66
BIBLIOTECA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA TESIS II Determinación cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú, 2017PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA AUTOR: QUIROZ RODRIGUEZ, Diego Armando ASESOR: Ms. CURO VALLEJOS, Yuri Freddy TRUJILLO PERÚ 2017 Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

  • Upload
    others

  • View
    7

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUÍMICA

TESIS II

“Determinación cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta

Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú,

2017”

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTOR: QUIROZ RODRIGUEZ, Diego Armando

ASESOR: Ms. CURO VALLEJOS, Yuri Freddy

TRUJILLO – PERÚ

2017

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 2: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 3: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

DEDICATORIA

A Dios, por moldear mi carácter cada

día, y darme una nueva vida en Cristo

Jesús. Teniendo una esperanza de vida

eterna.

A mis hermanas Rosa y Anahís, por el

cariño, respeto y comprensión que

siempre me muestran, además del apoyo

incondicional que me dan ante cada reto

que emprendo.

A mis padres Rosa y Manuel por el

apoyo incondicional, ejemplo de valor,

amor, esfuerzo y perseverancia; y por

haberme dado la oportunidad de ser

profesional y concluir este camino.

A Ada mi compañera de vida, por su

confianza, comprensión y amor que me

demuestra día a día; por llenarme de luz

y gozo. Y ser el motor que impulsa mis

días.

Los quiero mucho

Diego

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 4: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

AGRADECIMIENTOS

En primer lugar, agradecer a Dios por darme vida para poder concluir este trabajo, por

darme fortaleza física y mental que han sido indispensables en nuestro camino. De igual

manera agradecer al Ms. Yuri Freddy Curo Vallejos, asesor de este trabajo de

investigación, por su esfuerzo, paciencia, apoyo y conocimientos brindados para la

realización del presente, Dios lo bendiga siempre.

El autor

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 5: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO

En cumplimiento con las normas dispuestas en el reglamento de grados de la Escuela de

Pre Grado de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de

Trujillo. Someto a su justa consideración, el Informe de Proyecto de Investigación Tipo

II.

“Determinación cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta

Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú,

2017”

Trujillo, Octubre 2017

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 6: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

i

JURADO DICTAMINADOR

Dra. GONZALES POSITO, Gladys (Presidenta)

Dr. SAAVEDRA SUAREZ, Segundo Francisco (Jurado)

Ms. CURO VALLEJOS, Yuri (Jurado)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 7: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

i

RESUMEN

El presente trabajo de investigación se realizó en la ciudad de Trujillo-Perú, 2017, con el

objetivo de determinar la concentración de aspartame presente en las bebidas

carbonatadas de cinco marcas (Coca Cola Zero, Inca Kola Zero, Sprite Zero, Fanta Zero

y Guaraná Light) y compararlas con las especificaciones del Codex Alimentarius,

haciendo uso de un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un

detector UV-Visible con una columna de Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud

y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó 15% de acetonitrilo + 85% de

buffer fosfato de sodio 0,02M a pH 5,0 de 0-3 minutos, y 30% de acetonitrilo + 70% de

buffer fosfato de sodio 0,02M a pH 5,0 de 3-14 minutos; midiéndose a una longitud de

onda de 227nm, con una velocidad de flujo de 1,0mL/min., se inyectó una muestra de

10μL, a una temperatura de 30°C. Las concentraciones de aspartame obtenidas fueron:

19,14mg/Kg en Guaraná Light, 131.04mg/Kg en Inca Kola Zero, 90.92mg/Kg en Coca

Cola Zero, 153.38mg/Kg en Sprite Zero y 30.79mg/Kg en Fanta Zero. Las 5 bebidas

carbonatadas no superan las especificaciones límites indicados en el Codex alimentarius

para aspartame, de 600mg/kg. Sprite Zero tiene la más alta concentración de aspartame,

y Guaraná Light la menor concentración.

