Desproteinizados y Ácido Úrico

8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico

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03/04/16 1T. Haydée Zúñiga Cáceres

ESPROTEINIZA OS

Principios. PrincipalesAplicaciones


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Desproteinización

• Es la remoción o eliminación de proteínasdel plasma, suero ó sangre con el fn deobtener un fltrado o sobrenadante libre de

proteínas y poder cuantifcar la sustanciamateria de análisis sin intererencias.• Evita: la ormación de espuma, turbidez,

precipita-dos y que las proteínasinterferan reaccionando con los reactios.


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Condiciones de un buen

desproteinizante:

!. "o agregar ninguna sust. que pueda intererircon las determs. posteriores.

#. "o pptar ni retener por adsorción lasustancia a determinar, lo que se erifca pormétodos de recuperación $agregar al líq. adesprot. una cant. conocida de la sust. aalorar, la que debe recuperarse en cantidadapro%imadamente igual a la teórica desp. de

desprot.&'. Eliminar otras susts que puedan estar ptes. enel (uido a desproteinizar y que interferan conlas t)cnicas que se aplicarán posteriormente.


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Métodos de desproteinización:

A) M. Físicos: "o alteran las proteínas q separan

!. *iálisis#. +ltracentriugación'. +ltrafltración. dsorción por susts particuladas.

B) M. Físico Químicos: roteínas se separan %pptación, q generalm. altera su estado ísicoinicial, y no puede ser retomado:

!. *esnaturalización % el calor#. *es/idratacióna& *es/id. con solentes miscibles con el

aguab& *es/id. con soluciones salinas


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C) M. Químicos: 0ormación de salesinsolubles:

1. Con ácidos: 12, t3ngstico,perclórico, metaosórico, molíbdico,osot3ngstico. 4e ormansales proteicas insol. con las ormascatiónicas de las mol)culas proteicas.

2. Con metaes pesados: 5n, 6g, 2d,0e, b. 4e orman proteinatos insols.con las ormas aniónicas de las mol)culasproteicas.


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T. Haydée Zúñiga Cáceres

!esproteini"ación es necesaria p. ladeterm. de diersos metabolitos yconiene realizarla rápidam. despu)s de la

recolección de las muestras.uede realizarse utilizando dierentesagentes que proocan la pptación de lasproteínas, que se separan por

centriugación ó fltración, recogi)n-doseun so#renadante i#re de proteínas.


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Desprot. ácidos más utiizados!

". #CI O T$N%STICO $Foin %u)Na2WO4 + H2SO4 H2WO4 + Na2SO4

1 vol. Sanre + ! vol. de H2O + 1 vol Na2WO4 1" # + 1 $ol. H2SO4 "%&& N.

&. #CI O TRIC'OROAC(TICO

1 vol sanre + ' vol. (c. )*A 1" #

). #CI O PERC'*RICO

1 vol sanre + 1 vol H2O + 2 vol H*O4 & N


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Desprot. acaino más utiizados!

1. SO+O%,,: S-lato de /inc en 0edio alcalino SO4/n + 2 NaOH SO4Na2 + /nOH2SO4/n + 3aOH2 SO43a + /nOH2

TIT-'AR

:SO4/n # 5e6en corresponderse

3aOH2 "%7 N vol a vol en pcia de

ó NaOH enoltale8na 1# en etanolos desprots se p-eden -ardar en coneladores de92" ó 9" ;*% dependiendo de las s-sts


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Desproteinizante de oin /u ó #cido T0n1stico

A&ua '(m*

+( m* ,(- m* 1 m*

Muestra 1(m*

san&re

1( m*pasma o

suero

1( m*

*.C..

1( m*de

/rina

0& a 1

1(m*

(- m* (2- m*

324/5 (66

1(m*

(- m* (2- m*

!7*8C79: 1:1 1:1 1:- 1:1


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! # '

gua destilada '.7 m8 '.7 m8 '.7 m8

4uero 9.7 m8

4angre 9.7 m8 9.7 m8

rina '.7 m8

12 7 ; ! m8

1ungstato "a !9; 9.7 m8

6#4 #


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+2todos de cuanti3icación

a4 +2todo 5u6mico 7+. de Cara8a94

>c. @rico A 6'B!#,9 Aantoína

C/2 A"u de0un&steno


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#CIDO $RICO+2todo de Cara8a9

• Fundamento:El ác. 3rico es o%idado a alantoína y 2# porel ácido osot3ngstico en solución alcalina.

El ác. osot3ngstico es reducido a azul detungsteno que se mide a ?!9 ;m

< >c. @rico A 6'B!#9 Aantoína C/2 A"u de 0un&steno


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#CIDO $RICOMétodo de *ara=a>

REACTI:OS!

