A PMP22 gén mutációs analíziseA PMP22 gén mutációs analízise

Szerzők: Reško Péter, Radvánszky János, Pálffy Szerzők: Reško Péter, Radvánszky János, Pálffy RolandRoland, ,

Témavezető: Témavezető: Doc. Doc. RNDRNDrr. . Kádaši LajosKádaši Lajos,, PhD. PhD.

Öröklődő perifériás neuropátiák Öröklődő perifériás neuropátiák

Motorikus és szenzorikus zavarokMotorikus és szenzorikus zavarokMorfológiai elváltozásokMorfológiai elváltozásokElőfordulásuk együttes gyakorisága 1:2500Előfordulásuk együttes gyakorisága 1:2500

Charcot-Marie-Tooth betegség 1A altípusa Charcot-Marie-Tooth betegség 1A altípusa (CMT1A)(CMT1A)nyomásos bénulásokra hajlamosító nyomásos bénulásokra hajlamosító örökletes neuropátia (HNPP)örökletes neuropátia (HNPP)

A betegségek tüneteiA betegségek tünetei

CMT1ACMT1A a végtagok lassan előrehaladó elgyengülése a végtagok lassan előrehaladó elgyengülése

és atrófiájaés atrófiája Érzékelési zavarok a végtagokbanÉrzékelési zavarok a végtagokban csökkent inreflexek és lábfej deformitások csökkent inreflexek és lábfej deformitások

((pes cavuspes cavus, kalapácsujj), kalapácsujj) idegi impulzusok terjedési sebességének idegi impulzusok terjedési sebességének

csökkenésecsökkenése axonok demyelinációja és remyelinációja axonok demyelinációja és remyelinációja

során keletkező hipertrófiás Schwann sejtek, során keletkező hipertrófiás Schwann sejtek, ún. „onion bulbs“ún. „onion bulbs“

A betegségek tüneteiA betegségek tünetei

HNPPHNPP visszatérő, fájdalommentes idegi bénulások, visszatérő, fájdalommentes idegi bénulások,

melyek érzékelési károsodást, elgyengülést melyek érzékelési károsodást, elgyengülést és atrófiát okoznakés atrófiát okoznak

idegi impulzusok terjedési sebességének idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenésecsökkenése

axonok demyelinációja és remyelinációja axonok demyelinációja és remyelinációja során keletkező hurkaszerű képződmények, során keletkező hurkaszerű képződmények, ún. ún. „„tomaculaetomaculae““

esetenként esetenként pes cavuspes cavus, csökkent inreflexek és , csökkent inreflexek és a boka reflexeinek hiányaa boka reflexeinek hiánya

Genetikai háttérGenetikai háttér

perifériás myelin protein 22 (PMP22)perifériás myelin protein 22 (PMP22)

CMT1ACMT1A PMP22 duplikációja (PMP22 duplikációja (~~70%)70%) és és különböző pontmutációk különböző pontmutációk

HNPPHNPP PMP22 deléciója PMP22 deléciója ((~~85%)85%) és és olyan pontmutációk, melyek olyan pontmutációk, melyek

következtében a protein teljesen elveszíti a következtében a protein teljesen elveszíti a működőképességétműködőképességét

Genetikai háttérGenetikai háttér

A 17-es kromoszómán található két repetA 17-es kromoszómán található két repetícióíció (CMT1A-REP) közötti egyenlőtlen meiotikus (CMT1A-REP) közötti egyenlőtlen meiotikus crossing-overcrossing-over

Végeredménye egy reciprok 1,5 Mb nagyságú Végeredménye egy reciprok 1,5 Mb nagyságú duplikáció és deléció amely tartalmazza a duplikáció és deléció amely tartalmazza a PMP22 géntPMP22 gént

Genetikai háttérGenetikai háttér

Genetikai háttérGenetikai háttér

DiagnosztikaDiagnosztika

PMP22 génkópiáinak pontos PMP22 génkópiáinak pontos kvantifikációjakvantifikációja Southern hibridizáció, kvantitatív PSL, FISH, Southern hibridizáció, kvantitatív PSL, FISH,

PCR-en alapuló módszerek, MLPAPCR-en alapuló módszerek, MLPA

rekombináció-specifikus DNS fragmensek rekombináció-specifikus DNS fragmensek azonosításaazonosítása PFGE, PCR-en alapuló módszerekPFGE, PCR-en alapuló módszerek

DiagnostikaDiagnostika

Real-time PCRReal-time PCR

RelatRelatív kvantifikáció ív kvantifikáció → komparatív → komparatív CCTT

módszermódszer referens gén (humán szérum albumin – HSA) cél gén és referens gén azonos amplifikációs

hatékonysága kalibrátor

EredményekEredmények

EredményekEredmények

0,625334

0,99265898

1,435936

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

priemerná hodnota ΔΔCt jednotlivých skupín sosmerodajnou odchylkou

pacienti s deléciouzdraví jedincipacienti s duplikáciou

a ∆∆Ct metódus átlagértéke az egyes csoportoknál

deléciót hordozó páciensek

egészséges egyedek

duplikációt hordozó páciensek

EredményekEredmények

Az egyes diagnosztikai csoportok részére meghatározott Az egyes diagnosztikai csoportok részére meghatározott ∆∆Ct eredmény intervallumok: deléció – ∆∆Ct eredmény intervallumok: deléció – 0,65 alatt0,65 alatt;; egészséges egyed – egészséges egyed – 0,75-1,250,75-1,25;; duplikáció – duplikáció – 1,35 fölött1,35 fölött

Megbízható diagnózis az esetek Megbízható diagnózis az esetek 87,2%87,2%-ában-ában

Duplikáció azonosítása a CMT1A gyanús páciensek Duplikáció azonosítása a CMT1A gyanús páciensek 38,5%38,5%-ánál-ánál

Köszönöm a figyelmet!Köszönöm a figyelmet!