gram y la tincin de cido-Alcohol Resistencia

Tincin especfica: es utilizada para la tincin especifica de elementos celulares objetivos. Las tinciones especficas revelan estructuras celulares. Se pueden teir selectivamente las esporas, los flagelos o las cpsulas.

4. Mencione los dos primeros pasos de la tincin a utilizarse en el laboratorio y qu importancia tienen los resultados.La tincin que se va a realizar en el laboratorio de microbiologa es la tincin de Gram:Las dos primeros pasos a seguir son los siguientes:Agregarle el colorante bsico durante 1 minuto y luego lavarlo con agua: el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana.Agregar el mordiente o lugol: el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formacin de un complejo cristal violeta- yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. Estos dos primeros pasos son importantes pues son los que harn la diferencia en el resultado. Se diferenciaran las microorganismo en bacterias Gram positivas y Gram negativas esto debido a las diferencias en la estructura celular de las misma. El cristal violeta no saldr de las clulas Gram negativas al momento de ser aplicado el alcohol acetona en cambio las clulas Gram positivas s, es por esto que es necesario colorearlas con a safranina.5. Mencione el orden de utilizacin de los reactivos de las tinciones a utilizar y los tiempos.En laboratorio la tincin que vamos a utilizar es la tincin de Gram, esta es una tincin muy utilizada en los laboratorios de microbiologa por su sencillez y economa y fue desarrollada por el cientfico dans Hans Cristian Gram en el ao 1984. Es definida como una tincin diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.Los principios de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. El orden de los reactivos es el siguiente:Pasos:Mtodos:Tiempo:

Colorante bsico:Violeta cristal. Se tie por 1 min.Ahora se lava con agua.

Mordiente.lugol 1 a 2 min. Se lava con agua.

Decolorante:Alcohol/acetona15 seg, el violeta se decolora de las clulas Gram negativas. Se lava con agua.

Colorante contraste:Safranina o fusinaDe 1 a 2 min. Lavar con agua y secar.

Estos so otros que encontr ms sencillos.Cubrir frotis con tinte cristal violeta (1 minuto).2. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.3. Cubrir frotis con Yodo (1 minuto).4. Enjuague con agua destilada.5. Enjuague la laminilla con alcohol etlico 95% (no exceder los 30 seg).6. Enjuague la laminilla con agua destilada.7. Cubrir frotis con tinte safranina (1 minuto).8. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.9. Secar laminillas con papel bibulous para remover el exceso de agua( Creo que solo es la de grama pero por si las moscas tambin aadir esta.)Tincin acido resistente:Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente. El frotis se tie durante unos 5 min con Fucsina fenicada aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar.6. Que es un colorante y que caractersticas tienen.Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a clulas, tejidos, Fibras, etctera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes naturales, los cuales son extrados de plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el laboratorio.Qumicamente, el colorante est constituido de un componente cromforo y un auxcromo. El cromforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene una absorcin caracterstica en la regin ultra- violeta o visible; dicho de otra forma, es la capacidad que tiene la molcula para que sus electrones absorban energa o luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel energtico. Cabe mencionar que esta longitud de onda corresponde al rango de espectro visible. .Los auxcromos son grupos funcionales o radicales que constituyen una molcula y poseen carga parcial positiva; tienen la funcin de intensificar la formacin de color mediante la accin de grupos de tomos no saturados; su funcin es desplazar a los cromforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad.Es de esta manera que estn estructurados que los colorantes adquieren las siguientes funciones: Permiten hacer visibles los objetos transparentes y microscpicos. Revelan su forma y su tamao. Muestran la presencia de estructuras internas y externas. Producen reacciones qumicas especficas.7. por qu los colorantes tienen la capacidad de teir una muestraCapacidad de teir: Los colorantes suelen ser molculas orgnicas que presentan anillos aromticos y que absorben la luz visible por efecto de los electrones asociados a combinaciones de tomos llamados Cromforos.

