OBJETIVOS

Al finalizar el laboratorio el estudiante estará en capacidad de reconocer las diferentes partes del microscopio y utilizarlas correctamente.

El estudiante conocerá los diferentes instrumentos y materiales usados en el laboratorio de Microbiología.

INTRODUCCION

La microbiología es una ciencia muy interesante y fascinante y para su estudio y comprensión es necesario efectuar algunas determinaciones prácticas para lo cual es necesario el conocimiento y manejo de algunos materiales e instrumentos de su uso común.

Algunos de los instrumentos más utilizados en los laboratorios, son elaborados de vidrio resistente a altas temperaturas, por su alto contenido de dióxido de silicio, bajo álcali, óxido bórico y vestigios de otros óxidos, lo que condiciona su escaso coeficientede dilatación, teniendo una gran aplicación en la fabricación de materiales delaboratorio, uno de los más conocidos es el vidrio PYREX. Así como los elaborados de distintos metales pesados como platino,' mercurio, aluminio, cobre que les otorgan características como buenos conductores del calor o porque al medio ambiente son muy manejables sin alterar su composición.

Instrumentos de vidrio como la probeta, la pipeta o el tubo de ensayo, y otros como el mechero Bunsen, son de los más comunes en la mayoría de los laboratorios científicos.

EL MICROSCOPIO

Un microscopio simple no es más que una lente biconvexa, es decir solo tiene un sistema de lentes, pero el microscopio compuesto emplea dos sistemas de lentes separados, consiguiendo con ellos mayores aumentos. Al ser el microscopio compuesto un instrumento fundamental en microbiología, el conocer los principios básicos de la microscopia y la pericia en el empleo y la manipulación de este instrumento, son requisitos imprescindibles para casi cualquier estudio en esta ciencia.

PARTE MECÁNICA DEL MICROSCOPIO

La parte mecánica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revólver, el asa, la platina, el carro y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la parte óptica y de iluminación; además, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.

El pie y soporte: contiene la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular.

La columna o brazo: llamada también asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por su parte inferior mediante una bisagra, permitiendo la inclinación del tubo para mejorar la captación de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.

El tubo: tiene forma cilíndrica . El tubo se encuentra en la parte superior de la columna, enfoca el objeto mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos.

El tornillo micrométrico o macroscópico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.

El tornillo micrométrico o microscópico: mediante el ajuste fino con movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm, que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

La platina: es una pieza metálica plana en la que se coloca el objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

Las pinzas: son dos piezas metálicas que sirven para sujetar el objeto. Se encuentran en la platina.

El revólver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón que lo fija.

SISTEMA ÓPTICO

Es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Está formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego amplía.

El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del observador. Tiene como función aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala micrométrica; estos últimos tienen la finalidad de medir el tamaño del objeto observado.

Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revólver y producen el aumento de las imágenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión.

Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos. Así, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromático, su aumento 40 y su apertura numérica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.

El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.

SISTEMA DE ILUMINACIÓN

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende los siguientes elementos:

Fuente de iluminación: se trata clásicamente de una lámpara incandescente de tungsteno sobrevolada; en versiones más modernas con leds. Por delante de ella se sitúa un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observación produciendo luces parásitas.

El espejo: necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cóncava se emplea de preferencia con iluminación artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los modelos más modernos no poseen espejos sino una lámpara que cumple la misma función que el espejo.

Condensador: está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación, formando un cono de luz con el mismo ángulo que el del campo del objetivo. El condensador se sitúa debajo de la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación); existen condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparación. La abertura numérica máxima del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su uso con objetivos de poca potencia.

Diafragma: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolución del sistema óptico.

MATERIAL DE VIDRIO

Constituye una de las principales herramientas para los fines que se persigue en el laboratorio. Los requisitos necesarios para que un material sea un "buen material", son:1.Ser de buena calidad; es decir que no sean fácil de quebrarse.2.Ser de color neutro.3.Poseer resistenciaa las acciones mecánicasy a las variacionesdetemperaturaasí como también a los álcali-libre (no se raje).4.Poseer bajo coeficiente de dilatación (que no pierda su forma).

TUBOS DE ENSAYOSe emplean como recipientes de medios de cultivo.-Tubos de pruebaDeben ser de vidrio neutro, paredes gruesas y equilibradas, de preferencia sin rebordes para facilitar el taponamiento.De 16 x 150 mmDe 15 x 125 mmDe 13 x 100 mm para estudio de fermentación –trabajos mecánicosDe 10 x 75 mm pruebas, estudios serológicos.-Tubos de RouxCon escotadura de 4 cm. de fondo, de 25 x 200 mm para-Tubos de centrífugaDe vidrio, pueden ser cónicos o cilíndricos, siempre de paredes gruesas,De paredes gruesas, por estar inmersos rotando a alta velocidad.De polietileno, se utiliza para centrifugaciones a altas velocidades, de medidas semejantes a los anteriores.

CÁPSULAS O PLACAS PETRI:

Cajas cilíndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo para el cultivo y aislamiento de microorganismos. Las más usadas son las de 10, 15 ó20 mm x 100 mm.

PLACAS BREWER:

Para el cultivo y aislamiento de microorganismos anaeróbicos. Son idénticas a las anteriores, con excepción de las tapas que además de ser más pesadas están adaptadas para crear anaerobiosis.

PIPETAS:

Tubos cilíndricos delgados terminados en punta, graduados al décimo o al centésimo de mI. Se emplean en la medición de pequeñas cantidades de líquidos. Pueden ser:

Serológicas: son terminales y con capacidad de 0.1 a 25 ml

Volumétricas: Se reconocen por presentar una dilatación bulbosa central con unas marcas de aforamiento conocida, en el extremo proximal angosto de la pipeta, se les llama también pipetas de bola, las medidas más conocidas son de 10, 25, 50 y 100 ml.