Palabras Claves: Bebida carbonatada, Aspartame, HPLC.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 8: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ii

ABSTRACT

The present study was carried out in the city of Trujillo-Peru, 2017, with the objective of

determining the concentration of aspartame present in the carbonated beverages of five

brands (Coca Cola Zero, Inca Kola Zero, Sprite Zero, Fanta Zero and Guaraná Light) and

comparing them to Codex Alimentarius specifications using an Agilent 1100

chromatograph with diode array, a UV-Vis detector with a Octadecylsilane (C18) column

150 mm long and 4.6 mm in diameter, as a mobile phase, 15% acetonitrile + 85% of

buffer 0.02M sodium phosphate at pH 5.0 was used for 0-3 minutes, and 30% acetonitrile

+ 70% of buffer 0.02M sodium phosphate at pH 5.0 of 3-10 minutes; measured at a

wavelength of 227nm, at a flow rate of 1.0mL/min, a sample of 10μL was injected at a

temperature of 30 °C. The concentrations of aspartame obtained are: 19.14 mg/kg in

Guaraná Light, 131.04 mg/kg in Inca Kola Zero, 90.92 mg/kg in Coca Cola Zero, 153.38

mg/kg in Sprite Zero and 30.79 mg/kg in Fanta Zero. The 5 carbonated beverages do not

exceed the limit specifications indicated in the Codex alimentarius for aspartame, of

600mg/kg. Sprite Zero has the highest concentration of aspartame, and Guaraná Light the

lowest concentration.

Key Words: Carbonated beverages, Aspartame, HPLC.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 9: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

3

ÍNDICE

RESUMEN ................................................................................................................... i

ABSTRACT ................................................................................................................. ii

I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................ 1

II. MATERIAL Y MÉTODO .................................................................................... 8

a) MATERIAL ......................................................................................................... 8

1) Material de estudio: ......................................................................................... 8

2) Material y Equipo de laboratorio: .................................................................... 8

b) MÉTODO............................................................................................................. 9

1. Población y muestra ........................................................................................ 9

2. Procedimiento23 ............................................................................................. 10

III. RESULTADOS .................................................................................................. 17

IV. DISCUSIÓN ...................................................................................................... 15

V. CONCLUSIONES .............................................................................................. 22

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................... 18

ANEXOS .................................................................................................................... 29

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 10: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

I. INTRODUCCIÓN

Actualmente vemos un crecimiento del consumo de bebidas carbonatadas no

alcohólicas; solamente la región de las Américas cuenta con el 39% del consumo

mundial de este tipo de bebidas, siendo E.E.U.U. el líder indiscutible en volumen

seguido en la región por México y Argentina. A pesar de la seminegativa imagen de

los refrescos de cara al consumidor, los datos de crecimiento continúan mostrando la

confianza del consumidor en el producto. 1

Según el INEI (2012), se tiene a la bebida gaseosa como uno de las principales

bebidas no alcohólicas que consume el peruano con 27 litros 300 mililitros al año o

2 litros 300 mililitros de consumo promedio per cápita al mes; esto fue tomado de

una encuesta entre los años 2008-2009. No se cuenta con datos actualizados. 2

La bebida carbonatada es un producto obtenido por disolución de edulcorantes

nutritivos y gas carbónico en agua potable tratada, pudiendo estar adicionada de

saborizantes naturales y/o artificiales, jugos de frutas, acidulantes, conservadores,

emulsionantes, y estabilizantes, antioxidantes, colorantes, amortiguadores, agentes

de enturbiamiento, antiespumantes, y espumantes. 3

El problema está en ciertos componentes utilizados en la elaboración de estos

productos, como es el caso del azúcar: la cantidad no es la adecuada para el consumo

por parte de los niños; los colorantes: que poseen cierto grado alergénico; los

edulcorantes artificiales: que también poseen cierto grado alergénico y están en la

mira de los especialistas, por lo cual deben ser utilizados en cantidades controladas;

y por último, los aditivos: aunque en su mayoría son permitidos en la elaboración de

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 11: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

2

alimentos y bebidas, existe una gran preocupación sobre sus efectos en la salud de

las personas, principalmente cuando se utilizan en conjunto, pues pueden potenciar

o tornarse inseguros. 4

La preocupación de los consumidores respecto a la calidad e inocuidad de los

alimentos que diariamente consumen se ha incrementado. Los aditivos alimenticios

son usados en gran cantidad de alimentos y han creado gran controversia por los

posibles efectos carcinogénicos que algunos pueden causar. Entre ellos los

edulcorantes han creado mayor controversia, es por eso, que el uso está limitado por

el Codex Alimentarius y el consumo diario aceptable determinado por el Comité de

Expertos en Aditivos Alimenticios (JECFA, por sus siglas en inglés). 5

La adición de edulcorantes artificiales, no nutritivos, a las bebidas carbonatadas como

