Penetuan Kadar Protein (Biuret)

8/13/2019 Penetuan Kadar Protein (Biuret)

1/17

A. JUDUL PERCOBAAN

Penentuan Kadar Protein dengan Metode Biuret

B. TANGGAL PERCOBAAN

22 Oktober 2013

C. TUJUAN PERCOBAAN

Menentukan kadar protein yang ada pada sampel dengan menggunakan metode

biuret

D. DASAR TEORI

Protein dan Metode Biuret

Protein adalah salah satu biomolekul raksasa yang berperan sebagai

komponen utama penyusun makhluk hidup. Protein membaa kode!kode geneti"

berupa #$% dan &$%. Beberapa makanan yang dapat men'adi sumber protein

adalah( daging) telur) ikan) susu) bi'i!bi'ian) kentang) ka"ang) dan polong!

polongan. Protein merupakan polimer alam yang tersusun dari asam!asam amino

melalui ikatan peptide) sehingga protein 'uga disebut sebagai polipeptida. #i

dalam tubuh kita protein ber*ungsi sebagai +at pembangun) pengatur pertahanan)

dan sebagai sumber energy setelah karbohidrat dan lemak. Protein dapat

digolongkan berdasarkan struktur) bentuk) dan *ungsinya. Protein menun'ukkan

berbagai *ungsi biologi.

#eret asam amino dari ber'enis!'enis protein memungkinkan molekul ini

men'alankan berbagai *ungsi) antara lain (

- ,n+im

- Protein transport

- Protein nutrient dan penyimpanan

- Protein kontraktil atau motil

- Protein stru"tural


2/17

- Protein pertahanan

- Protein pengatur

-Protein lain

Metode Biuret merupakan salah satu "ara yang terbaik untuk menentukan

kadar protein suatu larutan. #alam larutan basa) -u2akan membentuk kompleks

dengan ikatan peptida suatu protein) sehingga menghasilkan arna ungu yang

dapat diidenti*ikasi dengan spektro*otometer pada pan'ang gelombang /20nm.

%bsorbansi ini berbanding langsung dengan kosentrasi protein dan tidak

tergantung 'enis protein karena seluruh protein pada dasrnya mempunyai 'umlah

ikatan peptida yang sama persatuan berat. al!hal yang mengganggu per"obaan

ini adalahadanya urea mengandung gugus !-O!$! dan gula preduksi yang

bereaksi dengan -2.

4ntensitas arna tergantung pada konsentrasi protein yang ditera.

Penentuan protein "ara biuret adalah dengan mengukur opti"al density O# pada

pan'ang gelombang /50 6 /70 nm. %gar dapat menghitung banyaknya protein

maka perlu lebih dahulu dibuat kur8a baku9standar yang melukiskan hubunganantara konsentrasi protein dengan O# pada pan'ang gelombang terpilih.

#ibandingkan dengan "ara K'eldahl maka biuret lebih baik karena hanya protein

atau senyaa peptida yang bereaksi dengan biuret) ke"uali urea.

:arutan protein dibuat alkalis dengan $aO kemudian ditambahkan

larutan -u;O


3/17


4/17

pemba"a adi 200?

asil pengukuran yang baik dari suatu parameter kuantitas kimia) dapat dilihat

berdasarkan tingkat presisi dan akurasi yang dihasilkan.%kurasi menun'ukkan

kedekatan nilai hasil pengukuran dengan nilai sebenarnya. ntuk menentukan

tingkat akurasi perlu diketahui nilai sebenarnya dari parameter yang diukur dan

kemudian dapat diketahui seberapa besar tingkat akurasinya. Presisi menun'ukkan

tingkat reliabilitas dari data yang diperoleh. al ini dapat dilihat dari standar

de8iasi yang diperoleh dari pengukuran) presisi yang baik akan memberikan

standar de8iasi yang ke"il dan bias yang rendah. Aika diinginkan hasil pengukuran

yang 8alid) maka perlu dilakukan pengulangan) misalnya dalam penentuan nilai

konsentrasi suatu +at dalam larutan larutan dilakukan pengulangan sebanyak n

kali. #ari data tersebut dapat diperoleh ukuran harga nilai terukur adalah rata!rata

dari hasil yang diperoleh dan standar de8iasi.

