04/12/2015

1

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2

Género Campylobacter: un grupo

de bacterias zoonóticas de

importancia en salud pública, transmitidos por alimentos

Dr. Heriberto Fernández

Instituto de Microbiología Clínica

Universidad Austral de Chile

Valdivia - Chile

e-mail: hfernand@uach.cl

Red Interamericana de Laboratorios de

Análisis de Alimentos - RILAA

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¿Por qué estudiar Campylobacter?

• Infecciones por especies de la Familia Campylobacteraceae: campylobacteriosis

• La enteritis por Campylobacter

• campylobacteriosis de mayor importancia en salud pública

• agentes principales: C. jejuni y C. coli (también pueden producir infecciones sistémicas y complicaciones postinfección - SGB)

• El impacto de la campylobacteriosis en salud pública va en aumento

CAMPYLOBACTERIOSIS

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4

Laboratory reporting of selected GI pathogens in England & Wales - 1977 to 2002. CDSC

0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

1977 1979 1981 1983 1985 1987 1989 1991 1993 1995 1997 1999 2001

Year

La

b r

epo

rts

(10

00

's)

Campylobacter

Salmonella

Rotavirus

Shigella

Cryptosporidium

Incidence and Trends of Foodborne Illness, U.S.A. 2011

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5

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6

Algo de historia

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7

Vibrio fetus

Smith y Taylor,1919

Vibrio jejuni Jones y Little, 1931

Vibrio coli

Doyley, 1948

Campylobacter gen. nov.

Sebald y Véron 1963

Primera observación niños con diarrea Vibrio felinus Escherich 1886

1957: Elizabeth King relaciona V. jejuni y V. coli con diarrea en humanos

diferentes a V. fetus “Related Vibrios”

Hasta 1972 sólo se conocían 12 casos de infecciones por C. jejuni en humanos Todos con diarrea y con hemocultivos positivos Todos con coprocultivos negativos para Campylobacter

1972 diarrea en humanos C. fetus subsp. jejuni Jean Paul Butzler et al. - Bélgica

1977: medio selectivo Skirrow

1992: claridad taxonomía Familia Campylobacteraceae P. Vandamme

Descripción nuevas especies

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Reino: Procariotae

Phylum: Proteobacterias

Clase: Epsilonproteobacterias

Orden: Campylobacterales

Género

Campylobacter

Familia:

Campylobacteraceae

Familia:

Helicobacteraceae

Género

Arcobacter

Género

Helicobacter

Género:

Sulfuruspirillum

Género Campylobacter – C. jejuni – C. coli – C. lari – C. upsaliensis – C. lanieane – C. fetus – C. concisus – C. curvus – C. gracilis – C. helveticus – C. hominis – C. hyointestinalis – C. mucosalis

C. showae C. rectus C. sputorum C. insulaenigrae C. canadiensis C. peloridis C. avium C. cuniculorum C. subantarticus C. volucris C. ureolyticus C. troglodytis

Vandamme et al. (2011). IJSEM

Especies de Campylobacter

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¿Cómo es y quién es Campylobacter?

GÉNERO CAMPYLOBACTER

Bacilos Gram negativos curvos (alas de gaviota) Flagelación polar (8 ) Microaerófilos No utilizan azúcares Energía de aminoácidos Especies termotolerantes 42ºC Zoonóticos Las aves son un reservorio importante Agentes de diarrea en el hombre (1ª causa en los países industrializados; 2ª o 3ª en A. Latina) Agentes de síndrome de Guillain Barré 25 especies y 9 subespecies

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10

Características morfológicas de Campylobacter

Características morfológicas de Campylobacter

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11

¿Cuáles son los mecanismos de patogenicidad de Campylobacter?