8. Que le confiere a los colorantes la capacidad de unirse a los tejidos a las clulasPara que el colorante pueda teir un tejido ha de ser capaz de unirse a las estructuras celulares. El elemento qumico que le confiere esta capacidad se denomina grupo Auxocromo.

9. Clasifique los colorantes por origen, por grupo o por incorporacin.

De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes Naturales, los cuales son extrados de plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el laboratorio.

Segn los Grupos Auxocrmos y Apetencia Tisular.

Colorantes cidos: como por ejemplo la eosina, colorante cargado en forma negativa, se une a componentes celulares cargados positivamente. Estos componentes cargados positivamente se denominan acidfilos, porque tienen afinidad por los colorantes cidos. Por ejemplo, estos colorantes se unen a grupos aminos de las protenas. Estas protenas pueden pertenecer al citoesqueleto de la clula o hallarse en la matriz extracelular. Debido al elevado contenido de protenas del citoplasma la eosina es un excelente colorante citoplasmtico. La eosina se une tambin a las membranas plasmticas, sin embargo, se desconoce la naturaleza qumica de esta unin. Las clulas que presentan un gran desarrollo de membranas (muchas mitocondrias, mucho retculo endoplasmtico liso, etc.) son sumamente acidfilas, o sea, se tien intensamente con la eosina.

Colorantes bsicos: como por ejemplo el azul de metileno, colorante cargado positivamente, se une a componentes celulares cargados negativamente. Estos componentes cargados negativamente se denominan basfilos, porque tienen afinidad por los colorantes bsicos. Por ejemplo, estos colorantes se unen al ncleo y ciertas regiones del citoplasma. Como caso particular, la hematoxilina no tiene carga, para teir un tejido se la une a un mordiente que junto a la hematoxilina forman una laca. La laca es bsica y por lo tanto se une a cargas negativas de la clula o matriz extracelular.

Colorantes neutros: son colorantes en los que la porcin cida y la bsica colorean. Tien las partes bsicas de una clula de un color y las partes cidas de otro. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Ej. el eosinato de azul de metileno.

Colorantes indiferentes: tien aquellas estructuras o sustancias que los disuelven ms fcilmente que el lquido en que estn preparados. Un ejemplo es el colorante sudan, un colorante de lpidos.

Segn el grupo cromforo

Colorantes nitradosColorantes azoicosColorantes quinoidesColorantes derivados del dibenzopiranoPtalocianinas

Segn su incorporacin:Colorantes vitales: aquellos q son captados nicamente por celulas vivas.Colorantes de exclusin: Solo son incorporados por celulas muertas presentes en cultivo. Se basa en que la membrana de las celulas muertas no es capaz de funcionar como barrera de entrada para ese colorante.

10. Como se unen los colorantes a los sustratos o muestras

MECANISMOS DE UNIN Tincin-Sustrato

Relaciones electrostticas Acido-Base

Enlaces coordinados, mordientes y quelantes: Aumentan la reactividad del tejido estableciendo una interaccin tejido colorante.

Enlaces covalentes Isiotiocianatos - Sustrato

Puentes de hidrgeno Colorante-sustrato en soluciones no acuosas Interacciones hidrfobas en la disolucin diferencial: coloraciones de lpidos Fuerzas de Van der Waals

Impregnaciones El colorante forma agregados metlicos insolubles que quedan retenidos en el tejido gracias a la malla molecular creada en el proceso de fijacin.

11. Clasifique los colorantes de las tinciones de la prctica

12. Como est formado el lugol para Gram y cul es la funcin de sus componentes

El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.El mordiente es cualquier sustancia que forma compuestos insolubles con colorantes y determina su fijacin en las bacterias.

