Penetapan Kadar Senyawa Metabolit Sekunder

5/22/2018 Penetapan Kadar Senyawa Metabolit Sekunder

1/22

Click here to download this powerpoint template : Green Floral Free Powerpoint Template

For more : Powerpoint Template Presentations

Page 1

Penetapan Kadar Senyawa

Metabolit Sekunder

Rizka Annur Putri

I21111039
http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.html


2/22



Page 2

Pendahuluan

Penetapan kadar metabolit sekunder

merupakan suatu uji kuantitatif untuk

mengetahui kadar total suatu senyawa

metabolit sekunder yang terkandung

dalam suatu sampel

Uji ini dapat diterapkan dgn metode

spektrofotometri, titrimetri, volumetri,gravimetri, dll, disesuaikan dgn jenis

senyawa yangingin ditentukan kadarnya
http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.html


3/22



Page 3

Fenolik

Ditentukan menggunakan metode Folin-Ciocalteu mengacu pada metode Bhaskar

et al (2011):

Sebanyak 0,5 mL fraksi etil asetat 0,1%ditambahkan 0,75 mL reagen Folin-Ciocalteu

10% dan 2 mL Na2CO3 (2% w/v)

Campuran dihomogenkan dengan vorteks

selama 15 detik dan dipanaskan pada suhu45oC selama 15 menit.

Absorbansi diukur pada max 745 nm

menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.html


4/22



Page 4

Kandungan total fenol dinyatakan sebagai mg/g

ekuivalen asam tanat yang diperoleh dari

persamaan kurva standar yaitu:

Y= ax + c Keterangan :

Y =Absorbansi sampel

a =Gradien x =Konsentrasi ekivalen asam tanat

c =Intersep


5/22



Page 5

Flavonoid (Chang dan Wen, 2002)

Penetapan kadar total flavonoid dilakukan

dengan spektrofotometri menggunakan reagen

aluminium klorida sesuai prosedur Chang, yaitu:

Sebanyak 2 mL larutan ekstrak dengan

konsentrasi 200 ppm

Ditambahkan dengan 2 mL alumunium klorida2% yang telah dilarutkan degan etanol,

Kemudian divortex selama 20 menit, inkubasi

campuran larutan selama 24 menit.
http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.html


6/22



Page 6

Absorbansi diukur pada 415 nm.

Dibuat perhitungan rata-rata tiga kali

pengukuran dan kandungan flavonoiddinyatakan dengan kesetaraan

pembanding baku Quersetin


7/22



Page 7

Saponin (Triterpenoid)

0,1 g daun kering dgn berat konstan

digerus menjadi serbuk halus

Dilarutkan dlm 10 ml etanol 70%

Serbuk diekstraksi di atas penangas pada

suhu 80C selama 15 menit

Absorbansi dari hasil ekstraksi diukur dgnspek uv-vis pada 365 nm

Nilai konsentrasi yg terbaca adl kadar

saponin


8/22



Page 8

Masing2 5 l ekstrak dan standar

ditotolkan pada lempeng Alumunium Silica

Gel 60 F254, dikembangkan dengan fase

gerak CHCl3:Etanol absolut (49:1),ditambah beberapa tetes etil asetat

Setelah elusi selesai, intensitas warna

yang terbentuk diukur dengan TLC-Scannerdengan max 301 nm


9/22



Page 9

Alkaloid

1 gr ekstrak dimasukkan dlm corong pisah 125

ml pertama, ditambah 20 ml H2SO4 P (1 dlm

350), dikocok kuat selama 5 menit

Ditambah 20 ml eter P, dikocok hati2, disaringlapisan asam ke corong pisah 125 ml kedua

Lapisan eter dikocok 2 kali, tiap kali dgn

penambahan 10 ml H2SO

4 P (1 dlm 350),

disaring tiap lapisan asam ke corong pisah 125

ml kedua&dibuang lapisan eter


10/22



Page 10

Ekstrak asam ditambah 10 ml NaOH LP & 50 ml

eter P, dikocok hati2

Dipindah lapisan air ke corong pisah 125 ml

ketiga berisi 50 ml eter P. Dikocok hati2,dibuang lapisan air, dicuci lapisan eter masing2

dgn 20 ml, 20 ml, & 5 ml H2SO4P (1 dlm 70)

Dilakukan ekstraksi pd corong ketiga dulu, stlh

itu corong pisah kedua


11/22



Page 11

Dicampur ekstrak asam dlm labu tentukur 50 ml,

diencerkan dgn asam smp tanda. Dilakukan thd

25 mg alkaloid pembanding tersedia

Diencerkan masing2 5 ml larutanuji&pembanding dgn larutan H2SO4P (1 dlm 70)

hingga 100 ml&ditetapkan serapan tiap larutan

pada tertentu menggunakan larutan H2SO4 P

(1 dlm 70) sbg blangko


12/22



Page 12

Alkaloid (Secara KLT)

3 g sampel ekstrak dilarutkan dalam

metanol sampai 1 mL, sehingga

didapatkan konsentrasi 3 mg/L

Sebanyak 10 L ditotolkan (n=5) pada plat

silika gel F254 (Merck) tebal 0,25 mm

sebanyak lima replikasi. Kemudian plat

KLT dikembangkan dengan fase gerak etilasetat:metanol (1:5 v/v).