Pipetas Pasteur: Confeccionados de varillas de vidrio de diámetro de 4 x 20mm de 30 o 40cm de longitud. La calidad de vidrio debe facilitar reblandamientos a la acción directade la llama del mechero, para conseguir por estiramiento la capilaridaddeseada. Se emplea para la toma de pequeños inóculos de siembra.

MATRACES Y ERLENMEYERS:

Recipientes de forma cónica y cuello corto, volumétricos útiles para la preparación y almacenamiento de soluciones, colorantes, reactivos, medios de cultivos, etc.

MATRACES AFORADOS O FIOLAS :

Recipientes de forma esférica y base plana. Están calibrados a medidas exactas mediante un foro en la parte media del cuello del recipiente en el quese indica la medida. Se emplean para la preparación de reactivos de preferencia solución buffer.

KITASATO:

Son frascos muy parecidos a los Erlenmeyers, se caracterizan por sus paredes gruesas y por una tubuladura lateral en el cuello, la misma que sirve de tabulación lateral para hacer el vacío. Se utiliza

PROBETAS:

Recipientes graduados de forma cilíndrica y capacidad variable, con base para la esterilidad. Pueden estar graduada.

VASOS DE PRECIPITACIÓN O BEACKER:

Recipientes cilíndricos y cortos, con una depresión en el margen de labocadura. Su utilidad es amplia. El vidrio debe ser resistente al calor.

FRASCOS VIALES PARA HEMOCULTIVOS, VACUNAS, CULTIVOS DE TEJIDO:

Son de vidrio neutro, resistentes al calor, transparentes y con tapas de rosca con capacidad para 50ml y 100ml blancos o de color ámbar pueden utilizarse para la reserva de soluciones y medios de cultivo en stock, previamente taponados con algodón esterilizados,

MATERIAL DE OTRA NATURALEZA

Vástago de metal con una cubierta de ebonita aislante del calor y en el extremo proximal una tuerca para insertar el alambre de plástico o necrón,

ASA DE KOLLE

Varillas metálicas o de vidrio que llevan en un extremo alambre de platino; cuando el alambre es recto se llama Necrón y cuando el alambre forma un anillo de diámetro variable en su extremidad toma el nombre de asa.

Espátulas de Metal con mango de madera Estuches cilíndricos o Cubículares Mecheros de Bunsen Canastillas o Cestos de Metal Soportes Universales TrípodesEQUIPOS DE LABORATORIO

POTENCIÓMETRO:

Miden el pH de los medios de cultivo y de las solucione buffer. Constituido de un par de electrodos sensible a concentraciones de hidrogeniones, conectados a un potenciómetro que indique las mediciones, Los potenciómetros emplean un electrodo de vidrio, unido a un electrodo de calomel como estándar.

CENTRÍFUGAS:

Se utiliza en la separación de sólidos suspendidos en líquidos. Hay centrífugas de tamaño y velocidades variables, la velocidad, se mide en revoluciones por minuto, La velocidad a la cual sedimentaran las partículas en un líquido dependen de varios factores:

Tamaño de la partícula.El peso de la partícula. La viscosidad del líquido.La fuerza gravitacional.

BAÑOS DE AGUA

También llamados BAÑO MARIA tienen salida de aire presentan un termostato que regula la temperatura del agua presenta un piso para colocar los materiales que se desea.

REFRIGERADORAS Y CONGELADORAS

Son incubadoras de temperatura fría menor de cero grados y los frigideres de dos a siete grados.

ESPECTROFOTÓMETRO

Se puede observar los colores de los alimentos con una intensidad que el aparto brinda.

AUTOCLAVE

Funciona por las presiones que se dará a una mayor temperatura logrando su esterilización como por ejemplo las conservas.

ESTUFAS DE AIRE CALIENTE

Al igual que el anterior es utilizado en la esterilización por el calor seco. Tienen solo dos paredes y son de forma cúbica.

CUESTIONARIO:

1.- ¿Para qué sirve el aceite de inmersión?

La función del aceite de inmersión es restringir el movimiento de la muestra, además de evitar el rozamiento entre el cubre objetos y el objetivo, generalmente se lo utiliza cuando vamos a observar con el objetivo 100x. Otra función del aceite de inmersión es evitar que la luz se desvíe; al contrario lo que se pretende es que la luz llegue concentrada hacia la muestra.

2.- 10 tipos de microscopios:

-Microscopio de iones en campo

El microscopio de iones en campo es una variedad de microscopio que puede ser usado para visualizar la ordenación de los átomos que forman la superficie de la punta afilada de una aguja de metal.

-Microscopio óptico

Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticos. También se le conoce como microscopio de luz.

-Microscopio petrográfico

Esta adaptado mediante luz polarizada plana, para realizar estudios de las preparaciones microscópicas de los suelos.

-Microscopio de fluorescencia

En este tipo, la lente que comúnmente es de vidrio es remplazada por lentes de cuarzo, mientras que la iluminación es efectuada por medio de lámparas de mercurio

-Microscopio digital

Entre los microscopios electrónicos modernos, se encuentran los digitales, que poseen cámaras y pantallas del tipo LCD o están conectados a una computadora

-Microscopio de campo oscuro

Es un microscopio que utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen.

-Microscopio de efecto túnel

Es un instrumento para tomar imágenes de superficies a nivel atómico.

-Microscopio de fuerza atómica

Es un instrumento mecano-óptico capaz de detectar fuerzas del orden de los nanonewtons.

-Microscopio confocal

Es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imágenes tridimensionales utilizando un "pinhole" espacial

-Microscopio de contraste de fases

Permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas.

3.- Dibujar un microscopio y poner sus partes