F Avec la collaboration de BIO-RAD Mod~rateur : M. GIRAUDBIT (Gu~ret)

Utilisation d'un automate de chromatographie liquide en toxicologie d'urgence

B. CAPOLAGHI (Thionville)

L'approche toxicologique d 'urgence en milieu hospitalier est souvent un v6ritable dilemme pour le biologiste. En effet, le d6pistage id6al doit @tre fiable, rapide, couvrir un 6vantail de mol~cules le plus large possible (afin d'identifier la ou les mol~cules responsables de l'effet toxique) et ~tre accessible 24 h / 24 h.

Pour satisfaire & ces besoins, de nombreuses techniques d'analyse ont ~t6 d6velopp6es ces derni~res ann6es, c'est le cas notamment des techniques : - de colorim~trie, - d ' immunoanalyse (FPIA - EMIT - CEDIA), - de chromatographie (CCM - CPG - CLHP), - de spectrom~trie de masse (CPG - SM), mais aucune de ces m6thodes ne r6pond & l'ensemble des

. crit~res recherch~s. La majorit6 des techniques utilis6es en toxicologie d 'urgence ne permet qu'une identification par classe m~dicamenteuse. Cependant, les limites de d6tection obtenues avec les immuno-essais ont ~t6 fortement am61ior6es et permetteflt un d~pistage & des concentrations de plus en plus faibles.

Face A cette situation, plusieurs 6quipes ont essay~ d'auto- matiser une s6paration en CLHP coupl6e & une base de donn6es pour l'interpr6tation et l'identification des mol6- cules. C'est dans cet esprit qu'est apparu r6cemment l'analy- seur Remedi (rapid emergency drug identification) commer- cialis~ par la soci~t~ Bio-Rad (1, 2). II s'agit d 'un automate en chromatographie liquide haute performance d6di6 au screening toxicologique dans les liquides biologiques. C'est un syst~me d'identification ~ large spectre utilisant la CL avec pr6paration et analyse en ligne des ~chantillons. Un syst~me multicolonne est utilis~ pour extraire, purifier puis analyser les diff6rentes mol6cules par une d6tection UV multilongueur d 'onde coupl6e & un algo- rithme informatis6 et & une base de donn~es de plus de 500 mol6cules (3, 4, 5). L'analyse d 'un 6chantillon dure environ 20 minutes.

Afin de pouvoir r~soudre les probl~mes pos6s par la toxico- Iogie d'urgence, nous avons opt6 pour une compl6mentarit~ entre les diff~rentes m6thodologies existantes sur le mar- ch~ : - rapidit~ et sensibilit~ avec la technique EMIT, - i d e n t i f i c a t i o n et dosage semi-quantitatif des mol~cules neutres et basiques avec le syst~me Remedi, - dosage de mol~cules compl~mentaires selon l 'anamn~se et l'~tat clinique du patient (EtOH, digoxine, lithium, m~proba- mate, salicyl~s .... ), -conf i rmat ion ~ventuelle avec la spectrom~trie de masse (CPG-SM). L'existence d 'un parall~lisme entre ]'~tat clinique et la concentration s~rique ainsi que l 'impact ~conomique de ne

travailler que sur un type de pr6l~vement nous ont amen6 A retenir le sang comme milieu biologique de premiere intention.

TABLEAU I

R~sultats obtenus avec les techniques EMIT et sur Remedi

Barbituriques N = 545 s6rums 10 Ph6nobarbital 18

Benzodiaz~pines N = 805 s6rums 318

Antid6presseurs tricycliques N = 530 s6rums

21

Opiac~s 44 N = 141 urines

11

Amphetamines N = 87 urines

Coca'fne N = 100 urines

Cannabis N = 97 urines

Alprazolam Xanax Bromaz~pam Lexomil ChloMiaz6poxide Librium Clobazam Urbanyl Diaz~parn Desm~ t h y l- + m6tabolites diaz~pam

+ Oxaz6pam Loraz~pam Temesta Midazolam Hypnovel

Clomipramine Anafranil D~sipramine Pertofran Imipramine To fra n i l Trimipramine Surmontil

Amitryptiline Laroxyl Nortryptiline Motival Maprotiline Ludiomil Dosul~pine Prothiadern

Amineptine Survector Amoxapine D~fanyl Fluox~tine Prozac M~difoxamine Clidial Norfluox6tine Viloxazine Vivalarn