@ipe kesalahan dalam pengukuran analitik dapat dibagi men'adi tiga)

yaitu(

1. Kesalahan serius ross error

2. Kesalahan a"ak &andom error

3. Kesalahan sistematik ;ystemati" error

al ini dapat diatasi dengan(

- ;tandarisasi prosedur

- ;tandarisasi bahan

- Kalibrasi instrument

E. ALAT DAN BA#AN

- @abung reaksi

- :arutan standar protein

- :arutan sampel protein

- ;pektro*otometer >!>4;


5/17

- &eagen biuret

$. ALUR %ERJA

1. Pembuatan :arutan ;tandar

2. Penetapan %bsorbansi :arutan Blanko

1 m: lar. Protein

kadar 1 mg9m:

1 m: lar. Protein

kadar 2 mg9m:

1 m: lar. Protein

kadar < mg9m:

1 m: lar. Protein

kadar / mg9m:

1 m: lar. Protein

kadar 3 mg9m:

Pada masing2 tabung (

< m: reagen biuret

#iko"ok

#i inkubasi pd suhu 3C0- D 10 menit

sampai arna ungu stabil

#iukur absorbansinya pada pan'ang

gelombang /20 nm dgn >!>4;

%bsorbansi

larutan standar

1 m: aEuades

1 m: reagen biuret

#iko"ok

#i inkubasi pd suhu 3C0- D 10

menit sampai arna ungu stabil

#iukur absorbansinya pada pan'ang

gelombang /20 nm dgn >!>4;%bsorbansi blanko


6/17

3. Penetapan %bsorbansi :arutan ;ampel

G. #ASIL PENGAMATAN

No Per&o'aan #a(i) pen*aatan Du*aan +

Reak(i

Sipu)an

1. Pembuatan

:arutan

;tandar

;ebelum

larutan protein tidak berarna

;esudah

- :ar. Protein 1 mg9m:

berarna ungu ) dan

absorbansi F 0)0/7


berarna ungu ) dan

absorbansi F 0)107


berarna ungu ) dan

&eagen biuret

membentuk

kompleks

dengan ikatan

peptida suatu

protein

sehingga

menghasilkan

kompleks ungu

dengan

absorbansi dari

aris y F

0)0


7/17

absorbansi F 0)21?

- :ar. Protein < mg9m:

berarna ungu ) dan

absorbansi F 0)221

- :ar. Protein / mg9m:

berarna ungu )

dan absorbansi F 0)20!>4;) absorbansi yang dihasilkan pada larutan standar

protein 1 mg9m: absorbansi F 0)0/7) larutan standar protein 2 mg9m:absorbansi F 0)107) larutan standar protein 3 mg9m: absorbansi F 0)21?) larutan

standar protein < mg9m: absorbansi F 0)221) larutan standar protein / mg9m:

absorbansi F 0)20!>4; dengan persamaan garis y F 0)0


10/17

Pro(edur kedua. Pada tahap ini dilakukan Penetapan %bsorbansi :arutan

Blanko) langkah ker'a yang dilakukan adalah menyiapkan tabung reaksi dan

memasukkan ke dalamnya 1 m: aEuades) yaitu "airan yang tidak berarna.

:angkah selan'utnya yaitu menambahkan < m: reagen biuret yang berarna biru

sambil diko"ok. asil yang diperoleh adalah larutan berarna biru. :angkah

selan'utnya yaitu dilakukan inkubasi dan memperoleh larutan yang sesuai.

4nkubasi dilakukan pada suhu sama seperti prosedur pertama yaitu 3C 0-. ;etelah

10 menit diambil larutatan dari inkubator dan diu'i >!>4;.

Pengukuran +at dengan spekto*otometri selalu melibatkan analat blanko dan

standar. Blanko adalah larutan yang mempunyai perlakuan yang sama dengan

analat tetapi tidak mengandung komponen analat. @u'uan pembuatan larutan

blanko ini adalah untuk mengetahui besarnya serapan oleh +at yang bukan analat.

:arutan analat adalah larutan yang dianalisis. :arutan standar adalah larutan yang

mendapat perlakuan yang sama dengan analat dan mengandung kkomponen analat

dengan konsentrasi yang sudah diketahui.