sustituto de la sacarosa es muy común, debido a que tienen menor poder calórico, y

mayor dulzura (entre 30 y 3 000 veces); entre ellos destaca el aspartame. 6

El aspartame (N-L-α-aspartil-L-fenilalanina-1-metil éster, nombre químico, Anexo

1), conocido comercialmente por el nombre de NutraSweet®, que fue descubierto en

1965, es usado para reemplazar edulcorantes naturales. Es poderosamente dulce, se

usa para endulzar grandes cantidades de alimentos y bebidas, debido a que es más

dulce que la sacarosa y su dulzura depende del tipo de alimento donde se usa,

variando en el rango de 170 a 230 veces mayor a la sacarosa. Es encontrada en más

de 6 000 productos incluyendo: bebidas carbonatadas, bebidas no alcohólicas en

polvo, chocolates, gomas de mascar, caramelos, postres, yogurt, edulcorantes de

mesa y algunos productos farmacéuticos, como vitaminas y grajeas sin azúcar para

la tos. 5, 6, 7

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 12: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

3

La molécula de aspartame está compuesta por dos aminoácidos naturales:

fenilalanina y acido aspártico, los cuales le dan al aspartame características

hidrofóbicas e hidrofilias. Además, es susceptible a la degradación bajo un amplio

rango de condiciones (calor, humedad y pH). Aunque generalmente se usa como un

edulcorante intenso, el aspartame en realidad proporciona calorías, como lo hace el

azúcar de mesa (sacarosa) y otros componentes de los alimentos. Sin embargo, dado

que el aspartame es aproximadamente 200 veces más potente que el azúcar de mesa

común, se necesita solo 1/200 de una cucharadita para reemplazar cada cucharadita

de azúcar en un alimento o bebida. 5, 6

El cuerpo metaboliza el aspartame de forma completa, como si fuera una proteína u

otro componente de los alimentos. Las enzimas en el tracto digestivo descomponen

el aspartame en sus componentes fundamentales: el ácido aspártico (40%), la

fenilalanina (50%) y el metanol (10%). Luego, el cuerpo absorbe y utiliza estos

componentes de la misma manera en que se encuentran cuando se les obtiene de otras

fuentes alimenticias. 6

El ácido aspártico, un metabolito de aspartame, es un aminoácido excitatorio que

normalmente se encuentra en niveles altos en el cerebro. Estos niveles están

controlados por la barrera hematoencefálica que protege al cerebro de grandes

fluctuaciones en el aspartato plasmático. La fenilalanina es un aminoácido esencial

para la producción de monoamina en el cerebro y se encuentra en casi todos los

alimentos que contienen proteínas. Debido a los altos niveles de fenilalanina en la

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 13: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

4

sangre, el consumo de aspartame puede causar daño cerebral. Ciertos aminoácidos

se incrementan en el cerebro después del consumo de aspartamo. 8−13

Entre los metabolitos, el metanol, que se libera durante la digestión del aspartamo,

es un tóxico que causa toxicidad sistémica. Se han probado dosis grandes de

aspartamo y sus metabolitos individuales en humanos y otros animales. Se ha

informado de que no sólo los metabolitos del metanol sino también el metanol en sí

son tóxicos para el cerebro. El destino metabólico primario del metanol es la

oxidación directa a formaldehído y después al formiato. Los efectos tóxicos del

metanol en los seres humanos se deben a la acumulación de su metabolito formiato

y se correlaciona con los niveles de formiato. 14−18

Según Ashok (2015), la alteración observada en los animales alimentados con

aspartamo puede deberse a su metabolito metanol y formiato elevado. Los radicales

libres elevados debido al metanol pueden inducir estrés oxidativo. Su estudio

confirma la presencia de metabolitos tóxicos después de la administración de

aspartamo. 19

Según Kuk (2016), el consumo de aspartamo se asocia con mayores deficiencias

relacionadas con la obesidad en la tolerancia a la glucosa. Hallándose una influencia

significativa con el Índice de Masa Corporal (IMC) y la tolerancia a la glucosa

(interacción: p = 0,004). 20

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 14: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

5

Según Choudhary (2016), la administración de aspartame (40 mg/kg peso

corporal/día) durante 90 días o sus metabolitos pueden aumentar el estrés oxidativo

en órganos inmunes de ratas albinas Wistar. 21

Según la Norma General del Codex Alimentarius CODEX STAN 192‐1995, la

cantidad de aditivo que se añada a un alimento debe ser igual o inferior a la Dosis

Máxima de Uso establecida para dicho aditivo en determinado alimento,

constituyendo así la dosis mínima necesaria para lograr el efecto técnico previsto.