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Mecanismos de virulencia

• ADHERENCIA

• INVASIÓN

• CITOTOXINAS

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Adherencia de Campylobacter jejuni a células HEp-2

1.4 ± 0.7 27.5 T-1

4.5 ± 2.3 70.0 O52

X bact/cel Adherencia % Cepa

Medicina (Bs. As.) 56:487-492, 1996

Adherencia de Campylobacter a células epiteliales HEp-2

Origen Cepas Especie Adhesión (%) Bacterias/celulas

H

U

M

A

N

O

052

456

372

77347

011-02

C. jejuni II

C. jejuni II

C. jejuni II

C. jejuni I

C. jejuni I

72,0%

81,0%

76,5%

60,0%

99,5%

1,90

3,02

2,31

1,96

11,75

AGUAS 68 M

40-2

C. coli II

C. jejuni II

59,0%

31,5%

2,26

1,57

ANIMAL

C 13

Gt 4

42-B

C. jejuni II

C. coli I

C. jejuni II

49,0%

52,5%

17,5%

1,79

2,99

1,27

AVES 67 Gr

P 8

C. jejuni I

C. coli I

69,5%

26,0%

1,67

1,63

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Inhibición de la adherencia de Campylobacter a

células HEp-2 por calostro humano

Cepas

Adhesión

convencional

%

Pre-incubación

Adhesión Inhibición

% %

Inc. simultánea

Adhesión Inhibición

% %

052

456

372

77347-2

011-02

T-1 **

72,0

81,0

76,5

60,0

99,5

3,5

21,0 70,8 *

5,0 93,8 *

12,0 84,3 *

22,5 62,5 *

62,0 37,7 *

1,0 71,4

16,0 77,8 *

18,5 46,7 *

28,0 63,4 *

28,0 46,7 *

70,5 29,1 *

0,0 100,0

** cepa aflagelada utilizada como control negativo.

* P < 0,01

Fernández H. Datos no publicados

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Capacidad invasora a células HEp-2 de C. jejuni según su origen

52 10 42 Total

1 0 1 Pavo

1 0 1 Tiuque

3 1 2 Agua

3 0 3 Bovino

2 0 2 Perro

5 0 5 Gorrión

6 1 5 Pato

9 3 6 Cerdo

9 2 7 H. pollo

13 3 10 Humano

Total Cepas - Cepas + Origen

Fernández et al. Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 97:509-511, 1997

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Célula VERO normales

CDT +

C. jejuni 74.2%

C. coli 64.7%

¿Cómo y por qué se adquiere Campylobacter?

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Etiología de las diarreas de origen alimentario

Vehículo principal Alimentos de origen animal

Agentes etiológicos más frecuentes > 90% de las enteritis producidas por

Campylobacter (SGB)

Salmonella Escherichia coli (EHEC - SUH)

Arcobacter

Campylobacter termotolerantes son agentes de gastroenteritis

Por consumo de:

• Leche

• Agua

• Mariscos

• Carnes: aves y otros animales

Por contacto con animales y otras fuentes de contaminación

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EN PAÍSES INDUSTRIALIZADOS

• pollos y aves

• alimentos (carne) - agua (no tratada) - leche (cruda)

• otros alimentos pueden contaminarse cruzadamente

• mascotas jóvenes (perros y gatos)

• viajes al exterior

Son las fuentes potenciales más frecuentes de infección humana

EN PAÍSES EN DESARROLLO

• transmisión hídrica

• contacto directo con animales

• fuentes alimentarias (incluyendo carne de ave)

• fuentes ambientales

• manipuladores de alimentos?

Pueden ser las rutas más importantes de infección humana

Factor de

riesgo

Presencia del factor de riesgo

en pares caso/control

si/si si/no no/si no/no p Odds

ratio

Pollos C.j + 2 25 2 75 <0.001 12.5

Animal C.j + 3 31 7 63 <0.001 4.4

Perros C.j + 0 6 2 96 NS 3.0

Sin baño

dom.

16 39 14 35 <0.001 2.8

Sin agua

potable

18 28 12 46 <0.025 2.3

Adaptado de: Grados, O. et al. WHO Bull. 66:369-374, 1988

FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A SANEAMIENTO AMBIENTAL EN LA DIARREA POR CAMPYLOBACTER

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Campylobacter en América Latina

4.0 14.1 Chile

15.0 23.0 Perú

4.9 16.8 Colombia

6.6 11.2 Brasil

9.6 10.5 Bolivia

6.1 Argentina

Normales Con diarrea País

Venezuela 9.2 9.6

Ecuador 10.0 7.5 7.0

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20

Aislamiento de Campylobacter en carnes, menudencias, huevos y leche en América Latina

