AUXACOLOR™ 2 56513 20 TESZT KOLORIMETRIÁS CUKORASSZIMILÁCIÓS TESZT KLINIKAI SZEMPONTBÓL JELENTŐSEBB SARJADZÓ GOMBÁK IDENTIFIKÁLÁSÁRA

2

1. KLINIKAI JELENTŐSÉG A mycosisok, különösen a sarjadzó gomba eredetű mycotikus fertőzések előfordu-lása jelentősen növekedett az elmúlt húsz esztendőben. E fertőzések profilja határo-zottan módosult, mert megnövekedett az opportunista fertőzések részaránya. A fertőzési gócok igen változatosak lehetnek, és a szóban forgó fajok is igen sokfélék, ezért elkerülhetetlenné vált a felszíni vagy mélyebben fekvő gócokból származó mintákban található sarjadzó gombák kimutatása. Az ilyen jellegű fertőzések visszatérően kiújulhatnak, miközben egyre több antimikoti-kumot használunk, ezért egyes patogén törzsek rezisztenssé váltak. Ennek következtében ma már pontosan kell azonosítani a fertőzést okozó sarjadzó gombát. Az AUXACOLOR™ 2-vel identifikálni lehet a klinikai gyakorlatban leggyakrabban előforduló specieseket. Használata és a kapott eredmények kiértékelése könnyű, s minden laboratórium munkamenetébe nehézségek nélkül beilleszthető.

2. A VIZSGÁLAT ELVE Az AUXACOLOR™ 2 identifikáló rendszer a szénhidrát-asszimilációra épül. A sarjad-zó gombák szaporodását pH indikátor színváltozása jelzi. A kit ezen felül még 3 enzimkimutatásra szolgáló tesztet is tartalmaz, melyek egyike a Cryptococcus neoformans fenoloxidáz aktivitásának kimutatására való.

3. ALKALMAZOTT VIZSGÁLATOK A tesztlap tartalma: • negatív kontroll, amely megkönnyíti a cukorasszimiláció eredményének értelme-

zését (kék tesztlyuk). • 13 cukorasszimilációs eredmény az alábbi szubsztrátok bontásából:

- glükóz (GLU.): pozitív kontroll - maltóz (MAL.) - cellobióz (CEL.) - szaccharóz (SAC.) - trehalóz (TRE.) - galaktóz (GAL) - adonit (ADO.) - laktóz (LAC.) - melezitóz (MEL.) - raffinóz (RAF.) - xilóz (XYL.) - inozit (INO.) - arabinóz (ARA.) Lúgos közegben és brómkrezolvörös indikátor jelenlétében a fenti cukrok minde-gyike dehidrálódik. A gomba növekedését az indikátor színváltozása (kékről sárgára) és a tesztlyuk zavarossá válása jelzi.

• enzimteszt N-acetil-galaktózaminidáz (hexózaminidáz, HEX.) aktivitás detektálá-sára. A pozitív reakciót az jelzi, ha besárgul a tesztlyuk, negatív eredmény esetében színtelen marad.

• fenoloxidáz (POX.) teszt a Cryptococcus neoformans fenoloxidáz aktivitásának kimutatására, kombinálva a prolin-arilamidáz (PRO.) aktivitás jelzésével: ⇒ a tesztlyuk barna színe fenoloxidáz (POX) aktivitásra utal ⇒ a sárga szín prolin-arilamidáz (PRO) aktivitásra utal ⇒ az elszíneződés hiánya vagy a szürke elszíneződés negatív reakciót jelez mindkét teszt esetében.

A POX és PRO tesztek azonos lyukban való együttes jelenléte azzal indokolható, hogy a két teszt sohasem lehet egyszerre pozitív. Csak a POX negatív / PRO

3

negatív, POX pozitív / PRO negatív, POX negatív / PRO pozitív, PRO pozitív helyzet lehetséges a fent leírt kolorimertiás kiértékelés során. A MIKROLEMEZ FELÉPÍTÉSE

(Beteg azonosító):

(Kat. szám):

(Lotszám): BIO-RAD

4. A TESZTKIT TARTALMA 20 tesztet tartalmazó doboz (kódszám: 56513), az alábbi tartalommal: • 20 x R1 egyedileg csomagolt, 16-tesztlyukas mikrolemez • 20 öntapadó fólia • 20 x R2 használatra kész szuszpenziós folyadék • 1 eredménylap • 1 termékismertető

5. BIZTONSÁGI ÉS MUNKAVÉDELMI ELŐÍRÁSOK • A lejárati időn túl már ne használjuk a kitet. • Minden mintát tekintsünk potenciálisan fertőzőnek, és aszeptikus laboratóriumi

technikát alkalmazva végezzük a tenyésztést. • A hulladékot laboratóriumi hulladékok ártalmatlanítására szolgáló tartályban gyűjt-

sük.