Para las bebidas a base de agua aromatizada (o saborizada) con gas, clasificación en

la cual se encuentran las bebidas carbonatadas de dieta, la Dosis Máxima de Uso para

el aspartame es de 600mg/kg de alimento (Anexo 2); cantidad que será utilizada

como referencia para la comparación de la concentración de aspartame presente en

la muestra de bebidas carbonatadas de dieta a estudiar. 22

En la actualidad, el mercado nos ofrece una gran variedad de bebidas refrescantes, la

mayoría carbonatadas; la aparición de nuevas marcas va en aumento. El hecho

alarmante es el gran auge que tienen en los niños, y jóvenes, que se convierten en

auténticos adictos por su dulce sabor, por la capacidad adictiva de alguno de sus

componentes y por los continuos impactos publicitarios que reciben de este mercado.

Son auténticas bombas para la salud.

Como Químicos Farmacéuticos, pertenecientes al equipo de salud, una de nuestras

funciones es la de servir a la comunidad, contribuyendo de esta manera al

mantenimiento, prevención y recuperación de los pobladores. Por tales motivos, se

estimó conveniente realizar el presente trabajo de investigación “Determinación

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 15: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

6

cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta Resolución, en

bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú, 2017”, en base a

los resultados de las muestras, puede conocerse si se está cumpliendo con los niveles

máximos permisibles. Con estos resultados se proporciona información útil a las

autoridades sanitarias, para tomar decisiones y acciones que aseguren un mejor

control y seguimiento de la fabricación de bebidas carbonatadas para su consiguiente

autorización, y con ello proporcionar a la población productos de calidad que no

causen efectos colaterales por el hecho de consumirlos.

Ante lo cual se planteó el siguiente problema:

¿Cuál es la concentración de aspartame en bebidas carbonatadas, determinado por

Cromatografía Líquida de Alta Resolución, que consume la población de Trujillo-

Perú, 2017?

Y la siguiente hipótesis:

Los niveles de aspartame en bebidas carbonatadas que consume la población de

Trujillo-Perú; superan los límites máximos permisibles establecidos por el JECFA

(Comité de Expertos en Aditivos Alimenticios, siglas en inglés), 600 mg/kg para

Aspartame.

De acuerdo a lo expuesto, el trabajo se orientó a cumplir los siguientes objetivos:

Objetivo General

Determinar la concentración de aspartame, por Cromatografía Líquida de Alta

Resolución en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú.

Objetivos Específicos

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 16: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

7

Verificar si la concentración de aspartame presente en las bebidas carbonatadas

de cinco marcas que consume la población de Trujillo, cumple con lo especificado

en Codex alimentarius.

Comparar entre sí, la concentración de aspartame presente en cada una de las

cinco marcas de bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 17: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

II. MATERIAL Y MÉTODO

a) MATERIAL

1) Material de estudio:

Cinco marcas de bebidas carbonatadas: 5 de cada una

- Guaraná Light

- Inca Kola Zero

- Coca Cola Zero

- Sprite Zero

- Fanta Zero

2) Material y Equipo de laboratorio:

Material de Vidrio:

- Embudo de decantación de 250 mL.

- Fiolas de 10, 25, 50, 100, 500 y 1 000 mL.

- Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 mL.

- Probetas de 25 y 100 mL.

- Vasos de precipitación de 50, 100 y 250 mL.

- Viales de 1,5 mL.

Equipos:

- Cromatógrafo Agilent 1 100 series.

- Balanza Analítica Sertorius.

- Micropipeta 20-200 𝛍L.

- Micropipeta 500 𝛍L.

- Potenciómetro (pH-metro).