5.0 Colombia Leche

25.0 Chile Huevos

95.1 Chile Hígados de ave

35.0 Brasil Carne de cerdo

57.0 Costa Rica Carne de ave

84.0 Chile Carcasa de ave

13.5 – 78.7 Brasil Carne de ave

% AISLAMIENTO PAÍS ALIMENTO

Hígados de ave en Loja, Ecuador: 51 muestras, 31 + (60,8%)

GALLINAS C. jejuni

N° %

C. coli

N° %

TOTAL

N° %

De crianza libre

n = 150 88 58.8 12 8.0 100 66.7*

Ponedoras

n = 143 32 22.4 10 7.0 42 29.4*

SPF

n = 150 9 6.2 2 1.3 11 7.3*

*p<0.05

Campylobacter en tres grupos de gallinas mantenidas en diferentes condiciones sanitarias

Fernández H., et al. Brazilian Journal of Microbiology (1993) 24:265-268

LOJA: 120 muestras trabajadas 49 muestras positivas (40,8)

04/12/2015

21

Frecuencia total de las especies de Campylobacter aisladas de carne de ave para consumo humano

A. Fernández. Tesis de Magíster en Microbiología UACh. 2010

Positivos

Negativos122 ( 87,1%)

18 ( 12,9%)

Distribución de géneros aislados en 80 muestras de mariscos bivalvos

GENEROS BACTERIANOS N° / n %

Escherichia 80 / 80 100

Enterococcus 71 / 80 88.8

Aeromonas 40 / 80 50

Arcobacter 25 / 80 31.3

Vibrio 22 / 80 27.5

Campylobacter 2 / 80 2.5

Salmonella 1 / 80 1.3

Shigella 0 0

Yersinia 0 0

C. Saldivia. Tesis de Licenciatura en Tecnología Médica. UACh.. 2002

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Aislamiento de especies de Campylobacter en muestras fluviales

METODO N/n % N/n % N/n %

Tórula de Moore 44/181* 24,3 34/44 77,3 10/44 22,7

MUESTRAS POSITIVAS C. COLI C. JEJUNI

Fernández, H. et al. Arch. Med. Vet. 35: 95-97, 2003

Antes de instalación planta de tratamiento de aguas servidas

Después de instalación planta de tratamiento de aguas servidas

Número de muestras estudiadas: 100 Cultivos + 12 (12%)

C. jejuni : 8 C. coli : 2 C. upsaliensis : 2

Rodríguez, R. Tesis Licenciatura en Tecnología Médica. UACh.

Algo sobre resistencia a los antibióticos en Campylobacter

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23

• En animales destinados a la producción de alimentos los antibióticos se usan para: • tratamiento • profilaxis y prevención • promotores del

crecimiento. • El abuso de su empleo en

estos animales tiene importantes consecuencias en salud pública pues promueve: • el desarrollo de

antibiótico-resistencia • aparición de genes de

resistencia • transmitidos a personas

• Ello ocurre usualmente por: • consumo de alimentos • contacto directo con

animales • mecanismos ambientales

• La resistencia en Salmonella y Campylobacter está claramente ligada al: • uso de antibióticos en

animales destinados a la producción de alimentos

• estas bacterias producen ETAs

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• Es de especial interés la resistencia a los antibióticos de uso crítico en medicina humana

• Ejemplo de ellos es el uso de fluoroquinolonas en estos animales: • ha generado la aparición

de resistencia en Salmonella y Campylobacter

• Problema emergente en salud pública

RESISTENCIA A LAS FLUOROQUINOLONAS EN

CAMPYLOBACTER JEJUNI Y C. COLI

• aparece inicialmente en Europa, segunda mitad de los 80’s

• después de la introducción de las fluoroquinolonas en la práctica veterinaria

• posteriormente aparece en muchos países industrializados

• también en países en vías de desarrollo

• en el sur de Chile:

• en 1989 y 1992 no fueron encontradas cepas resistentes

• las primeras cepas resistentes aparecen en 1995

• en otros países de América del Sur situación semejante

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FRECUENCIA DE AISLAMIENTO DE Campylobacter TERMOTOLERANTES RESISTENTES AL ÁCIDO NALIDÍXICO EN ANIMALES DOMÉSTICOS -1995