6. REAGENSEK TÁROLÁSA A reagenseket +2 - +8°C között tároljuk a saját egyedi csomagolásukban. Ebben az esetben megőrzik a stabilitásukat a címkén feltüntetett lejárati időpontig. Ha már felnyitottuk a mikrolemez saját egyedi csomagolását, akkor még 10 óráig tárolhatjuk szobahőmérsékleten anélkül, hogy romlana a minősége.

7. MUNKAMENET Szükséges eszközök: L. A tesztkit tartalma.

4

Szükséges, de a kittel nem szállított eszközök: • Turbiditás kontroll kit, kódszám: 56499. • Oltókacs a telepek összegyűjtéséhez. • 100 µl térfogatú pipetta • Fertőtlenítős kidobóedény vagy autoklávozható zacskó a hulladék gyűjtéséhez. • Lehetőség szerint denzitométer. Műveletek Felhasználás előtt a reagenseket engedjük szobahőmérsékletre melegedni. 1. A mikrolemez beoltása - Az inokulumot Sabouraud táptalajon (+/-

antibiotikum), vagy kromogén agaron (CandiSelect™ 4, kódszám: 63746) 24-48 óráig tenyésztett telepekből készítsük. Steril körülmények között oltsuk be a szuszpenziós közeget (R2) elegendő mennyiségű (1-5 azonos fajta) tiszta teleppel (amelyben nincs baktérium vagy másfajta élesztőgomba), hogy a szuszpenzió denzitása megegyezzen az 56499-es kódszámú kit kontrolljával (a denzitás ekkor 1,5 McFarland egység). Ha minőségi eredményt akarunk kapni, akkor az inoculum denzitási fokának pontosnak kell lennie.

- Kémcsőkeverővel homogenizáljuk a szuszpenziót.

- Egy pipettával vegyünk ki 100-100 µl-t a szuszpenzióból és mérjünk be a mikro-lemez (R1) mindegyik tesztlyukába.

- Öntapadó fóliával fedjük le az R1 mikrolemezt, ügyelve a tökéletesen egyenletes zárásra. 48 óráig (szükség esetén 72 óráig) inkubáljuk 30°C (±2°C )-on.

2. Az eredmények leolvasása A végleges eredmények 48 óra elteltével olvashatók le. Bár a 24 óra utáni első leolvasás is megfelelő eredményt adhat, és lehetővé teheti egyes sarjadzó gombák azonosítását, a végleges értelmezést ajánlatos 48 óra elteltével elvégezni. Cryptococcus fertőzés gyanúja esetén a végleges eredmények 72 óra elteltével olvashatók le, tekintettel a mikroorganizmusok lassú növekedésére. A leolvasás megkönnyíthető a mikrolemez alján keresztül történő szemrevételezéssel vagy az öntapadó fólia eltávolításával, de megtartva a szokásos steril körülményeket, ha folytatni kell még az inkubálást. Ebben az esetben gondosan helyezzük vissza a fóliát, és jegyezzük fel a 7. oldalon látható táblázat (értelmező táblázat) szerinti eredményt az erre a célra szolgáló eredménylapra.

5

3. Az eredmények értékelése

(a) A színreakciók értelmezési útmutatója

Lyuk Teszt Szín / értelmezés

Negatív kontroll C. Neg Negatív kontroll Kék

Negatív Pozitív GLU Glükóz (pozitív kontroll) MAL Maltóz SAC Szacharóz GAL Galaktóz LAC Laktóz RAF Raffinóz INO Inozit CEL Cellobióz TRE Trehalóz ADO Adonit MEL Melezitóz XYL Xilóz C

ukor

-asz

zim

iláci

ós te

szte

k

ARA Arabinóz

Kék (a) vagy zöld

Sárga (b)

vagy színtelen

HEX N-acetil-galaktozaminidáz aktivitás kimutatása (hexózaminidáz)

Színtelen Sárga

Cryptococcus neoformans (POX) fenoloxidáz aktivitásának kimutatása

Barna

Enzi

mte

szte

k

POX/PRO Prolin-arilamidáz (PRO) aktivitás kimutatása

Színtelen vagy Szürke(c) Sárga (b)

(a) A kékesszürke és a kékeszöld negatívnak számít. (b) A halványsárga és a sárgászöld pozitívnak számít (c) A Geotrichum capitatum, a Geotrichum candidum, a Trichosporon spp és a Cryptococcus laurentii egyes törzsei a lyuk szürkésbarna elszíneződését okozhatják. Ebben az esetben a reakció negatív, és pontozáskor ennek a lyuknak „zéró” értéket kell adni.