Reactivos:

- Acetonitrilo grado HPLC

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 18: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

9

- Disodio hidrogeno fosfato

- Ácido fosfórico

- Agua destilada

- Agua ultra pura

- Aspartame

Otros

- Computadora Pentium IV

- Filtros jeringa de 0,2 μm de poro, y 25 mm de diámetro

- Impresora

- Jeringas descartables de 3 mL

- Membrana de celulosa regenerada de 47 mm de diámetro y 0,2

μm de poro

- Memoria USB de 8 Gb

b) MÉTODO

1. Población y muestra

Universo Muestral 16

Bebidas carbonatadas en presentación de 500 mL y envase desechable que

se expenden en la ciudad de Trujillo.

Muestra 18

Cinco unidades de cada una de las cinco marcas de bebidas carbonatadas,

en presentación de 500mL y envase desechable; que se expenden en la

ciudad de Trujillo.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 19: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

10

2. Procedimiento23

a) Toma de muestra

Se tomó 5 muestras de bebida carbonatada de cada marca (Coca cola

Zero, Inca Kola Zero, Sprite Zero, Fanta Zero, Guaraná Light)

obtenidas al azar de diferentes supermercados (Plaza Vea, Metro,

Tottus y Wong) del distrito de Trujillo, en el mes de mayo.

b) Preparación de los estándares

Se preparó una solución madre de aspartame de 800ppm, de las

cuales se extrajo 16; 32; 64; 96; 128 y 160 ppm de aspartame.

Realizando cálculos:

Fiola 1º(10ml): se colocó 200µl de la solución madre y agua

ultra pura hasta aforarla.

Fiola 2º(10ml): se colocó 400µl de la solución madre y agua

ultra pura hasta aforarla.

Fiola 3º(10ml): se colocó 800µl de la solución madre y agua

ultra pura hasta aforarla.

Fiola 4º(10ml): se colocó 1200µ de la solución madre y agua

ultra pura hasta aforarla.

Fiola 5º(10ml): se colocó 1600µl de la solución madre y agua

ultra pura hasta aforarla.

Fiola 6º(10ml): se colocó 2000µmlde la solución madre y agua

ultra pura hasta aforarla.

c) Preparación de la muestra

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 20: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

11

Se desgasificó cada bebida carbonatada, por separado se tomaron 5

mL de cada una de ellas y se les adicionó 5 mL de agua ultrapura,

cada solución fue homogenizada; de cada una de éstas soluciones se

tomó 2 mL y se filtró haciendo uso de un filtro jeringa de celulosa

regenerada de 25 mm de diámetro y 0,2 µm de poro; colocándose en

viales de 1,5 mL.

d) Determinación de la linealidad

Para determinar la linealidad del método, se evaluaron 6 soluciones

estándares comprendidas 16 y 160 µg/mL para aspartame; se empleó

un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un

detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150

mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior.

e) Preparación de la fase móvil

Como fase móvil se empleó 15% de acetonitrilo + 85% de buffer

fosfato de sodio 0,02 M a pH 5,0 de 0-3 minutos y 30% de

acetonitrilo + 70% de buffer fosfato de sodio 0,02 M a pH 5,0 de 3-

14 minutos.

f) Acondicionamiento del equipo de Cromatografía Líquida de

Alta Resolución

Se puso a trabajar el equipo de HPLC, según como lo indica el

Procedimiento Estándar de Operación (PEO) para el Manejo del

Cromatógrafo Líquido de Alta Resolución marca Agilent.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 21: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

12

g) Análisis de la muestra

Se leyó a una longitud de onda de 227 nm, con una velocidad de flujo

de 1,0 mL/min., una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C.

h) Determinación de la concentración de aspartame en la muestra

El primer parámetro cromatográfico utilizado fue el tiempo de

retención del aspartame; dicho parámetro indica si el edulcorante

artificial presente, es o no aspartame, ya que se compara la posición

de los picos del cromatograma de la solución patrón con los

cromatogramas de cada una de las cinco marcas de bebidas

carbonatadas. El segundo parámetro cromatográfico a utilizado, fue

el área bajo el pico cromatográfico, el cual se extrapoló en la

ecuación de la curva de calibración; para obtener el valor de la

concentración de aspartame presente en cada unidad de bebida

carbonatada.

i) Extrapolación del área bajo la curva a mg/kg

𝑥 =(𝑚𝑈𝐴 ∗ 𝑠 − 𝐵)

𝐴×𝐹

𝜌

Donde:

x: Concentración de aspartame en mg/kg.

mUA*s: Área bajo la curva, obtenido por el HPLC.