13. Cmo se ponen de manifiesto las diferentes bacterias en la tincin de Gram? Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndosebacterias gram positivasa las que se visualizan de color morado, ybacterias gram negativasa las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.14. Factores que alteran los resultados de las tinciones 1. Edad de la bacteria.2. Errores del operador.3. Uso de antibiticos15. Qu importancia tiene la tincin de gran en la taxonoma bacteriana

Una tcnica de coloracin y la ms conocida es la tincin de Gram. Sobre la base de la tincin de gran, las bacterias se clasifican en dos grupos: gram positivos y gram negativos. Las bacterias Gram positiva y Gram negativas tien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la clula bacteriana sirve para definir su tamao y su forma al organismo as como para prevenir la lisis osmtica. 16. Para explicar el mecanismo de la tincin de gram se han propuesto varias hiptesis fundadas en la naturaleza qumica de las paredes celulares de los microorganismos. POR SUBGRUPO DE SEMINARIO REALICEN EN CARTULINA O PAPELOGRAFO LA PARED CELULAR DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS Y ALCOHOL ACIDO RESISTENTEDescripcin de la tincin de GRAM:Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las grampositivas como las gramnegativas, estn teidas de azul.El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situacin.Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente, provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas grampositivas son todava azules, pero las gramnegativas son incoloras.Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules.17. EXPLIQUE CUAL ES LA DIFERENCIA EN LA DECOLORACION ENTRE BACTERIAS GRAM POSITIVAS, GRAM NEGATIVAS Y ALCOHOL RESISTENTESLa diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente, provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular.Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente.18. Qu precauciones debemos de tomar para obtener buenos resultados en las tinciones a realizar en el laboratorio?En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas: extensin, fijacin, tratamiento con colorantes y observacin. Extensin: Se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio. Si la muestra es lquida se hace directamente y, si es slida, hay que resuspenderla previamente en una gota de H2O.Fijacin: Tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las protenas para facilitar la accin del colorante. Normalmente se realiza con calor, pasando la muestra repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.Tincin: Se realiza aadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a los procesos anteriores.

MICROSCOPIA: El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto pequeo. Es el instrumento que ms se usa en los laboratorios que estudian los microorganismos.Tincin adecuadaEn su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la inmersin de la muestra (antes o despus de la fijacin y el montaje) en la solucin colorante, seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin embargo, requieren del uso de unmordiente, esto es, un compuesto qumico que reacciona con el colorante para formar unprecipitadocoloreado insoluble. Cuando la solucin de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tincin mordentada permanece.La mayora de los colorantes utilizados en microscopa se encuentran disponibles comocolorantes certificados. Esto significa que los colorantes ofrecidos por el fabricante han sido evaluados por un organismo independiente, laBiological Stain Commission, y que este organismo ha determinado que el producto ofrecido cumple o excede ciertos estndares de pureza, concentracin de sustancia colorante y desempeo en las tcnicas de tincin empleadas. Estos estndares son publicados detalladamente en la revistaBiotechnic & Histochemistry.Muchos colorantes presentan una composicin diferente entre diferentes fabricantes. La utilizacin de colorantes certificados elimina una fuente de resultados inesperados.19. Defina lo que es un frotis Un frotis es un mecanismo cientfico que consiste en el extendido de una gota en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.

20. Cul es la finalidad de fijar las muestras biolgicas en el porta objeto???????Se fija el frotis por calor o por agentes qumicos. Con las siguientes finalidades:- Se evita la deformacin de las clulas con el colorante.- Para posicionar las estructuras internas y externas de la clula- Adems se mata al microorganismo.- Preserva la morfologa general pero no las estructuras internas.-Protege la subestructura fina y la morfologa de los microorganismos delicados de mayor tamao

21. Por qu es necesario utilizar el aceite de inmersin para la observacin de los microorganismosLa mayor resolucin ganada a travs del uso de aceite de inmersin habilita a los usuarios a enfocar objetos muy pequeos que no se resolvera usando objetivos secos. Los objetivos de aceite inmersin son usados para la observacin objetivos muy pequeos, como las bacterias individuales y aplicaciones de alta resolucin, como el TIRF y las aplicaciones de fluorescencia confocal

22. Qu funcin tiene el yodo en la tincin de Gram

El I2entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta. Ellugoles un compuesto formado por yodo en equilibrio con yoduro de potasio, el cual est presente para solubilizar el yodo, y acta de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana.