(b) Pontozás A 15 tesztlyukra 16 biokémiai jelleg jut (mivel a POX. és PRO. tesztek azonos lyukba kerülnek). • Egy 5-számjegyű kódot kapunk, ha az alábbi 15 teszt értékeit 3 csoportba

soroljuk: 1. számjegy Glükóz Maltóz Szukróz 2. számjegy Galaktóz Laktóz Raffinóz 3. számjegy Inozit Cellobióz Trehalóz 4. számjegy Adonit Melezitóz Xilóz 5. számjegy Arabinóz Hexózaminidáz Fenoloxidáz

6

Minden negatív reakcióhoz 0 pontot rendelünk, a pozitív reakciók esetében pedig a cukorhármason belüli pozíciónak megfelelő pontszámot adunk: 1 pont az 1. pozícióhoz 2 pont a 2. pozícióhoz 4 pont a 3. pozícióhoz

⇓

A három pontszám összeadása egy 5-jegyű numerikus profilt eredményez. pl. glükóz+ maltóz + szukróz 1 + 2 + 4 = az első számjegy 7

• A prolin-arilamidáz aktivitást (PRO: POX./PRO. tesztlyuk) + vagy – jellel regisztráljuk a kifejlődött színnek megfelelően. sárga tesztlyuk (a halványsárga és a sárgászöld elszíneződés pozitívnak

számít): PRO-pozitív színtelen vagy szürke tesztlyuk (a szürkésbarna elszíneződés negatívnak

számít): PRO-negatív. • A fenti módszerrel két további kiegészítő számjegyet számítunk ki a pontozás

teljessé tételéhez. Ezek a következő jellemzőkre mutatnak: Pigmentáció (PI.) Arthrospórák (AR.) Tok (CA.) Micélium/pszeudomicélium (MY./PS-MY.)

Chlamydospóra (CHL.) Növekedés 37°C-on

A végső azonosítás a biokémiai vizsgálatok és a szokásos körülmények között megállapított kiegészítő (morfológiai és metabolikus) kritériumok kombinációján alapul. Példák:

A megfelelő számprofilok kiszámítása és identifikálás:

Számprofil Törzs Biokémiai

tesztek PRO teszt Kiegészítő karakterek

Azonosítás

1. törzs 71442 + 07 C. albicans 2. törzs 10400 - 04 C. glabrata

3. törzs 75134 - 44 Cryptococcus neoformans

A számprofil megállapítása után ezt az útmutató végén található adatbázisból kell kikeresni. Ha a kapott numerikus profil nem található meg a listában (ritka profil), akkor használjuk a 7. oldalon található értelmező táblázatot.

Törzs: 1. törzs 2. törzs 3. törzs

a hármason belül

7

8

JELMAGYARÁZAT

(1) C. albicans 2: azoknak a törzseknek felel meg, amelyeket korábban C. stellatoidea faj néven specifikáltak, ritkán fordulnak elő. (2) P. wickerhamii: patogén egysejtű alga, amely könnyen növekedik élesztő izolációs tápközegen, és hasonló a makroszkópikus megjelenése, mint a sarjadzó gombáké. Mikroszkópban belső válaszfalakkal tagolt gömbölyű sejtnek látszik. +: Legalább a törzsek 99%-ánál pozitív teszt -: Legalább a törzsek 99%-ánál negatív teszt V: Változó eredmény +(-): Legalább a törzsek 95%-ánál pozitív, vagy lassan manifesztálódó eredmény

(48 vagy 72 órás) -(+): Legalább a törzsek 95%-ánál negatív teszt PI.: Pigmentáció AR.: Arthrospórák CA.: Tok MY.: Micélium (P.C.B. közeg) PS-MY.: Pszeudomicélium (P.C.B. közeg) CHL.: Chlamydospórák

37°C: Növekedés 37°C-on

9

(c) MEGJEGYZÉSEK 1. A sarjadzó gombák identifikálása kétféle jellegzetességükön alapul, az

AUXACOLOR™ 2 mikrolemezen meghatározott biokémiai, illetve a morfológiai jellemzőiken, amelyeket lehetőleg PCB vagy RAT közegen végzett tenyésztés alapján kell vizsgálni. Mindezeket az adatokat meg kell szerezni a teljes azonosításhoz. Az eredmények értelmezésekor figyelembe kell még venni a minta eredetét, a klinikai hátteret és lehetőleg a kiegészítő vizsgálatok eredményét is.

