Prognostický/prediktivní význam thymidylátsyntázy a DNA opravných genů u pacientů s nemalobuněčným

karcinomem plic

Dobrá Jana1, Kulda Vlastimil1, Pešta Martin2, Babuška Václav1, Pešek Miloš3, Šafránek Jarmil4, Černý Radim1

1Ústav lékařské chemie a biochemie, Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni, Karlovarská 48, 30166, Plzeň, Česká republika2Ústav biologie, Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni, Karlovarská 48, 30166, Plzeň, Česká republika

3Klinika tuberkulózy a nemocí respiračních, Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni, Dr. E. Beneše 13, 30599, Plzeň, Česká republika4Chirurgická klinika, Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni, Alej svobody 80, 30460, Plzeň, Česká republika

Karcinom plic

• prognostické molekulární markery– odhad průběhu onemocnění (nezávislé na léčbě)

• prediktivní molekulární markery – odhad reakce na léčbu

ÚZIS ČR, Aktuální informace č. 5/2013

• asi 80% NSCLC– heterogenní– často rezistence k chemoterapii – diagnostikováno ve vyšším stádiu

• katalyzuje metylaci dUMP na dTMP

TS (= thymidylátsyntáza)

ERCC1 (=excision repair cross-complementation group 1)

• součástí NER (nucleotide excision repair)→ opravuje DNA adukty a léze

resistence k cisplatině

Jeppesen et al. (2011) Prog Neurobiol 94, 2,169.

RRM1 (=ribonucleotide reductase subunit 1)

• gen kódující velkou podjednotku enzymu ribonukleotid reduktázy – podílí se na vzniku dNTP

• rezistence ke gemcitabinu

BRCA1(=breast cancer 1) • tumor supresorový gen - oprava dvouřetězcových zlomů

http://dx.doi.org/10.1016/S0168-9525(99)01930-7

BRCA1 deficience rezistencie k taxanům zvýšená citlivost k platinovým agens

Cíl práce

• hladina exprese TS a opravných genů ERCC1, RRM1 a BRCA1 v nádorové tkáni jako prognostické/prediktivní markery?

Soubor pacientů• 90 pacientů operovaných pro NSCLC

skupinaT N M stádium histologie

1 2 3 4 0 ≥1 0 1 I II III IV adeno SCC ostatní

muži 65 n 15 38 8 4 43 22 64 1 35 14 15 1 21 41 3

ženy 25 n 9 13 2 1 16 9 23 2 15 3 4 3 15 7 3

všichni90 n 24 51 10 5 59 31 87 3 50 17 19 4 36 48 6

100 % 27% 57% 11% 5% 66% 34% 97% 3% 55% 19% 21% 5% 40% 53% 7%

Materiál a metody: • párové vzorky: nádor - normální plicní tkáň

– NSCLC (histologicky ověřeny)

• kvantitativní RT PCR– RT s náhodnými hexanukleotidy – UPL sondy– normalizace → gen pro glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenasu (GAPDH)

Výsledky:

Porovnání nádorové a zdravé tkáně

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

ERCC1 RRM1

gen

ová

exp

rese

(re

l. j

edn

otk

y)

NSCLC tissue

normal lung tissue

• TS , BRCA1 není signifikantní

rozdíl

Porovnání histologických subtypů

0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

TS ERCC1 RRM1 BRCA1

ge

no

vá

ex

pre

se

(re

l. je

dn

otk

y)

NSCLC adeno

NSCLC epiderm

Bezpříznakové období (DFI) a celkové přežití (OS)

delší OS •AD + vyšší RRM1 (p=0,002) •SCC + vyšší BRCA1 (p=0,041)

delší DFI• NSCLC stádia 3 + vyšší RRM1 (p=0,004) a ERCC1 (p=0,038)

Závěr• hladina exprese opravných genů ERCC1, RRM1 a

BRCA1 v nádorové tkáni u chirurgicky léčených pacientů odráží prognózu onemocnění a nelze ji použít jako prediktor léčebné odpovědi na chemoterapii

• výsledky nepotvrdily prediktivní význam TS

Výhled• větší soubor pacientů• nové geny – potenciální prediktory + miRNA,

které tyto geny cílí

Poděkování:Práce byla podpořena projektem LFP UK SVV-2013-266 804 a spolufinancovaná Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Registrační číslo projektu: CZ.1.07/2.3.00/30.0022.

Děkuji za pozornost!