A: Pendiente de la ecuación lineal de la curva de calibración.

B: Constante de la ecuación lineal de la curva de calibración

F: Factor de dilución, siendo su valor: 2.

ρ: Densidad de la bebida carbonatada.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 22: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

III. RESULTADOS

TABLA 1: Linealidad de las concentraciones en 𝛍g/mL de aspartame.

NIVEL CONCENTRACIÓN 𝛍g/mL ÁREA PICO (mUA*s)

1 16 19.78594

2 32 37.62578

3 64 73.92799

4 96 113.45627

5 128 145.91922

6 160 184.06577

mUA*s: Medida del área bajo la curva

GRÁFICO 1: Curva de calibración de aspartame.

y = 1.1402x + 1.5401R² = 0.9996

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

0 50 100 150 200

ÁR

EA

DE

PIC

O (

mU

A*s

)

CONCENTRACIÓN DE ASPARTAME (ug/mL)

CURVA DE CALIBRACIÓN

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 23: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

14

TABLA 2: Concentración de aspartame en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú, 2017.

BEBIDA CARBONATADA MUESTRA CANTIDAD ENCONTRADA

(mg/kg) PROMEDIO (mg/Kg)

DESVIACIÓN

ESTANDAR

GUARANA LIGHT

1 17.78

19.14 1.18

2 18.31

3 19.05

4 20.73

5 19.86

INCA KOLA ZERO

1 135.49

131.04 2.75

2 130.25

3 128.67

4 131.69

5 129.08

COCA COLA ZERO

1 89.99

90.92 8.78

2 104.22

3 79.98

4 88.03

5 92.39

SPRITE ZERO

1 148.17

153.38 5.45

2 156.33

3 146.87

4 158.71

5 156.84

FANTA ZERO

1 27.43

30.79 2.49

2 31.96

3 33.62

4 31.88

5 29.07

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 24: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

IV. DISCUSIÓN

En la tabla 1 y gráfico 1, se presentan los resultados de la linealidad para

aspartame, empleando concentraciones de 16, 32, 64, 96, 128 y 160 μg/mL;

obteniéndose: áreas de pico que van desde 19.78594 a 184.06577, una pendiente

de 1.1402 y un coeficiente de correlación de 0.9996; lo cual nos indica la

sensibilidad del método aplicado por HPLC, así como de una buena linealidad

entre la concentración de las diluciones del estándar y sus respectivas áreas de los

picos.

El comportamiento lineal de un método, debe ser demostrado dentro del intervalo

en el cual es probable que se trabaje, en esta investigación el intervalo debe estar

entre 20 y 200% de la concentración de trabajo y el coeficiente de correlación de

la regresión lineal debe encontrarse entre 0.98 y 1.00; el coeficiente de la

correlación al cuadrado debe ser mayor de 0.995, cumpliendo dicho parámetro en

nuestra curva de calibración. 23

En la tabla 2 se presenta la concentración de aspartame en cada bebida carbonatada

que consume la población de Trujillo - Perú, donde se evidencia que las 5 bebidas

contienen aspartame (desde 19.14 a 153,38), siendo Sprite Zero la que mayor

cantidad presenta, y Guaraná Light la menor.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 25: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

16

Es importante mencionar que las bebidas carbonatadas: Inca Kola Zero, Coca Cola

Zero, Sprite Zero y Fanta Zero, muestran en sus etiquetas al aspartame como

edulcorante; mientras que Guaraná Light indica a la sucralosa. (Anexo 3).

Según un trabajo realizado por Nuñez E. (2009), el límite de detección de

aspartame utilizando el método descrito en el presente trabajo es de 2.0μg/mL;

mientras que el límite de cuantificación es de 6.67μg/mL. Estos datos afirman la

posible presencia de aspartame en la bebida carbonatada de marca Guaraná Light,

no mencionada en la etiqueta. 23

Se pudo demostrar que los niveles de aspartame en las 5 bebidas carbonatadas

analizadas que consume la población de Trujillo-Perú, no superan los límites

máximos permisibles establecidos por el JECFA (Comité de Expertos en Aditivos

Alimenticios, siglas en inglés), de 600 mg/kg para Aspartame. Y para superarlo,

en el caso de Sprite Zero (con mayor concentración), tendría que ingerirse un

aproximado de 4kg (aproximadamente 4 litros) de bebida carbonatada.