2. Az értelmező táblázatban feltüntettük ugyan a Rhodotorula glutinist és a Rhodoto-rula mucilaginosát, de nem adtuk meg a numerikus profiljukat, mert sok jellemző-jük változékony. Erre a két fajra az a jellemző, hogy a telepeik lazacrózsaszín pigmentációjúak, ami gyakran csak 48 órás tenyésztés múltán fejlődik ki.

3. A Cryptococcus genus élesztői tokot képeznek, ami egészen vékony is lehet. 4. A Kloeckera apiculata élesztő morfológiája annyira jellegzetes, hogy még az

azonos numerikus profilú törzsektől is meg lehet különböztetni ennek alapján: nagyon kicsi, megnyúlt formájú élesztősejt, a két végén nyúlvánnyal (citromhoz hasonlít).

5. Hasznos lehet, ha kiegészítő vizsgálattal konfirmáljuk, hogy egyes élesztőfajtákat jól azonosítottunk-e, illetve tovább bontjuk még a különböző fajokat, amelyeknek egyforma a numerikus profilja: - a kálium-nitrát asszimilációs vizsgálattal meg tudunk különböztetni egymástól

olyan sarjadzó gombákat, mint például a Cryptococcus albidus (pozitív) és a Cryptococcus laurentii (negatív), vagy a Rhodotorula mucilaginosa (negatív) és a Rhodotorula glutinis (pozitív).

- az ureáz aktivitás vizsgálata ureum-indol táptalajon megerősíti, hogy valóban Cryptococcus nemzetséget azonosítottunk-e. A teszt 4 óra múlva már pozitív eredményt mutat a Cryptococcus neoformansnál, a többi fajnál csak 24 óra múltán.

- a tetrazólium bontás alapján megkülönböztethető egymástól a Candida tropi-calis (pozitív reakció) és a Candida lusitaniae (negatív reakció).

8. A TESZT TELJESÍTMÉNYE Az AUXACOLOR™ 2 tesztkittel 31 sarjadzó gomba faj és egy egysejtű algafaj identifikálható, a Prototheca wickerhamii. Az AUXACOLOR™-hez képest ez a tesztkit további 7 sarjadzó gombafaj azonosítására képes: a Candida ciferrii, a Candida dubliniensis, a Candida sake, a Kloeckera apiculata, a Trichosporon asahii, a Trichosporon inkin és a Trichosporon mucoides. Az AUXACOLOR™ 2 tesztkittel identifikált fajokat reprezentáló 120 törzzsel végzett retrospektív vizsgálat és egy klinikai felmérés kimutatta, hogy - a vizsgált törzsek 92,5%-át 48 órán belül azonosítani lehetett (59,2%-ukat már 24

órán belül), részben a kiten belül alkalmazott új paraméter-vizsgálatoknak köszönhetően (hexózaminidáz és prolin-arilamidáz teszt), részben pedig azért, mert a használati útmutatóban felsorolt numerikus profilok új fajokkal is kiegészül-tek.

- Az AUXACOLOR™ 2 tesztkittel megkülönböztethető a Candida dubliniensis (5 vizsgált törzs) és a Candida albicans (15 törzs) összes törzse.

- A prolin-arilamidáz és a fenoloxidáz vizsgálat kombinációja eggyel bővíti a mikrolemez lehetőségeit, amely hasznos a Candida glabrata törzsek identifikálá-sában (9 törzsről van szó, amelyet megkülönböztet a Candida zeylanoidestől), vagy megkülönbözteti a Candida cruseit (6 törzs) a Candida lipolyticától (4 törzs).

10

- A POX teszttel kimutatható a fenoloxidáz aktivitás a Cryptococcus neoformans 4 vizsgált törzsénél.

9. A TESZ KORLÁTAI 1. Az AUXACOLOR™ 2 tesztkittel csak az értelmező táblázatban található sarjadzó

gomba fajok identifikálhatók. 2. A hivatkozott fajok adatbázisa csak a leggyakrabban előforduló numerikus

profilokat tünteti fel. A felsorolásból hiányzó numerikus profil vagy egy hivatkozott faj ritka profilú változata, vagy egy oda fel nem vett faj. Ilyenek tárgyában forduljunk az értelmező táblázathoz, és abból egészítsük ki az adatbázist.

