Upload
vera-ivkovic
View
263
Download
2
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Hromatografija
Citation preview
Gasna hromatografija (GC)
U zavisnosti od stacionarne faze:� ga sno-čvrsta (GSC) - stacionarna faza u obliku
aktivnog čvrstog adsorbenta: aktivni ugalj, teflon, silika-gel, zeoliti ili aluminijum-oksid.
Osnovni proces: adsorpcija
� ga sno tečna (GLC)- stacionarna faza je teškoisparljiva tečnost koja je u vidu tečnog slojaravnomerno nanešena preko površine inertnogčvrstog nosača.
Osnovni proces: raspodela
Mobilna fazaGas nosač: inertni gas, vrhunske čistoće�Azot ????�Helijum�ArgonRegulisati pritisak i brzinu protoka gasa nosača
Analiza - isparljiva jedinjenja� Uglavnom organski molekuli u neutralnom
obliku
� Na K utiče temperatura:
constTR
HK +∆=
303,2log
Menjanjem temperature kolone, može se uticati na vreme koje komponenta provede u koloni.
Brzina komponente u GC zavisi od:
� Isparljivosti (isparljivije brže)� Rastvorljivosti(rastvorljivije sporije)
� Polarnosti komponente i kolone (polarnije sporije)
� Temperature kolone(veća temperatura-brže)
� Brzine gasa(optimalna brzina)
� Dužine kolone(duža kolona-duže putovanje)
Osnovni delovi GC� Izvor gasa nosača sa regulatorom
pritiska i protoka
� Injektor (sistem za unošenje uzorka)
� Hromatografska kolona u termostatu
� Detektor
� Sistem za registraciju signala iz detektora (računar i pisač)
Shema GC
Injektori
Kolone: pakovane (punjene) i kapilarne
Kolone: pakovane (punjene) i kapilarne
Detektor na bazi toplotne provodljivosti Thermal conductivity detector (TC)Shema
Plameno jonizacioni detektor (FID)
Ne mogu voda, CO, CO2 i većina
neorganskih jedinjenja
Detektor na bazi zahvata elektronaElectron capture detector (ECD)
Halogeni
Kombinacija gasnog hromatografa i masenog spektrometra
�Gasno-maseniNajmoćniji uređaj za identifikaciju organskih
jedinjenja
Maseni spektrometar je detektor
Uskladiti pritiske i osloboditi se gasa nosača
High performance liquid chromatography H P L C
Tečna hromatografija visokih performansi(visoke efikasnosti)Visoko efikasna tečna hromatografija
High pressure liquid chromatography HPLCTečna hromatografija pod visokim pritiskom
� HPLCHokus-pokus liquid chromatography!
Samo tečna hromatografija
Osnovni delovi HPLC
� Izvor protoka mobilne faze: rezervoar, pumpa i filter
� Deo za separaciju: injektor, hromatografska kolona i termostat
� Detektor ili sistem detektora
Osnovni delovi HPLC
Shema HPLC
Injektor
Injektor sa petljom
Kolone
Eluiranje može biti� IzokratskoUvek ista mobilna faza, npr. 50% metanol
� GradijentnoSastav mobilne faze se menja za vreme eluiranja
Npr. prvih 5 minuta teče 50% metanol, drugih 5 minuta 60% metanol, trećih 5 minuta 70% metanol.......
Detektori
� Spektrofotometri sa protočnim kivetama, višekanalni (višezračni)
�Fluorimetri
�Hemiluminiscentni detektori
�Elektrohemijski detektori
Maketa HPLC
HROMATOGRAM
Hromatogram-zapis hromatografskog razdvajanja
� Apscisa:zapremina mobilne faze (vreme provedeno u koloni)
� Ordinata: Jačina signala (koncentracija uzorka)
KA>KB>KC
FtV RR =
Faktor zadržavanja, (retardation factor) RF
fazemob
uzorkaRF.υ
υ=
Faktor kapaciteta i faktor selektivnosti
� tR – retenciono vreme komponente koja je zadržana na koloni;
� t0 – retenciono vreme komponente koja se ne zadržava na koloni
0
0,
t
ttk R −=
,1
,2
k
k=α
Optimalno: između 2 i 6
Rezolucija
2121
12 2
2WW
tWWtt
R RR
+∆=+
−=
Loša (R<0.8) i dobra rezolucija R>1.25(2.0 )
Teorijski platoi
Visina ekvivalentna jednom teorijskom podu, VETP(H)
N
LH = L- dužina kolone
N – broj teorijskih platoa
Broj teorijskih platoa izračunava se sa hromatograma
2)(16W
tN R=
2
2/1
)(54.5W
tN R=
Kako shvatiti teorijske platoe?
Zavisnost H od brzine protoka mobilne faze
Kvalitativna i kvantitativna analiza
Hromatogrami� Šta sve možemo da “pročitamo” sa
hromatograma?
Hromatogram kod gasne hromatografije
Mogu se razdvojiti izomeri
U čemu se razlikuju škotski (skoč) i američki (burbon) viski?
HPLCEkstraktGinko biloba-hromatogram flavonoidaKolona C-18Mob.faza.60% CH3OH, brzina protoka 1 mL /min