UJI TOKSISITAS SUBKRONIS SENYAWA

ASAM 2-(4-(KLOROMETIL)BENZOILOKSI)BENZOAT PADA

PROFIL DARAH DAN URIN MENCIT (Mus musculus)

NENCY ROTUA

2443010177

PROGRAM STUDI S1

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA SURABAYA

2014

UJI TOKSISITAS SUBKRONIS SENYAWA

ASAM 2-(4-(KLOROMETIL)BENZOILOKSI)BENZOAT PADA

PROFIL DARAH DAN URIN MENCIT (Mus musculus)

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi sebagian persyaratan

memperoleh gelar Sarjana Farmasi Program Studi Strata 1

di Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya

OLEH :

NENCY ROTUA

2443010177

Telah disetujui pada tanggal 17 Maret 2014 dan dinyatakan LULUS

Pembimbing I, Pembimbing II,

Prof.Dr.Bambang S., SU, Apt Dr. Ratna Megawati W., SKG., MFT NIK. 241.06.0588 NIK. 241.10.0674

Mengetahui,

Ketua Penguji

Angelica Kresnamurti, M.Farm., Apt.

NIK. 241.04.0850

i

Abstrak

Uji Toksisitas Subkronis Senyawa

Asam 2-(4-(Klorometil)benzoiloksi)benzoat pada Profil Darah dan Urin

Mencit (Mus musculus)

Nency Rotua

Asam asetilsalisilat/asetosal adalah salah turunan asam salisilat

yang berfungsi sebagai analgesik. Asetosal mempunyai kelemahan yaitu

memiliki stabilitas yang rendah sehingga mudah terurai menjadi asam

salisilat dan asam asetat. Penggunaan asetosal dalam jangka waktu yang

panjang dapat menimbulkan nyeri epigastrium yang berat, mual, muntah–

muntah, pusing, keringat dingin dan bahkan dapat menimbulkan pendarahan

lambung. Senyawa asam 2-(4-(klorometil)benzoiloksi)benzoat merupakan

senyawa baru turunan asam salisilat yang telah diuji toksisitas akut pada

penelitian sebelumnya dan didapatkan hasil senyawa tersebut kurang toksik

dan lebih efektif bila dibandingkan dengan asam asetilsalisilat. Untuk

mengetahui penggunaan jangka panjang maka dilakukan percobaan uji

toksisitas subkronis, berdasarkan Organization for Economic Cooperation

and Development (OECD 407). Diberikan satu tingkat dosis per-kelompok

hewan coba untuk jangka waktu 28 hari. Kelompok percobaan dibagi lima

kelompok yaitu kelompok kontrol positif dan satelitnya (asam asetilsalisilat

1,3 mg/20 gBB), kelompok kontrol negatif (PGA 3%), kelompok uji

senyawa asam 2-(4-(klorometil)benzoiloksi)benzoat dan satelitnya (1,3; 2,6;

3,9 mg/20 gBB) yang diberikan secara oral. Kelompok satelit dibiarkan

selama 14 hari setelah perlakuan untuk melihat apakah terjadi perbaikan

organ setelah obat dihentikan. Analisis statistik hematologi dilakukan

menggunakan SPSS 17 dengan anova dan uji Tukey, dan didapatkan hasil

perbedaan bermakna hematokrit, sel darah merah, hemoglobin pada

kelompok jantan dan hematokrit, hemoglobin pada mencit betina antara

asam asetilsalisilat dengan senyawa asam 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat. Pada pemeriksaan urin didapatkan hasil

tidak adanya perbedaan bermakna antara kelompok senyawa asam 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat dengan kelompok asam asetilsalisilat.