Pro(edur ti*a. :angkah yang dilakukan adalah dengan menyiapkan tiga

tabung reaksi kemudian dimasukkan kedalamnya masing!masing 1 m: larutansampel yang berarna putih kekuningan. ;etelah itu dilakukan penambahan

reagen biuret yang berarna biru) maka dari sampel akan ter'adi perubahan arna

yaitu untuk semua larutan pada tabung reaksi berarna biru. ;elan'unya larutan

sampel tersebut di u'i spertro*otometri >!>4; dan menghasilkan serapan 0)037

pada sampel pertama) 0)0


11/17

proses penger'aan yakni pengen"eran larutan standar yang kurang sempurna)

sensiti*itas alat) ku8et yang kurang bersih)adanya serapan oleh pelarut dimana hal

ini sebenarnya dapat diatasi dengan penggunaan larutan blanko yakni larutan yang

berisi selain komponen yang akan dianalisis termasuk +at pembentuk arna)

serapan oleh ku8et) adanya pengotor yang ikut terabsorbsi dan kesalahan pada

saat pen"ampuran larutan) dan adanya gelembung udara atau gas dalam lintasan

radiasi gelombang yang dihasilkan sudah tidak "o"ok dengan yang tertera pada

instrumen.

I. SIMPULAN

#ari analisis kuantitati* yang telah dilakukan) maka didapatkan kadar

protein pada masing!masing sampel yang diu'i dengan menggunakan

spektro*otometri >!>4; yaitu sebesar( !0)0525 mg9m: untuk sampel 1 I 0)0115

mg9m: untuk sampel 2 I !0)0131 mg9m: untuk sampel 3

J. DA$TAR PUSTA%A

%nonim. 2011. Penentuan Kadar Protein dengan Biuret. http(99ikipedia.org.

diakses pada 21 Oktober 2013.

:ehninger) %l. 1?72.Dasar-Dasar Biokimia 1. Maggy @henai'aya. Pener'emah).

Aakarta( ,rlangga. @er'emahan dari(Principle of Biochemistry.

Murray &obert K) et all. 200?.Biokimia Harper. Brahm . PenditI alih bahasa.

Aakarta ( ,-. @er'emahan dari(Harpers Ilustrated Biochemistry.

@im #osen Biokimia 1. 2013. Petunjuk Praktikum Biokimia. ;urabaya( Aurusan

Kimia JM4P% $,;%.

=idya) ,ka. 2012. Spektrofotometri. .ikipedia.org. diakses pada 27

Oktober 2013.

%. JA,ABAN PERTAN-AAN

1. Buatlah kur8a standar konsentrasi >s %bsorbansi. #engan bantuan kur8a

tersebut tentukan kadar protein sampel
http://wikipedia.org/http://wikipedia.org/http://www.wikipedia.org/http://wikipedia.org/http://www.wikipedia.org/


12/17

%on(entra(i Larutan Standar A'(or'an(i

1 0)0/72 0)107

3 0)21?

< 0)221

/ 0)20s absorbansi pada larutan standar

#engan Persamaan y F 0)0


13/17

#engan absorbansi 0)0


14/17

H

NHC

R

C

O

HN

HC

R

C

O

HN

n

. -u2.

H

N CH

R

C

O

N CH

R

C

O

N CH

R

C

O

HN

N NCHC

O

HC

HN

R R

C

O

HC

R

CHN

OH

ntuk menentukan kadar protein yang ter"ampur dalam peptide

yaitu dengan malakukan perhitungan se"ara kuantitati* melalui persamaan

garis linear yang didapat dari kur8a kalibrasi larutan standar.

L. LAMPIRAN

PER#ITUNGAN

a. Peritun*an Pen*en&eran

Konsentrasi / ppm dari 10 ppm

M1G >1F M2G >2

10 G >1F / G 20

>1F 10

Konsentrasi < ppm dari / ppm

M1G >1F M2G >2

/ G >1F < G 20

>1F 15

Konsentrasi 3 ppm dari < ppm

M1G >1F M2G >2

< G >1F 3 G 20

Konsentrasi 2 ppm dari 3 ppm

M1G >1F M2G >2

3 G >1F 2 G 20


15/17

>1F 1/ >1F 13)333333

Konsentrasi 1 ppm dari 2 ppm

M1G >1F M2G >2

2 G >1F 2 G 20

>1F 10

'. Peritun*an kadar (ape)

Persamaan y F 0)0


16/17


17/17

Warna Larutan Sampel (Lar. Sampel +

Documents

Penetuan Kadar Protein (Biuret)