23. Menciona cinco bacterias gran positivas / Gram negativa y la enfermedad que produce

Gram positivas 1- Bacillus anthrasis causante del Antrax,2- Clostridium, perfringens, causante de enteritis necrosante y gangrena, 3- Clostridium tetani, causante del ttanos, 4- Clostridium botulini, causante del Botulismo, 5- Corynebacterium pyogenes, causante de abscesos hepticos,6- Lactobacillus acidofillus, usados en la fabricacin de yogurt y quesos,7- Listeria monocytogenes, causante de la Listeriosis, 8- Staphylococcus aureius causante de amigdalitis, atritis y muchas otras infecciones y 9- Streptococcus epidermidis causante de fornculos, acn y abscesos cutneos.

Gram negativas 1- la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), 2- meningitis (Neisseria meningitidis) y 3- sntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. 4- Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran nmero de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi)

24- Cules son las fuentes de errores ms comunes de error en la tincin de gran

Los peores obstculos de la Tincin, que impiden conseguir el resultado perseguido, son los errores del tcnico. Para evitarlos hay que elegir bien los reactivos y ser muy cuidadosos al ejecutar la tcnica. A continuacin describimos algunas de las fuentes de error: Impurezas en los reactivos de Tincin. Lavados excesivos generan errores en la coloracin. Fijar frotis sobre la llama del mechero en excesivo hace que la muestra se queme. Concentracin inadecuada de los reactivos de tincin. pH inadecuado. El colorante se fija a la clula por mecanismos fsico-qumicos, que se alteran si el Ph no es el apropiado. Los colorantes pueden ser cidos, bsicos o neutros. Tiempo de Tincin incorrecto. Temperatura suficiente.

25- A qu se debe el distinto comportamiento de las bacterias segn sean Gram+ o Gram-?El distinto comportamiento en la Tincin se piensa que es debido a las diferentes capas superficiales o paredes de las dos bacterias (Tipos de Clulas).Esto se debe a la diferencia en su pared celular y bsicamente hay dos causas diferentes: A la cantidad de fosfolipidos que tienen la gram negativas es mayor que las gram positivas. A los peptidoglicanos, que es mayor en las gram positivas que en las gram negativas.

26- Para qu se necesita el aceite de inmersin?El aceite de inmersin tiene un indice de refraccin similar al del vidrio (1,5 aprox.) y con el se elimina casi completamente los rayos de la luz y aumenta en gran cantidad la eficacia del uso del microscopio.Al ofrecer un ndice de refraccin similar al del vidrio, el objeto aparece como "incluido en el vidrio del objetivo" eliminando el efecto reflector del vidrio exterior del. Eso permite lograr mucho mayores aumentos con menor distorsin esfrica, menor aberracin cromtica y mayor luminosidad o "abertura de pupila". se utiliza para el objetivo de 100X.

27- Que es la tincin de zeihl nelssen y la Kinyoum Tincin de ziehl neelsen (BAAR): es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, usada para la identificacin de microorganismos patgenos, como M. tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.Fundamento: La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloracin con cidos fuertes despus de ser coloreadas con solucin de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominacin general de bacterias cidoresistentes o cido-alcohol resistentes.La cido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos despus de someterlos a la accin de cidos y alcohol y est determinada por la presencia en la pared celular de los cidos miclicos que son cidos grasos de cadenas ramificadas de alto peso molecular (60 a 70 tomos de carbono). Las micobacterias son bacilos cido-alcohol resistentes, cortos, ligeramentecurvos.El gnero Mycobacterium, incluido en esta clasificacin, comprende especies patgenas para el hombre, animales y especies saprfitas.El grado de cido-alcohol resistencia es variable entre las especies de este gnero y est relacionado muchas veces con las condiciones culturales, no pudiendo utilizarse esta diferencia para distinguirlos entre s.Los bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR) se observan de color rojo al ser coloreados con los colorantes para Ziehl Neelsen, mientras que otrosgrmenes y clulas toman distintos tonos de azul debido al azul de metileno que se utiliza como colorante de contraste.La coloracin de Ziehl Neelsen consituye una tcnica sencilla rpida y econmica, de baja sensibilidad pero es una valiosa herramienta para detectar los casos de tuberculosis pulmonar

