Percorso formativo BC04

STUDENTI: Matteo Petrungaro (Liceo G. DeSanctis, Roma)

Sara Todisco (Liceo Nomentano, Roma)

TUTORS: Deborah Pajalunga

Serena Camerini

Marialuisa Casella

DALLA PROLIFERAZIONE AL DIFFERENZIAMENTO CELLULARE: LA RICERCA NELLA DISTROFIA MUSCOLARE

Attività svolte

Premessa:

La funzione cellulare dipende dai livelli e dalla struttura delle proteine sintetizzate.

Scopo: Individuare le differenze morfologiche e biochimiche tra

fibra muscolare sana (WT) e distrofica (MDX) che spieghino la

diversa funzione tra i due sistemi modello.

Metodi utilizzati: • Immunofluorescenza

• Spettrometria di massa

• Western blot

Western blot e spettrometria di massa

Miosina

Ciclina A

P TD P TD

MDX WT

165

115

80

62

52

42

32

24

17 13

1

2

3

4

5

Si scelgono le bande da tagliare per l’analisi proteomica mediante spettrometria di massa

P TD P TD P TD P TD MDX WT WT MDX

La Miosina è correttamente assente nelle cellule proliferanti sia sane, che malate. Al contrario è espressa ad alti livelli nelle cellule differenziate sia sane, che malate. Il WB per la Ciclina A mostra che questa proteina è specifica delle cellule proliferanti WT ed MDX, essendo assente da entrambi i modelli differenziati.

Analisi delle proteine estratte

mediante la Spettrometria di massa

0

10

20

30

40

50

60

WT P WT TD mdx P mdx TD

myosin 3 myosin 4 myosin 6 myosin7 myosin 8

La troponina C è una proteina responsabile della contrazione muscolare. Come

visibile dal grafico nelle MDX è notevolmente minore. I livelli di Miosina

risultano quasi invariati, come già evidenziato dal WB.

Immunofluorescenza

L’immunofluorescenza è un metodo che ci ha permesso di marcare la Miosina (una proteina tipica delle cellule differenziate) con un anticorpo specifico. Come si può vedere nel muscolo MDX la Miosina non è correttamente strutturata e la fibra muscolare non ha una morfologia normale. Questo dimostra che diversità strutturale compromette la funzione cellulare.

WT

MDX

TD P

Mio

sina (M

HC

)

Vorremmo ringraziare le nostre tutor Deborah, Serena e

Marialuisa che ci hanno seguito e guidato in questo percorso.

Un ringraziamento particolare al dottor Crescenzi che ci ha

accolti con grande gentilezza e competenza.