Morphine Cod~'fne Desm~thylcod~'fne 6 rnono-ac~tyl-morphine

Nalorphine

P~thidine Dolosal Th~ba'ine Noscapine

Propoxyph~ne M~thadone

4 Di~thylpropion Fenfluramine Pond~ral Ephedrine

7 Benzoylecgonine

6 71 1 5

163

11 1

1 1 4 1

8 6 2 1

I 2 3 5 3 7

24 21 5

9 Non r~alisable

Revue frangaise des laboratoires, f#vrier/mars1996, N ° 282 1 85

T A B L E A U I I

Autres molecules mises en ~vidence par le Remedi sur 8 0 5 s~rums

Neuroleptiques Loxapine Loxapac Sulpiride Dogmatil Drop&ridole Droleptan

Ph&nothiazines Chlorpromazine Largactil Cyam~mazine Tercian Alim~mazine Th~ralane Prom4thazine Ph~nergan

Hypnotiques Zolpidem Silnox Anxiolytiques Zopiclone Imovane

Hydroxyzine A ta rax F~barbamate Atrium

Antalgiques Propoxyph&ne Antalvic/Propofan Noramidopyrine Avafortan/Optalidon Antipyrine Migralgine

Myorelaxants Atracurium Tracriurn Chlorm~zanone Trancopal

Antirythmiques Q u i n i d i n e Longacor/Natisedine Fl&cafnide Fl~cai'ne Lidoca'ine Mesocain e/Xylocain e

B~ta-bloquants At&nolol T6normine Ac6butolol Sectral B&taxolol Kerlone Propanolol Avloca rdyl M&toprolol Lop resso r Sotalol Sotalex

2 5 4

1 2 I I

22 1

I0 4

4 4 2

2 20

3 2 9

3 2 2 6 i I

I i 1

B6ta-convulsivants Carbamaz~pine T~gr~tol Ph~nito'fne Di-hydan

Bases xanthiques Th6ophylline/caf6ine 140

Divers Dihydroergotamine Seglor Diclof&nac Voltar&ne Ranitidine Azon tac M~toclopramine Primpdran Minaprine Ca n to r Dipiv6phrine Propine Ph&nylpropanolamine Rinurel

Domp&ridone Motilium Doxilamine M~r6prine

M4thadone

Les pr~l&vements urinaires et gastriques ne sont techniqu6s qu'au vu de chaque dossier et des r6sultats obtenus, excep- tion faite de la recherche urinaire des stup~fiants. Les r6sultats obtenus en routine sur plus de 900 patients soit 1057 pr~l~vements (805 s&rums + 216 urines + 36 liquides gastriques) confirment l'int6ret d'une telle d6marche (tableaux ! et II).

lls font apparaitre l'int&r~t du Remedi qui a permis d'identi- tier, ~ partir de 805 pr&l&vements sanguins, plus de 60 mol~cules diff4rentes responsables d'intoxication m6dica- menteuse et de caract&riser la nature des opiac6s pr6sents dans les pr61&vements urinaires. L'estimation semi-quantitative de la mol6cule a permis d'appr6cier la gravit6 de l'intoxication et de suiwe la cin6- tique d'41imination dans le cadre de la th6rapeutique mis en place. Cependant, les limites du syst&me concernant les benzodia- z~pines, la cocaine et l'impossibilit6 d'identifier les mol&cules acides et le m6probamate rendent n4cessaire d'associer cette m&thodologie d'autres techniques dans une approche toxicologique et analytique globale.

B I B L I O G R A P H I E

1. ADAMS A.K., ESSIEN H., BINDER S.R. - Identification of drugs in physiological fluids following on-line liquid chromato- graphic purification and analysis. Ann. Biol. Clin., 1991, 49 : 291-297.

2. HUISSE F., GIROUD C. - Un syst~me d'identification des m~dicaments pour la toxicologie d'urgence. Rev. Fr. Lab., 1991, 2 2 2 : 31"33. 3. GUITTON. d., DAVID 0., MIALON A., MANCHON M. - F=valuation d'un automate de chromatographie liquide permet- tant un screening toxicologique dans les liquides biologiques. Ann. Biol. Clin., 1993, 51 : 611-517. 4. DEMEDTS P., WAUTERS A., FRANCK F., NEELS K. - Evaluation of the Remedi Drug Prolifing System. Eur. d. Clin. Chem. CIin. Biochem., 1994, 32 : 409-417. 5. VINCENT F., CHARTIER, A., EYSSERIC H., MARKA C., DANEL V., BESSARD G. - Evaluation d'un automate de chro- matographie liquide en toxicologie d'urgence. Toxicorama, 1994, 6 / 3 : 7-18.

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