Kata Kunci : Asam 2-(4-(klorometil)benzoiloksi)benzoat, asam

asetilsalisilat, toksisitas subkronis, mencit.

ii

Abstract

Subchronic Toxicity Test of

2-(4-(Chloromethyl)benzoyloxy)benzoic acid

on Blood Profile and Urine of Mice (Mus musculus)

Nency Rotua

Acetylsalicylic acid/aspirin is one of salicylic acid derivative that

functions as an analgesic. Aspirin has the disadvantage of having a low

stability and is easily broken down into salicylic acid and acetic acid. The

use of aspirin in a long period of time can cause severe epigastric pain,

nausea, vomiting, dizziness, sweating, and even can cause stomach

bleeding. The compound 2-(4-(chloromethyl)benzoyloxy)benzoic acid is a

new compound salicylic acid derivative that has been tested for acute

toxicity on previous study and is not more toxic and equally effective when

compared with acetylsalicylic acid. The safety of long-term use of the

compound was tested by subchronic toxicity test, based on Organization for

Economic Cooperation and Development (OECD 407). One dose level per

group of test animals was given in a periode of 28 days. Experimental

group were divided into a five group. Positive control and the satellite

compound (acetylsalicylic acid 1.3 mg/20 gBB), negative group (PGA 3

%), the test group and the satellite compound 2-(4-

(chloromethyl)benzoyloxy)benzoic acid (1.3; 2.6; 3.9 mg/20 gBB) which

was administered orally. Satellite group was not treated for 14 days after

treatment to observe improvement in the organs after stopping using the

drug. Statistical analysis was by SPSS 17 (anova and tukey test) showed

significant differences in hematocrit, red blood cells, hemoglobin in male

group and hematocrite, hemoglobin in female mice with acetylsalicylic acid

with compound 2-(4-(chloromethyl)benzoyloxy)benzoic acid. Test in urine

showed no significant differences between the groups of compounds 2-(4-

(chloromethyl)benzoyloxy)benzoic acid with acetylsalicylic acid group.

Keywords : 2-(4-(chloromethyl)benzoyloxy)benzoic acid, acetylsalicylic

acid, subchronic toxicity, mice.

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang MahaEsa yang

telah memberikan rahmat dan karuniaNya, sehingga skripsi dengan judul

Uji Toksisitas Subkronis Senyawa Asam 2-(4-(Klorometil)Benzoiloksi)

Benzoat pada Profil Darah dan Urin Mencit (Mus musculus) dapat

terselesaikan. Penyusunan skripsi ini dimaksudkan untuk memenuhi

persyaratan memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi

Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.

Menyadari bahwa tanpa bantuan dan dukungan dari berbagai

pihak skripsi ini tidak dapat terselesaikan dengan baik, maka rasa terima

kasih yang sebesar-besarnya disampaikan kepada:

1. Drs. Kuncoro Foe, G.Dip.Sc., Ph. D sebagai Rektor Universitas

Katolik Widya Mandala Surabaya.

2. Martha Ervina, S. Si., M. Si., Apt., selaku Dekan Fakultas

Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.

3. Prof. Dr. Bambang Soekardjo, SU., Apt., selaku Pembimbing I

dan Dr. Ratna Megawati Widharna, SKG, MFT selaku

Pembimbing II atas kesabaran untuk meluangkan waktu dalam

memberikan bimbingan, petunjuk, nasehat dan saran-saran yang

membangun untuk terselesaikannya skripsi ini.

4. Angelica Kresnamurti S.Si., M.Si., Apt., dan Prof. Dr. J.S. Ami

Soewandi sebagai Tim Penguji skripsi yang telah memberikan

saran dan masukan berharga guna penyempurnaan skripsi ini.

5. Catherina Caroline, S.Si., M.Si., Apt., Dra. Siti Surdijati, MS.,

Apt., Dr. Endang Isbandiati, MS., Sp FK., Stephanie Devi M.Si.,

Apt., Wahyu Dewi Tamayanti, S.Si., Apt., yang juga telah

iv

memberikan nasehat dan masukan untuk terselesaikannya skripsi

ini.

6. Senny Yesery Esar, S.Si., M.Si., Apt., dalam membimbing,

mengarahkan dan memberi nasehat serta motivasinya.

7. Dosen-dosen dan staf pengajar yang tidak dapat disebutkan satu

per satu, atas ilmu pengetahuan, keahlian dan pengalaman yang

telah dibagi.

8. Kepala Laboratorium Kimia Organik Prof. Dr. J.S. Ami

Soewandi, Kepala Laboratorium Biomedik Angelica Kresnamurti

S.Si., Apt., dan Kepala Laboratorium Kimia Analisis Dra. Emi

Sukarti, M.Si., Apt.