3. A használati útmutatóban fel nem sorolt, kivételesen ritka fajoknak megegyezhet a numerikus profilja a hivatkozott fajokéval.

4. Az AUXACOLOR™ 2 mikrolemezt csak tiszta törzsekkel lehet használni. A minták 16%-ában törzskeveredés tapasztalható. Az AUXACOLOR™ 2 teszttel párhuzamosan CandiSelectTM 4 vagy PCB táptalajon végzett tenyésztéssel lehetővé válik a kevert élestő törzsek kimutatása is.

5. Egyes esetekben az alkalmazott izoláló közeg befolyásolhatja egyes tesztek (xilóz, hexózaminidáz) színváltozását a 24 órás inkubálásnál, de nem zavarja a sarjadzó gombák 48 óra utáni identifikálását.

6. Fenoloxidáz/prolin-arilamidáz teszt: - a Cryptococcus neoformans ritkán előforduló törzsei nem mindig mutatnak

fenoloxidáz aktivitást. - a Geotrichum capitatum, a Geotrichum candidum, a Trichosoron spp és a

Cryptococcus laurentii néhány törzse gesztenyeszürke elszíneződést okozhat a tesztlyukban. Ebben az esetben a reakció negatív, és pontozáskor ennek a lyuknak „zéró” értéket kell adni.

- a Prototheca wickerhamii egyes törzsei prolin-arilamidáz jelleget mutathatnak. 7. Nem kell figyelembe venni a pozitívról negatívra való változást, azaz az eredetileg

pozitívként értelmezett lyuk színének negatívra való átváltozását. Például pozitívnak számít egy olyan tesztlyuk, amely 24 és 48 óránál sárga, és 48 vagy 72 óránál zöldre vagy kékre vált.

8. Figyelembe kell venni viszont minden negatívról pozitívra való változást az első 72 óra alatt: az érintett tesztlyukat pozitívnak kell tekinteni. Például pozitívnak számít egy olyan tesztlyuk, amely 24 és 48 óránál kékesszürke vagy kékeszöld, és 48 vagy 72 óránál sárgára vált.

10. MINŐSÉGELLENŐRZÉS Az AUXACOLOR™ 2 mikrolemezeket (R1) tiszta törzspanellel végzett minőségvizsgálatnak vetettük alá. A törzsek jellegzetes biokémiai tulajdonságokat mutattak fel. A tesztkit aktivitása a laboratóriumban is ellenőrizhető a következő referencia-törzsekkel:

11

A törzsek megfigyelt jellemzői Sabouraud agaron történő, 48 óráig tartó tenyésztés után alakultak ki. ATCC: American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA. BCCM / IHEM: Belgian Co-ordinated Collections of Micro-organisms / IHEM Culture Collection, Scientific Institute of Public Health – Louis Pasteur, Mycology Section, Rue J. Wytmanstraat 14, B-1050 Brussels IP: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue de Docteur Roux, 75724 Paris cedex 15, France

11. GYÁRTÓI MINŐSÉGELLENŐRZÉS Minden általunk gyártott termék minőségellenőrzési rendszer keretén belül készült, a nyersanyag átvételétől kezdve a forgalmazásig. Minden egyes gyártási sorozat minőségét ellenőrizzük, és csak akkor hozzuk forgalomba, ha az megfelel az előre felállított kritériumoknak. Minden sorozat gyártási és minőségellenőrzési jegyzőkönyve megtalálható a Bio-Radnál.

12. HIVATKOZÁSOK 1. C.P. KURTZMAN, J.W. FELL

The Yeasts. A taxonomic study, Fourth Revised and Enlarged Edition. Editions Elsevier 1998.

2. BH COOPER, M. SILVA-HUNTER Yeasts of medical importance. Manual of clinical microbiology. Fourth edition. 1985, p. 526-541

3. H. KOENIG Guide de mycologie médicale. Editions Ellipses 1995, p. 31-96

4. H. FRICKER-HIDALGO, B. LEBEAU, P. KERVROEDAN, O. FAURE, P. AMBROISE-THOMAS, R. GRILLOT Auxacolor, a new commercial system for yeast identification: evaluation of 182 strains comparatively with ID 32C. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1995; 53 (4): 221-5.

5. H. FRICKER, D. MONGET, B. LEBEAU, M. BABOLAT, P. AMBROISE-THOMAS, R. GRILLOT Rapid identification of Candida albicans: evaluation of “Rapidec albicans”. Study of 444 yeast strains. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1992; 50 (2): 103-6

6. D. SULLIVAN, D. COLEMAN Candida dubliniensis: characteristics and identification. J. Clin. Microbiol. 1998; 36 (2): 329-334.