ORIGEN Nº de muestras

estudiadas

Nº (%*) de muestras positivas

C.jejuni ANR Nº (%**) biotipo

C.coli ANR Nº (%**)

biotipo

Cerdos 110 27 (24,5) 1 (3,7) I 1 (3,7) II

Perros 62 28 (45,2) 1 (3,6) I 0

Gatos 5 2 (40,0) 1 (50) III 0

TOTAL 177 57 (32,2) 3 (5,3) 1 (1,8)

ANR Ácido nalidíxico resistente (%*) sobre el número de muestras estudiadas (%**) sobre el número de muestras positivas

H. Fernández et al. Arch. Med. Vet. 28: 151-154, 1996

Resistencia antimicrobiana (%) de C. jejuni e C. coli en algunos países de América del Sur FLUOROQUINOLONAS - CIPROFLOXACINA

* resistencia cruzada con ácido nalidíxico, norfloxacina y enoxacina

** resistencia cruzada con ácido nalidíxico y norfloxacina

País - año fuente

C. jejuni resistencia %

C. coli resistencia %

Método

Chile – Valdivia 1989 gallinas 1992 niños, gallinas perros, agua, aves acuáticas hígados de pollo 1995 cerdos, perros , gatos 1999 gallinas 2000 humanas

Chile – Santiago 1999 gallinas

0

0

5.3* 12.5 2,1

50.0**

0

0

1.8* NS 1,9

MDDA

MDDA

Wilkins- Thiel E- test MDD

DDAM

Peru – Lima 2000 humanas 78.0 MDDA

Argentina - Bs. As. 1997 – 2000 humans 1999 - La Plata

hígados de pollo cerdos (fetos abortados, líquido amniótico)

59.6**

norfloxacina R norfloxacina R

49.1

norfloxacina R

MDD

MDD e MDDA

04/12/2015

26

0

10

20

30

40

50

60

70

80

galli-

nas

niños perros aves

acuá-

ticas

hígados

pollos

agua

de río

1992

1999

2000

2002

EVOLUCIÓN DE LA RESISTENCIA A

FLUOROQUINOLONAS EN C. JEJUNI Y C. COLI EN EL

SUR DE CHILE 1992 - 2002

H. Fernández. Datos no publicados

Antibiótico Especie carne de ave na nb % R CIM90 CIM50

Levofloxacina C. jejuni Pollo 57 11 19 16 4

Pavo 29 8 28 16 0.125

C. coli Pollo 36 19 53 16 8

Pavo 24 7 29 16 2

Ciprofloxacina C. jejuni Pollo 57 43 75 64 16

Pavo 29 12 41 64 2

C. coli Pollo 35 31 89 ≥ 128 32

Pavo 25 16 64 64 16

Ampicilina C. jejuni Pollo 57 6 11 16 8

Pavo 29 3 10 16 8

C. coli Pollo 35 2 6 16 8

Pavo 25 2 8 16 8

Comportamiento de 146 cepas de Campylobacter aisladas de las muestras de pollo y pavo, frente a tres antimicrobianos

A. Fernández .Tesis de Magíster en Microbiología UACh. 2010

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27

04/12/2015

28

¿Otros reservorios?

¿Especie nueva?

Enviada a Universidad de Ghent en Bélgica laboratorio Dr. Peter Vandamme

Campylobacter insulaenigrae Resultado:

Braz. J. Microbiol. 42: 261-265, 2011

SOBREVIDA DE CAMPYLOBACTER

JEJUNI SSP. JEJUNI Y ARCOBACTER

BUTZLERI EN AMEBAS DE VIDA LIBRE

(ACANTHAMOEBA CASTELLANII)

Profesor Patrocinante: Dr. HERIBERTO FERNÁNDEZ

Alumno: MARÍA PAZ VILLANUEVA CORONADO

PROYECTO FONDECYT 1030245

04/12/2015

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Interacción de C. jejuni con A. castellanii

• A los 50-60 minutos

– bacterias al interior de las amebas

– dentro de vacuolas

– gran motilidad

• No se observaron bacterias libres en el citoplasma de la ameba

Interacción de C. jejuni con A. castellanii

• Existencia de bacterias

intracelulares confirmada por – microscopía óptica (tinción de

Giménez o May Grünwald-Giemsa)

– microscopía electrónica de transmisión

• formas bacilares dentro de vacuolas

04/12/2015

30

Sobrevida de C. jejuni en A. castellanii expresado en ufc/ml en un período de 240 horas

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

24 48 72 120 168 240

tiempo (horas) postinfección

ufc

/ml

PUCp 190

GB-2004

ATCC 33560

CONTROL

Villanueva M.P. Tesis Licenciatura en Tecnología Médica. UACh. Fernández, H. et al. 13th Interntional Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, 2007.