9. Laboran-laboran: Pak Heri, Mas Rendy, Pak Samsul, Pak Anang,

Mbak Mega, Mbak Tyas, Mbak Retno, Bu Nina dan Mas Tri

yang telah banyak membantu kelancaran proses penelitian, serta

doa dan dukungannya.

10. Drh. Rahmat Priyadi atas sumbangsihnya dalam analisis dan

penyediaan hewan coba.

11. Laboratorium IPA Terpadu Universitas Negeri Surabaya yang

telah banyak membantu dalam pemakaian alat Spektrofotometri

Inframerah.

12. Papa dan Mamaku tercinta (Marolop Gultom dan Fitra Sagala),

saudara-saudariku tersayang (Bintang, Stefany dan Kelvin) yang

selalu memberikan kasih sayang, dukungan, motivasi serta doa.

13. Keluarga besarku tersayang: Opung (Herta L.Tobing), Bapatua,

Mamatua, Tante, dan Tulang.

14. Sahabat senasib seperjuanganku: Novita Dian dan Tri Wulandari

terima kasih banyak untuk persahabatan dan kerja sama yang

baik. Dewi, Feldy dan Hans terima kasih banyak atas

v

pengorbanan waktu, tenaga dan materi yang tidak bisa

diperhitungkan satu per-satu demi skripsi ini.

15. Sahabat-sahabatku tersayang: Adek (Vita), Nenek (Wulan),

Yolan, Iren, Dewi, Putri, Ninik, Uta, Yuan, Elis, Cathy yang

telah banyak memberikan dukungan dan motivasi dalam

penelitian ini dan terima kasih banyak atas hari-hari yang indah

yang kita lewati bersama selama kuliah.

16. Teman-teman angkatan 2010: Laras, Wilujeng, Risty, Nonnie,

Selvi, Tabytha, Ria, Mbak Veny, Amy, Della, Rhema, Grace,

Sheila dan teman-teman lainnya yang tidak bisa disebutkan satu

per-satu. Sukses buat kalian semua.

17. Kakak-kakak angkatan: Ce’ Yuki, Ce’ Felda dan adik-adik

angkatan 2011 (Mega, Villa, Evi, dkk) terima kasih atas

dukungan dan doanya.

Skripsi ini jauh dari sempurna dengan keterbatasan pengalaman,

pengetahuan maupun pustaka yang ditinjau, penulis menyadari kekurangan

dalam penulisan naskah skripsi ini. Oleh karenanya diharapkan saran dan

kritik dari semua pihak agar naskah ini dapat lebih sempurna. Akhir kata,

semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi masyarakat luas pada umumnya

dan bagi dunia kefarmasian pada khususnya.

Surabaya, 17 Maret 2014

vi

DAFTAR ISI

Halaman

ABSTRAK………………………………………………………..... i

ABSTRACT……………………………………………………….. ii

KATA PENGANTAR……………………………………………... iii

DAFTAR ISI……………………………………………………..... vi

DAFTAR TABEL ………………………………………………… ix

DAFTAR GAMBAR……………………………………………… x

DAFTAR LAMPIRAN……………………………………………. xi

BAB I. PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang Penelitian........................................... 1

1.2. Rumusan Masalah....................................................... 4

1.3. Tujuan Penelitian………………………………..….. 5

1.4. Hipotesis Penelitian……………………………….... 5

1.5. Manfaat Penelitian ..................................................... 5

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Asam 2-(4-(Klorometil)Benzoiloksi)Benzoat……….. 6