7. H.S. WANG, R.T. ZEIMIS, G.D. ROBERTS Evaluation of a caffeic acid-ferric citrate test for rapid identification of Crypto-coccus neoformans. J. Clin. Microbiol. 1977; 6 (5): 445-9.

12

Jelmagyarázat: TERMÉKISMERTETŐ A helyes és biztonságos kezeléshez az aktuálisan érvényben lévő használati útmuta-tót el kell olvasni (kódszáma: 809014, 09/2002-es verzió). Kérje a forgalmazótól.

- CE jelzés

(Európai direktíva 98/79/CE az in vitro diagnosztikai célú orvosi eszközökről)

- Csak in vitro diagnosztikai felhasználásra! - Katalógusszám

- Gyártó - Meghatalmazott Képviselet

- Gyártási szám - Szavatossági idő

- Tárolási hőmérsékleti határok - Lásd a használati utasítást

A tesztleírás az Európai Direktíva által előírt egyéb idegen nyelveken a Bio-Rad helyi képviseleteinél megtalálható.

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33

10/2005 code: 880050

15

Code10000 -(+) 05 Candida krusei10000 - 25 Geotrichum capitatum10000 +(-) 01 Candida zeylanoides10000 +(-) 05 Candida lipolytica10000 + 05 Candida norvegensis10000 v 04 Candida inconspicua10010 +(-) 01 Candida zeylanoides10010 +(-) 05 Candida lipolytica10040 -(+) 21 Geotrichum candidum10200 - 00 Kloeckera apiculata10200 + 05 Candida norvegensis10200 +(-) 05 Candida lipolytica10240 + 05 Candida norvegensis10400 - 04 Candida glabrata10400 +(-) 01 Candida zeylanoides10402 +(-) 01 Candida zeylanoides10410 +(-) 01 Candida zeylanoides10600 +(-) 01 Candida zeylanoides10610 +(-) 01 Candida zeylanoides

33242 - 25 Trichosporon asahii33243 - 25 Trichosporon asahii33262 - 25 Trichosporon asahii33263 - 25 Trichosporon asahii33342 - 25 Trichosporon asahii33343 - 25 Trichosporon asahii33362 - 25 Trichosporon asahii33363 - 25 Trichosporon asahii33642 - 25 Trichosporon asahii33643 - 25 Trichosporon asahii33662 - 25 Trichosporon asahii33663 - 25 Trichosporon asahii33742 - 25 Trichosporon asahii33743 - 25 Trichosporon asahii33762 - 25 Trichosporon asahii11000 - 25 Geotrichum capitatum

11000 +(-) 05 Candida lipolytica11000 v 05 Candida rugosa11001 v 05 Candida rugosa11010 +(-) 05 Candida lipolytica11010 v 05 Candida rugosa11040 v 05 Candida rugosa11040 -(+) 21 Geotrichum candidum11041 v 05 Candida rugosa11050 v 05 Candida rugosa11050 -(+) 21 Geotrichum candidum11400 - 04 Prototheca wickerhamii11400 +(-) 01 Candida zeylanoides11410 +(-) 01 Candida zeylanoides11600 +(-) 01 Candida zeylanoides11610 +(-) 01 Candida zeylanoides

12400 - 04 Candida glabrata

13400 - 04 Prototheca wickerhamii

55000 - 05 Candida kefyr55001 - 05 Candida kefyr55040 - 05 Candida kefyr55041 - 05 Candida kefyr

Code31052 - 07 Candida albicans 231402 - 07 Candida albicans 231442 - 07 Candida albicans 231452 - 07 Candida albicans 231472 - 07 Candida albicans 2

57000 - 05 Candida kefyr57001 - 05 Candida kefyr57010 - 05 Candida kefyr57011 - 05 Candida kefyr57040 - 05 Candida kefyr57041 - 05 Candida kefyr57050 - 05 Candida kefyr57051 - 05 Candida kefyr57200 - 05 Candida kefyr57201 - 05 Candida kefyr57240 - 05 Candida kefyr57241 - 05 Candida kefyr57400 - 05 Candida kefyr57401 - 05 Candida kefyr57440 - 05 Candida kefyr57441 - 05 Candida kefyr

31002 - 07 Candida albicans 231042 - 07 Candida albicans 2

16

Code57600 - 05 Candida kefyr57601 - 05 Candida kefyr57640 - 05 Candida kefyr57641 - 05 Candida kefyr

