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Abdsalah
La cellule de Nageotte est un hématimètre qui permet de compter le nombre de cellules en suspension dans une solution.
Classiquement, elle est utilisée en cytologie urinaire ou pour l'examen du liquide céphalo-rachidien.
Elle est prévue pour le dénombrement de liquides pauvres en éléments.
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Description de la cellule de Nageotte La cellule de Nageotte est constituée d’un
quadrillage de 10mm côté et de 0.5 de profondeur.
Le volume de la cuve ainsi délimité est de 500mm3 .
elle est divisée en 40 bandes verticales. Compter séparément le nombre de
leucocytes et d’hématies contenus dans 8 bandes, soit N : N représente le nombre d’éléments / mm3
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Description de la cellule de Nageotte
Le Quadrillage total est constitué de 40 bandes Les dimensions d'une bande : Longueur : 10 mm Largeur : 0,25 mm Profondeur : 0,50 mm Chaque bande a un volume de 1,25 µl
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Mode opératoire: les bords de la cellule (là où reposeront
les bords de la lamelle) doivent être humectés avec un tout petit peu de liquide afin d’assurer une bonne adhésion de la lamelle : la manière la plus efficace et la plus pratique consiste à le faire à l’aide d’un doigt dont l’extrémité a été très légèrement humidifié avec de l’eau.
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.Placer une lamelle plane sur la cellule puis appuyer légèrement pour assurer sa bonne adhésion entre la lamelle et les bords de la cellule
.Poser la cellule sur une surface bien horizontale
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.Homogénéiser la suspension cellulaire à analyser
.L’introduire à l’aide d’une pipette Pasteur (ou équivalent) en la laissant pénétrer par
capillarité : la totalité de la surface délimitée par les rigoles doit être recouverte par la suspension et la suspension ne doit pas déborder dans les rigoles
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.Le délai d’attente avant de procéder au comptage ne doit être :
.ni trop court (environ 10 min. sont nécessaires pour que les cellules à compter puissent sédimenter suffisamment)
.ni trop long (pour éviter un début de dessèchement de la préparation).
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Principe de comptage: Avant de faire le comptage . faire une observation à l’objectif x10 non
seulement pour repérer le quadrillage mais aussi pour vérifier que les cellules à compter sont réparties de façon homogène ; si l’homogénéité est jugée insuffisante il faut tout recommencer, c’est-à-dire charger une nouvelle cellule de Nageotte à partir de la suspension réhomogénéisée.
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. passer à l’objectif x40 pour effectuer le comptage;
Il est recommandé de compter les éléments (leucocytes, hématies, autres éléments éventuels) contenus dans 4 bandes au moins, c’est-à-dire les éléments contenus dans 1,25 x 4 = 5 µl
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. Il peut être nécessaire de diluer le liquide si le manipulateur considère que les éléments sont trop nombreux pour pouvoir réaliser un comptage précis.
Attention : ne pas oublier le facteur de dilution au moment du calcul
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. Un nombre élevé d’hématies peut gêner le comptage des leucocytes. On peut contourner la difficulté de la façon suivante :
- détruire les hématies en diluant au 1/2 le liquide à analyser dans une solution d’acide acétique à 0,5 pour cent (0,5 ml d’acide acétique pur dans 100 ml d’eau) puis procéder au comptage des leucocytes Attention : ne pas oublier le facteur de dilution
au 1/2 au moment de calculer le nombre de leucocytes.
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Le comptage des éléments qui chevauchent le côté de 2 bandes contiguës :
ne compter que ceux qui chevauchent l’un des 2 côtés : par exemple le côté droit et bas
Plus de colonnes sont comptées, meilleure est la représentativité du comptage.
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Le calcul du nombre d’éléments
Soit : V: le volume de comptage (V = 5 µl si on a compté les
éléments dans 4 bandes) n: le nombre d’éléments (hématies ou leucocytes)
contenus dans ce volume V d : la dilution du liquide introduit dans la cellule Le nombre N d’éléments (hématies ou leucocytes) par µl de
liquide se calcule de la façon suivante : N = (n / V) x d
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Exemple 1e exemple : .liquide non dilué : d = 1 n = 72 V
= 5 µl (volume de 4 bandes) N = 14/µl
2e exemple : .liquide dilué au ¼ donc d = 4 n =
550 V = 5 µl (volume de 4 bandes) N = 440/µl
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Nettoyage après usage : cellule et lamelle plane
Immersion pendant 10 à 15 minutes dans un bain d’eau de javel dilué
Rinçage à l’eau du robinet puis à l’eau distillée
Essuyage : linge fin ou papier absorbant non pelucheux (genre « Sopalin ») sans frotter
Laisser sécher à l’air libre durant quelques minutes
Ranger à l’abri des poussières.