;

Tun1stato Na "< =

; #c. Su30rico &>) N

;

Carbonato de Na "? =

;

R. #cido 3os3ot0n1stico

; Stoc@ #c. $rico "d'

Sos Sts de B "< 9 " m1>d'


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Desproteinizado!

trado? ó @.. = 1.- m*? .'- .1- @..

-


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Procedimiento!

F +.P. St.

A1ua

"B G G

Suero desprot. 7"!"


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4toc cido Drico 1 m&d*

de a&ua

4os 4ts de: .- 1.1.- m&d* de a&ua

En 1.- m* dec4t. aG: .'- .1-

.22- m& c. Drico


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(cido ?rico0@d+ B**S)S)C DD 1""1"" DD AAMPMP $E AAS)S)

1 - 10 0.0075 - 0.15 mL suero

0.15 - 1.5 x - 100 mL suero

= 0.0075 x 100 = 5 mg/dL suero 0.15

= 0.015 x 100 = 10 mg/dL suero

0.15

= 0.0225 x 100 = 15 mg/dL suero

0.15


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*S) F AS) G AMP

(cido ?rico0@d+ **S)S) D A D AMPMP AS)

actor 1 III. +actor 2 III

actor 7 III.III.

IIIIII @ 7 p # III @ 7 p # III


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(cido ?rico0@d+ B**S)S)C DD 1""1"" DD AAMPMP $E AAS)S)

1 - 100 0.0075 - 0.015

0.015 - 1.5 x - 100 mL orina

= 0.0075 x 100 = 50 mg/dL orina 0.015

= 0.015 x 100 = 100 mg/dL orina

0.015

= 0.0225 x 100 = 150 mg/dL orina

0.015


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#CIDO $RICO +2todo enzimático

; undamento!

#c. $rico K &

O K O

-ricasa

Aanto6na K

O

K

CO

O

K ? A K Coro3eno

O

Luinona

cooreada K

O


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b4 +2todos enzimáticos

#c. $rico K &&O K O& -ricasa Aanto6na K

&

O

&

K CO

&

1. Hor espectroIotometría diIerencia:c. Drico a#s a 2+, ;m a p3J' G de 2K a 2K, ;m a p3L'

4e mide A#s a as on&s de onda

mencionadas antes G después de aincu#ación de ác. Drico con a Uricasa pte. en suero( pasma u orina.


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Procedimiento!

B M.H. 4t.Estándar = = 2 N*4uero = 2 u* =

u /rina $1:1). 1 + + + N*

Me"c suav. e incu#. - min a ,' OC

ó 2 min a temp. am#.EnIriar G eer a -- ;m


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2. E 32/2 producido en a reacción con auricasa se puede cuanti>car así:

32/2 Etano Catalasa Acetadeído 32/

Acetadeído A! Acetadeido !3 Acetato A!3 32/ 4e mide a aparición de A!3 a,5 ;m

32/2 se det. midiendo e cromó&enoIormado P su acción oPidante so#re ao=dianisidina a -, ;m .

32/2 se oPida a ,=meti=2=#en"otia"oinonaG (=dimetianiina en pcia deperoPidasa dando un co. a"u deindamina( ue a#s a 6 ; m


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32/2 reacciona con ,(- dicoro=2=idroPi#enceno=suIónico G 5aminoIena"ona p Iormar un co.roRo de uinonimina( ue a#s a-2 nm G es proporciona a acantidad de 32/2 G por ende de

ác. Srico pte en a muestra.


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!" ác. úric# a$%. e& '"as%a se as#cia

e'ide%i#"(gica%e&)e a e&*s. cardi#+asc$,

"ares c#%# e" i&*ar)# de %i#cardi#-

accide&)e cerer#+asc$"ar- i'er)e&si(& ei&s$*ic. cardiaca.

e a 'r#'$es)# )#%ar "a c#&c. e& '"as%a

de ácid# úric# J4 0@d c#%# $& sigde a"er)a.


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TAF'A DE CONTENIDO DE P-RINAS ENA'I+ENTOS

A*7ME0/4EC/ME!AB*E4=- m&.1 &.

A*7ME0/4 A*7M70A-=1- m&.1 &.

A*7ME0/4 AE@70A

1-=1m&.1 &.

FrutaTumos de Iruta@erduras$ePcepto de&rupo deaimentos aimitar)

uecesCereaesHan $ePceptointe&ra)Be#idas $caI é( té(I)Urasas

Uuisantes*e&um#res secasCoiVorEspKrra&osEspinacas4etasHroductos

inte&raesAves $poo( pato(I)Carne $ternera(cordero( cerdo)Hescado $ePceptoos de U,)

@8sceras$8&ado(riLones(sesos)EPtracto decarneAncoas

Arenue4ardinaCa#aaMouscos


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#cido 0rico!

Componente de ries1ocardioJascuar en e S6ndrome

+etabóico


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