Tincin de la Kinyoum: es otro mtodo utilizado para la tincin de microorganismos resistentes a los cidos. Es similar a la tincin de Ziehl-Neelsen, con la diferencia principal de que no se calienta la diapositiva. Bajo el microscopio, los organismos manchados aparecern de color azul. El procedimiento para aplicar tincin de Kinyoun es el siguiente: 1. Cubre las diapositivas con carbolfucsina Kinyoun durante 5 minutos y enjugalas con agua hasta que salga clara. 2. Cubre las diapositivas con cido-alcohol - 3 por ciento de HCl en etanol - durante 3 minutos y enjuaga con agua hasta que salga clara. 3. Cubre las diapositivas con colorante azul de metileno durante 3 minutos y enjuaga suavemente con agua hasta que salga clara. 4. Deja que se sequen al aire antes de verlas.

28- Cual es los componentes de la pared celular de las bacterias alcohol acido resistente.

Qumicamente, esta pared celular consiste en un esqueleto formado por dos tipos de polmeros, unidos covalentemente entre s:

un peptidoglucano especial (la diferencia ms importante es que en vez de N-acetil murmico existe N-glucolil-murmico); un arabinogalactano de gran peso molecular. Ambos polmeros se encuentran enlazados a travs de fosfodister entre una unidad de murmico y una de las arabinosas. Pero a su vez, este esqueleto se une covalentemente a los cidos miclicos.

Los cidos miclicos son -hidroxicidos grasos ramificados en a , cuya longitud de cadena es grande (desde C78 a C91 en Mycobacterium). Estn unidos al esqueleto de la P.C. de forma uniforme, a travs de enlaces con los -OH en 5 de las unidades de arabinosa.

Por lo tanto, el esqueleto de la P.C. de estas bacterias consiste en:

peptidoglucano---arabinogalactano---cidos miclicos.

Pero aparte de este esqueleto complejo, la P.C. de las bacterias cido-alcohol resistentes exhibe una variedad de lpidos:

1) Glucolpidos:

a) Micolatos de trehalosa: dos unidades de trehalosa unidas entre s por enlace a (11), y en donde los grupos 6 y 6 estn unidos con cidos miclicos. Constituyen el llamado factor de crecimiento en cuerdas, debido a que son responsables de la agregacin de los individuos bacterianos en forma de cuerdas.

b) Sulfolpidos de trehalosa: estn localizados en la periferia de la P.C., y parecen ser impartantes factores de virulencia. En Mycobacterium tuberculosis (el bacilo de la tuberculosis) estos sulfolpidos de trehalosa funcionan como evasinas, es decir, facilitan el que la bacteria escape a la accin de los macrfagos inhibiendo la fusin del fagosoma con el lisosoma, lo cual puede explicar el hecho de que estosmicroorganismos tengan xito como parsitos intracelulares.

c) Micsidos: Localizados en la periferia, consisten en la unin por enlace ster entre cidos miclicos y azcares (incluyendo cidos urnicos, desoxiosas, aminozcares, etc.).

2) Ceras: Unin de cidos miclicos con ftioceroles (alcoholes ramificados de alto peso molecular: C30 - C34).

El alto contenido en lpidos confiere una serie de propiedades a estas bacterias (aparte de la cido-alcohol resistencia ya citada):

aspecto y consistencia crea de sus colonias;

crecen formando grumos en medios lquidos; gran impermeabilidad de la P.C., que a su vez condiciona una gran resistencia a la desecacin y gran resistencia a sustancias antibacterianas (detergentes, oxidantes, cidos, bases, etc).

Bibliografia : http://www.britanialab.com/productos/183_inserto_es.pdf http://www.ehowenespanol.com/tres-tipos-tincion-acidoresistente-info_242576/ http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/05pared.htm#_Toc53398266http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gramhttp://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practico4.pdfhttp://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practico4.pdfhttp://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practico4.pdfhttp://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/curso/UNI_02/u2c1s3.htmhttp://academic.uprm.edu/~lrios/3725/Ejercicio4.pdf