VER VIDEO 1

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STRAIN E 14 Chicken Culture 1 Culture 2 Culture 3

GROUP 1 1 positive positive positive

INOCULATION 2 negative negative positive

DAY 2 3 positive positive positive

González, M. Tesis de Magíster en Microbiología. UACh. Fernández et al. 14th Interntional Workshop on Campylobacter, Helicobacter and Related Organisms, 2007

POLLOS SPF

Colonización intestinal de pollos Broiler por C. jejuni como endosimbionte de A. castellanii

Días post-

inoculación

(coprocultivo)

GRUPO1

GRUPO2

GRUPO3

CONTROL

(+) ( - )

*Po1 Po2 Po1 Po2 Po1 Po2 PoA PoB

2 + + - - + + + -

4 + + + + + + + -

6 + + + + + + + -

* Po= pollo

Sandra Flores. Tesis Licenciatura en Ciencias 2010

04/12/2015

32

04/12/2015

33

Infección por alimentos cárneos

1. Manipulación del producto crudo contaminado

2. Consumo de carne cruda o insuficientemente

cocida que esté contaminada

3. Contaminación cruzada de alimentos

Lancet 336:291, 1991

• Agua y alimentos:

– El aislamiento de Campylobacter a partir de muestras de alimentos o de muestras ambientales requiere de métodos más complejos que las muestras de deposiciones

– La utilización de un medio de enriquecimiento incubado a 37° C es necesaria para permitirle a la bacteria reparar los daños subletales producidos por el calor o el frío

Aislamiento de Campylobacter : muestras de alimentos y agua

04/12/2015

34

CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS

FRÍO

REFRIGERACIÓN CONGELACIÓN

INJURIA

DAÑO CELULAR O METABÓLICO REVERSIBLE

POR ACCIÓN DE ELEMENTOS FÍSICOS O QUÍMICOS

INJURIA

• SENSIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS SELECTIVOS

(polimixina, rifampicina)

• INCUBACIÓN A 42ºC PRODUCE MAYOR PÉRDIDA

DE VIABILIDAD QUE A 37ºC

• ACCIÓN DE succinato de sodio y cisteína AYUDA A

LA REUPERACIÓN (10 células dañadas/ml)

J. Food Safety 6:183, 1984

04/12/2015

35

Características de las células de

Campylobacter dañadas por la congelación

• Sensibles a antibióticos selectivos

Polimixina Rifampicina

• Incubación a 42ºC produce mayor perdida

de viabilidad que a 37 ºC.

• Acción de Succinato de Na y Cisteína HCl

favorece la recuperación (10 células

dañadas / ml)

J.. Food. Safety 6:183, 1984

Crecimiento a 42º C con y sin antibióticos de células de

Campylobacter jejuni sometidas y no sometidas

congelación J. Food. Prot. 9:161,1986

Congelación

3

4

5

6

7

8

0 2 4 6 8 10

Tiempo (h) a 42 ºC

Caldo Brucella

Caldo Brucella + AB

Sin Congelación

3

4

5

6

7

0 2 4 6 8 10

Tiempo (h) a 42 ºC

Caldo Brucella

Caldo Brucella + AB

04/12/2015

36

4

5

8

6

7

9

Lo

g u

fc/m

l

0 h. 1 h.