71002 + 07 Candida dubliniensis71010 + 07 Candida dubliniensis71012 + 07 Candida dubliniensis71021 v 05 Candida parapsilosis71031 v 05 Candida parapsilosis71042 + 07 Candida albicans171052 + 07 Candida albicans 171061 v 05 Candida parapsilosis71071 v 05 Candida parapsilosis71124 - 44 Cryptococcus neoformans71125 - 44 Cryptococcus neoformans71134 - 44 Cryptococcus neoformans71135 - 44 Cryptococcus neoformans71164 - 44 Cryptococcus neoformans71165 - 44 Cryptococcus neoformans71174 - 44 Cryptococcus neoformans71175 - 44 Cryptococcus neoformans71324 - 44 Cryptococcus neoformans

Code71325 - 44 Cryptococcus neoformans71334 - 44 Cryptococcus neoformans71335 - 44 Cryptococcus neoformans71400 - 04 Saccharomyces cerevisiae71402 + 07 Candida dubliniensis71410 + 07 Candida dubliniensis71411 v 05 Candida parapsilosis71412 + 07 Candida dubliniensis71420 - 04 Saccharomyces cerevisiae71421 v 05 Candida parapsilosis71422 v 01 Candida sake71430 + 07 Candida dubliniensis71431 v 05 Candida parapsilosis71432 v 01 Candida sake71432 + 07 Candida dubliniensis71440 + 07 Candida albicans 171441 + 07 Candida albicans 171442 + 07 Candida albicans 171443 + 07 Candida albicans 171450 + 07 Candida albicans 171451 + 07 Candida albicans 171451 v 05 Candida parapsilosis71452 + 07 Candida albicans 171453 + 07 Candida albicans 171460 -(+) 05 Candida tropicalis71461 v 05 Candida parapsilosis71462 v 01 Candida sake71462 + 07 Candida albicans 171470 -(+) 05 Candida tropicalis71471 v 05 Candida parapsilosis71472 v 01 Candida sake71472 + 07 Candida albicans 171473 + 07 Candida albicans 171524 - 44 Cryptococcus neoformans71525 - 44 Cryptococcus neoformans71534 - 44 Cryptococcus neoformans71535 - 44 Cryptococcus neoformans71553 - 05 Candida ciferrii71560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71564 - 44 Cryptococcus neoformans

70160 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70161 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70170 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70171 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70400 - 04 Saccharomyces cerevisiae70462 v 01 Candida sake70560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70620 v 05 Candida lusitaniae70660 v 40 Cryptococcus albidus70661 v 40 Cryptococcus albidus70662 v 01 Candida sake70670 v 05 Candida lusitaniae70760 v 40 Cryptococcus albidus70761 v 40 Cryptococcus albidus

17

Code71565 - 44 Cryptococcus neoformans71570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71574 - 44 Cryptococcus neoformans71575 - 44 Cryptococcus neoformans71620 v 05 Candida lusitaniae71620 v 40 Cryptococcus albidus71630 v 05 Candida lusitaniae71660 -(+) 05 Candida tropicalis71660 v 05 Candida lusitaniae71661 v 05 Candida lusitaniae71662 v 01 Candida sake71670 -(+) 05 Candida tropicalis71670 v 05 Candida lusitaniae71670 v 40 Cryptococcus albidus71671 + 05 Candida guilliermondii71671 v 05 Candida lusitaniae71672 v 01 Candida sake71724 - 44 Cryptococcus neoformans71725 - 44 Cryptococcus neoformans71734 - 44 Cryptococcus neoformans71735 - 44 Cryptococcus neoformans71764 - 44 Cryptococcus neoformans71765 - 44 Cryptococcus neoformans71774 - 44 Cryptococcus neoformans71775 - 44 Cryptococcus neoformans

72762 - 25 Trichosporon inkin72763 - 25 Trichosporon inkin

Code73653 -(+) 21 Trichosporon spp73661 -(+) 21 Trichosporon spp73662 -(+) 25 Trichosporon spp73663 - 25 Trichosporon asahii73670 v 05 Candida lusitaniae73671 -(+) 21 Trichosporon spp73673 -(+) 21 Trichosporon spp73741 -(+) 21 Trichosporon spp73742 - 25 Trichosporon asahii73743 - 25 Trichosporon asahii73751 -(+) 21 Trichosporon spp73753 -(+) 21 Trichosporon spp73761 -(+) 21 Trichosporon spp73762 -(+) 25 Trichosporon spp73763 -(+) 25 Trichosporon spp73771 -(+) 21 Trichosporon spp73773 -(+) 21 Trichosporon spp