Se recomienda un cuidado especial con estas bebidas, por los motivos antes

descritos, sobre todo las personas que las ingieren todos los días, y en cantidades

alarmantes.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 26: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

V. CONCLUSIONES

La concentración de aspartame es: 19,14mg/Kg en Guaraná Light, 131.04mg/Kg

en Inca Kola Zero, 90.92mg/Kg en Coca Cola Zero, 153.38mg/Kg en Sprite Zero

y 30.79mg/Kg en Fanta Zero.

Las 5 bebidas gaseosas no superan las especificaciones límites para aspartame

indicados en el Codex alimentarius de 600mg/kg.

Sprite Zero tiene la más alta concentración de aspartame, y Guaraná Light la

menor concentración.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 27: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Industriaalimenticia.com [En línea]. E.E.U.U.: Rioja I.;2016 [actualizado 2 de sep

2016; citado 20 de abr 2017]. Disponible en:

http://www.industriaalimenticia.com/articles/88482-informe-anual-de-bebidas.

2. INEI.gob [En línea]. Perú: INEI; 2012 [citado 20 de abr 2017]. Disponible en:

https://www.inei.gob.pe/media/MenuRecursivo/publicaciones_digitales/Est/Lib1

028/cap01.pdf.

3. Guevara A. Bebidas carbonatadas. Universidad Nacional Agraria La Molina.

Perú. 2015. [En línea] [citado 20 abr 2017]. Disponible en:

http://www.lamolina.edu.pe/postgrado/pmdas/cursos/dpactl/lecturas/SeparataBe

bidas%20carbonatadas.pdf.

4. Zapata L. Bebidas de Fantasía (gaseosas del tipo cola). Organización de

consumidores y usuarios de Chile. Chile. 2012. [En línea] [citado 20 abr 2017].

Disponible en: http://www.odecu.cl/images/PDF/Informe%20Bebidas.pdf.

5. Morales J. Cuantificación de Aspartame y Acesulfame-k por Cromatografía

Líquida de Alta Resolución (HPLC). Universidad Zamorano. Honduras. 2007.

[En línea] [citado 20 abr 2017]. Disponible en:

https://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/662/1/AGI-2007-T030.pdf.

6. Galdámez J. Cuantificación de aspartame en bebidas carbonatadas de dieta de tres

marcas que se expenden en supermercados de la ciudad de Guatemala.

Universidad de San Carlos de Guatemala. Guatemala. 2011. [En línea] [citado 20

abr 2017]. Disponible en: http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_3173.pdf.

7. Garriga M, Metcalfe D. Aspartame intolerance. [J] Ann Allergy. 1988;61(Pt

2):63–69.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 28: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

19

8. Maher T, Wurtman R. Possible neurologic effects of aspartame, a widely used

food additive. [J] Environ Health Persp. 1987; 75:53–57.

9. Fernstrom J, Fernstrom M, Gillis M. Acute effects of aspartame on large neutral

amino acids and monoamines in rat brain. [J] Life Sci. 1983; 32(14):1651–1658.

10. Haschemeyer R, Haschemeyer A. Proteins. A Guide to Study by Physical and

Chemical Methods. New York: John Wiley & Sons; 1973. p. 1–30.

11. Dailey J, Lasley S, Burger R, et al. Amino acids, monoamines and audiogenic

seizures in genetically epilepsy-prone rats: effects of aspartame. [J] Epilepsy Res.

1991;8(2):122–133.

12. Diomede L, Romano M, Guiso G, et al. Interspecies and interstrain studies on the

increased susceptibility to metrazol-induced convulsions in animals given

aspartame. [J] Food Chem Toxicol. 1991;29(2):101–106.

13. Yokogoshi H, Roberts C, Caballero B, et al. Effects of aspartame and glucose

administration on brain and plasma levels of large neutral amino acids and brain

5-hydroxyindoles. [J] Am J Clin Nutr. 1984;40(1):1–7.

14. Kruse J. Methanol poisoning. [J] Intensive Care Med. 1992;18(7):391–397.

15. Jeganathan P, Namasivayam A. Methanol induced biogenic amine changes in

discrete areas of rat brain: Role of simultaneous ethanol administration. [J] Ind J

Physiol Pharmacol. 1998;32(1):1–10.