13/22



Page 13

Bercak ditandai pada tepi plat dan

dideteksi dengan pereaksi semprot

Dragendorff.

Bercak yang telah ditandai atau sesuai Rf

dengan Dragendorff ditentukan AUC (luas

dibawah kurva) pada max 200 nm

menggunakan KLT-Densitometer


14/22



Page 14

Penentuan Alkaloid dengan MetodeHarborne

5 gram sampel ditimbang dalam beaker, ditambahkan

dengan 200 ml asam asetat 10% dalam etanol.

Beaker ditutup dan dibiarkan selama 4 jam.

Campuran disaring dan ekstraknya dipekatkan padapenangas air hingga volume semula menjadi 1/4-nya

Ditambahkan amonium hidroksida pekat tetes demi tetes

ke dalam ekstrak sampai endapannya sempurna.

Seluruh larutan dibiarkan tenang, endapan dikumpulkandan dicuci dengan amonium hidroksida lalu disaring.

Residu yang merupakan alkaloid dikeringkan dan

ditimbang.


15/22



Page 15

Steroid

Larutan baku:

1 mg sitosterol dilarutkan dlm etanol P scr

bertingkat shg diperoleh kadar 5 g/ml, 10

g/ml & 20 g/ml

Larutan uji:

1 gr ekstrak dilarutkan dlm 20 ml etanol, triplo

50 mg biru tetrazolium P dilarutkan dlm 10 mlmetanol P. 2 ml larutan ditambahkan ke dlm

masing2 larutan uji, larutan baku, & labu

berisi 20 ml etanol P sbg blangko


16/22



Page 16

Ke dalam tiap labu ditambahkan 2 ml

campuran etanol P & tetrametil amonium

hidroksida LP (9:1), dicampur&dibiarkan dlm

gelap selama 90 menit Diukur segera serapan larutan yg diperoleh dr

larutan uji&larutan baku pada = 525 nm

dibandingkan thd blangko


17/22



Page 17

Antrakuinon

0,1 gr ekstrak dikocok dgn 10 ml air panas

selama 5 menit, disaring panas2

Filtrat dingin diekstraksi dgn 10 ml benzen

Lapisan benzen dipisah, lapisan air

ditambah 10 ml FeCl35% dan 5 ml HCl

Campuran dipanaskan pada penangasselama 10 menit dlm tabung refluks,

dinginkan&ekstraksi dgn 10 ml benzen


18/22



Page 18

Cairan diuapkan hingga habis dgn

pemanasan lemah

Residu dilarutkan dlm 5 ml KOH 5% dlm

metanol.

Resapan diukur pd 515 nm.

Dihitung kadar total antrakuinon glikosidaberdasarkan kurva baku antrakuinon

pembanding


19/22



Page 19

Tanin

Sebanyak 50 mg contoh ditimbang kedalamtabung reaksi yang bertutup di tambahkan 5 ml

aseton 70%.

Diekstrak dengan ultrasonik selama 20 menit.

Didinginkan dalam wadah berisi air dan es batu.

Disentrifuse selama 20 menit dengan

kecepatan 2000 rpm

Sebanyak 100 mikroliter dari masing-masingcontoh dipipet kedalam tabung reaksi


20/22



Page 20

Ditambahkan air suling hingga volumenya 1 ml

Ditambahkan berturut-turut 0,5 ml FolinCiocaltea, 2,5 ml larutan sodium karbonat 20%,

dikocok

Dibaca dengan spektrofotometer pada 725

nm

Dilakukan juga penambahan pereaksi yang

sama pada standar yang dipipet dari larutan

stok 10 mg asam tanat dalam 50 ml aseton70%, dimana deret standar adalah 10, 20, 30,

40, 50, 60, 70, 80, 90 dan 100 l (Singleton

dan Rossi, 1965)
http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.htmlhttp://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/http://www.powerpointstyles.com/template-69095-green-floral.html


21/22



Page 21

Khusus untuk daun dilakukan penghilangan zat

warna klorofil sebelum dianalisis taninnya. Yaitu

dengan cara penambahan dietil eter yang

mengandung 1 % asam asetat (Makkar, 1999).


22/22



Page 22

Terima Kasih

Documents

Penetapan Kadar Senyawa Metabolit Sekunder