74000 - 04 Saccharomyces cerevisiae74020 - 04 Saccharomyces cerevisiae74361 v 40 Cryptococcus albidus74371 v 40 Cryptococcus albidus74400 - 04 Saccharomyces cerevisiae74420 - 04 Saccharomyces cerevisiae74560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74660 v 40 Cryptococcus albidus74661 v 40 Cryptococcus albidus74760 v 40 Cryptococcus albidus74761 v 40 Cryptococcus albidus74771 v 40 Cryptococcus albidus

73242 - 25 Trichosporon asahii73243 - 25 Trichosporon asahii73262 - 25 Trichosporon asahii73263 - 25 Trichosporon asahii73342 - 25 Trichosporon asahii73343 - 25 Trichosporon asahii73362 - 25 Trichosporon asahii73363 - 25 Trichosporon asahii73641 -(+) 21 Trichosporon spp73642 -(+) 25 Trichosporon spp73643 - 25 Trichosporon asahii73651 -(+) 21 Trichosporon spp

75000 - 04 Saccharomyces cerevisiae75020 - 04 Saccharomyces cerevisiae75124 - 44 Cryptococcus neoformans75125 - 44 Cryptococcus neoformans75134 - 44 Cryptococcus neoformans75135 - 44 Cryptococcus neoformans75164 - 44 Cryptococcus neoformans75165 - 44 Cryptococcus neoformans

18

Code75774 - 44 Cryptococcus neoformans75775 - 44 Cryptococcus neoformans

76361 v 40 Cryptococcus albidus76371 v 40 Cryptococcus albidus76761 v 40 Cryptococcus albidus76771 v 40 Cryptococcus albidus

Code75174 - 44 Cryptococcus neoformans75175 - 44 Cryptococcus neoformans75324 - 44 Cryptococcus neoformans75325 - 44 Cryptococcus neoformans75334 - 44 Cryptococcus neoformans75335 - 44 Cryptococcus neoformans75361 v 40 Cryptococcus albidus75371 v 40 Cryptococcus albidus75400 - 04 Saccharomyces cerevisiae75420 - 04 Saccharomyces cerevisiae75524 - 44 Cryptococcus neoformans75525 - 44 Cryptococcus neoformans75534 - 44 Cryptococcus neoformans75535 - 44 Cryptococcus neoformans75551 - 05 Candida ciferrii75553 - 05 Candida ciferrii75560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75564 - 44 Cryptococcus neoformans75565 - 44 Cryptococcus neoformans75570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75574 - 44 Cryptococcus neoformans75575 - 44 Cryptococcus neoformans75630 v 00 Candida famata75631 + 05 Candida guilliermondii75631 v 00 Candida famata75651 v 00 Candida famata75670 v 00 Candida famata75671 + 05 Candida guilliermondii75671 v 00 Candida famata75724 - 44 Cryptococcus neoformans75725 - 44 Cryptococcus neoformans75734 - 44 Cryptococcus neoformans75735 - 44 Cryptococcus neoformans75751 - 05 Candida ciferrii75753 - 05 Candida ciferrii75761 v 40 Cryptococcus albidus75764 - 44 Cryptococcus neoformans75765 - 44 Cryptococcus neoformans75771 v 40 Cryptococcus albidus

77361 v 40 Cryptococcus albidus77371 v 40 Cryptococcus albidus77610 v 00 Candida famata77611 v 00 Candida famata77630 v 00 Candida famata77631 v 00 Candida famata77641 -(+) 21 Trichosporon spp77643 -(+) 21 Trichosporon spp77651 -(+) 21 Trichosporon spp77651 v 00 Candida famata77653 -(+) 21 Trichosporon spp77661 -(+) 21 Trichosporon spp77663 -(+) 21 Trichosporon spp77670 v 00 Candida famata77671 -(+) 21 Trichosporon spp77671 v 00 Candida famata77673 -(+) 21 Trichosporon spp77741 -(+) 21 Trichosporon spp77742 -(+) 21 Trichosporon spp77743 -(+) 21 Trichosporon spp77751 -(+) 21 Trichosporon spp77753 -(+) 21 Trichosporon spp77761 -(+) 21 Trichosporon spp77761 v 40 Cryptococcus albidus77763 - 25 Trichosporon mucoides77771 - 25 Trichosporon mucoides77771 - 40 Cryptococcus laurentii77771 v 40 Cryptococcus albidus77772 -(+) 21 Trichosporon spp77773 - 25 Trichosporon mucoides