16. Tephly T, McMartin K. Methanol metabolism and toxicity. Aspartame-

Physiology and Biochemistry. New York: Marcel Dekker; 1984. pp. 111–140.

17. Tephly T. The toxicity of methanol. [J] Life Sci. 1991;48(11):1031–1041.

18. Osterloh J, Pond S, Grady S, et al. Serum formate concentrations in methanol

intoxication as a criterion for hemodialysis. [J] Ann Intern Med.

1986;104(2):2000–2003.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 29: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

20

19. Ashok I, Sheeladevi R, Wankhar D. Acute effect of aspartame-induced oxidative

stress in Wistar albino rat brain. Journal of Biomedical Research. 2015;29(5):390-

396. Disponible en:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4585433/#b10.

20. Kuk J, Brown R. Aspartame intake is associated with greater glucose intolerance

in individuals with obesity. Applied Physiology, Nutrition, and Metabolism, 2016,

41:795-798. Disponible en:

http://www.nrcresearchpress.com/action/showCitFormats?doi=10.1139%2Fapn

m-2015-0675.

21. Choudhary AK, Devi RS. Effects of aspartame on hsp70, bcl-2 and bax expression

in immune organs of Wistar albino rats. Journal of Biomedical Research.

2016;30(5):427-435. Disponible en:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5044715/.

22. Codex Alimentarius. (2010). Norma General del Codex para los Aditivos

Alimentarios, CODEX STAN 192‐1995.

23. Núñez E. Contenido de cafeína, aspartame y ácido benzoico determinado por

Cromatografía Líquida de Alta Resolución en bebidas carbonatadas que consume

la población de Chiclayo – Perú. Perú. 2014.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 30: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ANEXOS

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 31: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

22

ANEXO 1

MOLÉCULA DE ASPARTAME

N-L-α-aspartil-L-fenilalanina-1-metil éster

Fuente: JECFA, 2001

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 32: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

23

ANEXO 2

NORMA GENERAL DEL CODEX PARA LOS ADITIVOS ALIMENTARIOS

(CODEX SATN 192‐1995)

Valores de la dosis máxima permitida para el aspartame en las diferentes categorías de

alimentos.

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 33: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

24

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 34: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

25

Fuente: JECFA, 2016

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 35: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

26

ANEXO 3

ETIQUETAS DE LAS BEBIDAS CARBONATADAS ANALIZADAS

INCA KOLA ZERO COCA COLA ZERO

SPRITE ZERO FANTA ZERO

GUARANÁ LIGHT

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 36: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

27

ANEXO 4: CROMATOGRAMAS DEL ESTANDAR

Estándar 1 (16𝛍g/mL)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 37: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

28

Estándar 2 (32𝛍g/mL)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 38: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

29

Estándar 3 (64𝛍g/mL)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 39: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

30

Estándar 4 (96𝛍g/mL)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 40: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

31

Estándar 5 (128𝛍g/mL)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 41: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

32

Estándar 6 (160𝛍g/mL)

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 42: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

33

ANEXO 5: CROMATOGRAMAS DE LAS MUESTRAS

Guaraná Light 1

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 43: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

34

Guaraná Light 2

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 44: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

35

Guaraná Light 3

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 45: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

36

Guaraná Light 4

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 46: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

37

Guaraná Light 5

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 47: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

38

Inca Kola Zero 1

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 48: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

39

Inca Kola Zero 2

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 49: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

40

Inca Kola Zero 3

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 50: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

41

Inca Kola Zero 4

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 51: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

42

Inca Kola Zero 5

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 52: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

43

Coca Cola Zero 1

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 53: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

44

Coca Cola Zero 2

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 54: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

45

Coca Cola Zero 3

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 55: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

46

Coca Cola Zero 4

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 56: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

47

Coca Cola Zero 5

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 57: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

48

Sprite Zero 1

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 58: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

49

Sprite Zero 2

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 59: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

50

Sprite Zero 3

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 60: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

51

Sprite Zero 4

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 61: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

52

Sprite Zero 5

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 62: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

53

Fanta Zero 1

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 63: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

54

Fanta Zero 2

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 64: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

55

Fanta Zero 3

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 65: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

56

Fanta Zero 4

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

Page 66: BIOQUIMICA FARMACIA DE - dspace.unitru.edu.pe

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

57

Fanta Zero 5

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/