2.2. Uji Toksisitas Subkronis………………...................... 7

2.3. Hewan Coba Mencit (Mus musculus) ......................... 9

2.4. Pemeriksaan Setelah Kematian.................................... 11

2.4.1. Hematologi....................................................... 12

2.4.2. Urinalisis........................................................... 17

BAB III. METODE PENELITIAN

3.1. Bahan, Alat dan Hewan Coba Penelitian..................... 22

3.1.1. Bahan penelitian……………………………… 22

vii

3.1.2. Alat penelitian………………………………... 22

3.1.3. Hewan coba…………………………………... 22

3.2. Uji Kemurnian Senyawa Asam 2-(4-

(Klorometil)Benzoiloksi)Benzoat………………...… 23

3.2.1. KLT (Kromatografi Lapis Tipis)…………….. 23

3.2.2. Titik Leleh……………………………………. 23

3.3.Uji Toksisitas Subkronis Senyawa Asam 2-(4-

(Klorometil)Benzoiloksi)Benzoat............................... 24

3.4. Prosedur Uji Toksisitas Subkronis………………….. 25

3.4.1. Pembuatan Suspensi Senyawa Uji dan

Pembanding……………………………...... 25

3.4.2. Pemberian sediaan uji asam 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat dan sediaan

pembanding asam asetilsalisilat pada mencit 26

3.4.3. Persiapan hewan coba………………………... 26

3.4.4. Pelaksanaan uji aktivitas……………………... 29

3.5. Analisis statistik……………………………………... 31

BAB IV. ANALISIS DATA DAN INTERPRETASI PENEMUAN

4.1. Uji Kemurnian…………………................................ 32

4.1.1. KLT (Kromatografi Lapis Tipis)…………..… 32

4.1.2. Titik leleh……………...................................... 33

4.2. Uji Toksisitas Subkronis ………………………........ 34

4.2.1. Pengamatan berat badan……………………. 34

4.2.2. Makroskopis organ lambung ………...………. 38

4.2.3. Uji aktivitas………...………………………… 39

4.2.4. Hematologi……. ………………………… 42

4.2.5. Urinalisis……. ………………………… 46

viii

BAB V. SIMPULAN DAN SARAN

5.1. Simpulan……………………………………..……... 48

5.2. Saran…………….……….......................................... 48

DAFTAR PUSTAKA……………………………………………… 49

LAMPIRAN…………………..…………………………………… 53

ix

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Nilai normal urin ................................................................ 18

2.2 Warna urin .......................................................................... 19

2.3 Konsentrasi H+dan pH cairan tubuh .................................. 20

3.1 Formula suspensi senyawa uji dan

pembanding……………………….. .................................. 25

3.2 Tabel pengamatan uji aktivitas subkronis mencit pada

platform .............................................................................. 30

4.1 Hasil KLT senyawa asam 2-(4-(klorometil)benzoiloksi)

benzoat ............................................................................... 32

4.2 Hasil pemeriksaan titik leleh senyawa asam 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat. ........................................ 33

4.3 Rata-rata hasil pemeriksaan hematologi pada mencit

jantan. ................................................................................. 42

4.4 Rata-rata hasil pemeriksaan hematologi pada mencit

betina .................................................................................. 45

x

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Struktur yang menggambarkan turunan asam

benzoiloksi benzoat…………………...…………...…… 2

2.1 Struktur yang menggambarkan molekul asam 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat....…………..…….… 6

3.1 Pembagian kelompok pada mencit dalam pengujian

toksisitas subkronis senyawa 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat……………………… 28

4.1 KLT senyawa asam 2-(4-

(klorometil)benzoiloksi)benzoat……………………... 33

4.2 Grafik perkembangan rata-rata berat badan mencit

jantan…………………………………………………. 35

4.3 Grafik perkembangan rata-rata berat badan mencit

betina………………………………………………..... 36

.

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

A. Hasil Data Penimbangan Berat Badan pada Mencit

Jantan dan Betina………………………………………. 53

B. Olahan Data Penimbangan Berat Badan pada Mencit

Jantan dan Betina……………………………………….. 56

C. Makroskopis Organ Lambung Mencit Jantan dan

Betina…………………………………………………… 71

D. Data Pengamatan Skrining Farmakologi Mencit Jantan

dan Betina.................................................................... 73

E. Hasil Data Pemeriksaan Hematologi pada Mencit Jantan

dan Betina..................................................................... 109

F. Olahan Data Pemeriksaan Hematologi pada Mencit

Jantan dan Betina……………………………………….. 112

G. Hasil Data Urin pada Mencit Jantan dan Betina……… 183