B- V T P C A B- B+

Efecto de los antibióticos en la sobrevida de

Campylobacter dañados por congelación

(Incubación a 42 ºC)

J. Food. Prot. 49:161, 1986

MÉTODO DE RAY Y JOHNSON PARA OPTIMIZAR LA RECUPERACIÓN DE CAMPYLOBACTER EN ALIMENTOS CONGELADOS

J. Food Safety 6:183, 1984

MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO: Caldo Brucella

succinato de sodio 0.3%

cisteína 0.01%

vancomicina

trimetoprim

cefalotina

anfotericina

TÉCNICA : - sembrar el medio y preincubar 37ºC - 6 h - microaerofilia

- adicionar polimixina

- reincubar 42ºC - 24 h - microaerofilia

- repicar a medio sólido para la obtención de colonias

04/12/2015

37

HÍGADOS DE POLLO PARA CONSUMO HUMANO

¿Tienen Campylobacter?

Hígados de

pollo

CALDO VCT

Sembrar el medio y preincubar

37 ºC – 6 hrs.

Microaerofilia

Adicionar polimixina B

Reincubar a 42ºC – 24 hrs.

Repicar

SKM AZCP

04/12/2015

38

Aislamiento de Campylobacter a partir de

hígados de pollo

- - 100 123 Total

- - 4.9 6 Muestras negativas

39 (42.4) 53 (57.6) 74.8 92 C. coli

15 (60) 10 (40) 20.3 25 C. jejuni

II I

Biovar % n Especie

Método ISO 10272

Muestra

Caldo Park y Sanders

+ Antibióticos suplemento A Vancomicina 0.1 g -

Trimetoprim 0.1 g

32 ºC – 4 h

Agregar suplemento B

Cefoperazona 0.032 g Cicloheximida 0.1 g

37ºC – 2 h

A. Karmali + 2º Medio

(A. Skirrow etc)

42 ºC hasta 5 días

Siembra directa

A. Karmali + 2º Medio

(A. Skirrow etc)

42 ºC hasta 5 días

Enriquecimiento en Caldo

Preston (selectivo)

modificación

incubación a 41.5ºC ( fines 2001)

04/12/2015

39

Método ISO 10272:2006

Muestra

Enriquecimiento en Caldo Preston

37 ºC x 4 a 6 h

Luego a 41,5°C x 44h microaerofilia

Agar mCCD + 2º Medio

41,5°C x 44h microaerofilia

Características de las colonias

Características morfológicas y

bioquímicas

0TROS MÉTODOS:

• Norma Francesa ISO/DIS 10272

• FDA BAM methods

• Australian Standard Method for detection of Campylobacter in foods (AS 5013.6:2015)

• UK Validated Procedure. Detection of Campylobacter species

• Norma Nórdica. Nordic Committee on Food Analysis

04/12/2015

40

Método ISO 10272:2006

Muestra

Enriquecimiento en Caldo

Preston 37 ºC x 4 a 6 h

Luego a 41,5°C x 44h

microaerofilia

Agar mCCD + 2º Medio

41,5°C x 44h

microaerofilia

Características de las colonias

Características morfológicas y

bioquímicas

Ensayo VIDAS® Campylobacter BIOMÉRIEUX

• 48 h de enriquecimiento

• prueba inmunoenzimática

• detecta de antígenos de

Campylobacter por el método

ELFA (Enzyme Linked

Fluorescent Assay)

• sistema automatizado

• resultados en 45 min

• indica presencia o ausencia

• confirmación

• validado en carne de pollo

• detecta C. jejuni/coli/lari

Método ISO 10272:2006

Muestra

Enriquecimiento en Caldo

Preston 37 ºC x 4 a 6 h

Luego a 41,5°C x 44h

microaerofilia

Agar mCCD + 2º Medio

41,5°C x 44h

microaerofilia

Características de las colonias

Características morfológicas y

bioquímicas

DuPont Qualicon BAX® System

REAL-TIME PCR ASSAY

FOR CAMPYLOBACTER

JEJUNI/COLI/LARI

• 24-48 h de enriquecimiento

• menos de 90 min de proceso

en tiempo real

• validado en cultivos

enriquecidos en muestras

aviares (pavos, pollos)

• sensibilidad equivalente a

ISO 10272-1:2006 (detecta 104

cfu/mL)

• especificidad >99%

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Método ISO 10272:2006

Muestra

Enriquecimiento en Caldo

Preston 37 ºC x 4 a 6 h

Luego a 41,5°C x 44h

microaerofilia

Agar mCCD + 2º Medio

41,5°C x 44h

microaerofilia

Características de las colonias

Características morfológicas y

bioquímicas

CampyFood ID

• La especificidad está dada

por la asociación específica

de un indicador de color y

de antibióticos

• Esta innovación permite

el crecimiento de colonias

rojo-anaranjadas en un

medio claro facilitando la

identificación de las

colonias

Método ISO 10272:2006

Muestra

Enriquecimiento en Caldo

Preston 37 ºC x 4 a 6 h

Luego a 41,5°C x 44h

microaerofilia

Agar mCCD + 2º Medio

41,5°C x 44h

microaerofilia

Características de las colonias

Características morfológicas y

bioquímicas API CAMPY

Campylobacter (19 especies)

SISTEMA ESTANDARIZADO

PARA IDENTIFICACIÓN DE

CAMPYLOBACTER

• ensayos miniaturizados

• una base de datos específica

• la galería API Campy consta de 20

microtubos con substratos

deshidratados

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Método ISO 10272:2006

Muestra

Enriquecimiento en Caldo

Preston 37 ºC x 4 a 6 h

Luego a 41,5°C x 44h

microaerofilia

Agar mCCD + 2º Medio

41,5°C x 44h

microaerofilia

Características de las colonias

Características morfológicas y

bioquímicas

DRYSPOT

CAMPYLOBACTER TEST

KIT (OXOID)

• test de aglutinación en látex

para identificar

Campylobacter en medios de

cultivo sólidos (colonias)

• partículas de látex

sensibilizadas con anticuerpos

de conejo contra antígenos de

superficie de Campylobacter

¿Y para el futuro…?

• Participación de otras especies en diferentes cuadros clínicos Periodontits

varias especies Enfermedad de Crohn

C. concisus Participación de otras especies en diarrea

C. concisus C. rectus C. ureolyticus

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Frequency Value of p (ᵡ ²)

Smokers (%) Non-smokers (%) Smokers v/s Non-smokers

Campylobacter spp. 100 86.7 0.143

C. rectus 93.3 66.7 0.068

C. concisus 73.3 60 0.439

C. gracilis 60 6.7 0.002 a

C. ureolyticus 6.7 13.3 0.543

Occurrence of different species of Campylobacter among smoker and non-smoker patients with periodontitis

a Statistically significant (p = <0.05)

¿Y para el futuro…?

• Descripción de nuevas especies Género en permanente expansión

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Género Campylobacter

• C. fetus

– subsp. fetus

– subsp. venerealis

• C. coli

• C. concisus

• C. curvus

• C. gracilis

• C. helveticus

• C. hominis

• C. hyointestinalis

– subsp. hyointestinalis

– subsp. lawsonii

• C. jejuni

- subsp. jejuni

- subsp. doylei

• C. lanienae

• C. lari

– subsp. lari

– subsp. concheus

• C. mucosalis

• C. rectus

• C. showae

• C. sputorum

• C. upsaliensis

Campylobacter insulaenigrae sp. nov. (2004)

Campylobacter canadensis sp. nov. (2007)

Campylobacter peloridis sp. nov. (2009)

Género Campylobacter

Campylobacter cunicolurom sp. nov. (2009)

Campylobacter avium sp. nov. (2009)

Campylobacter subantarticus sp. nov. (2009)

Campylobacter volucris sp. nov. (2009)

Campylobacter ureoliticus sp. nov. (2009)

Campylobacter molotri sp. nov. (2011)

Campylobacter californiensis sp. nov. (2011)

Campylobacter iguanorum sp. nov. (2011)

Campylobacter upsaliensis

ssp. upsaliensis

ssp. lastovicai (2011)

C. fetus ssp. tertudinum (2011)

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Biodiversidad

C. jejuni - C. coli

C. lari

C. upsaliensis

C. jejuni ssp. doylei

C. fetus

C. concisus

C. curvus

C. hyointestinalis

C. sputorum

C. peloridis

C. insulaenigrae

C. ureolyticus

A. butzleri

A. cryaerophilus

A. skirrowii

A. thereius

H. fenellinae

H. cinaedi

H. pullorum

Gentileza Dr. L. Collado

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¡¡ MUCHAS GRACIAS !!