Pres cromosomas

CROMOSOMAS

Dra. Fedra N. Prieto M.

Un examen de la historia de la Genética y su relacióncon los fenómenos sociales, aporta variaslecciones, entre ellas que los planteamientos de losgenetistas son rápidamente asimilados por el público ypueden ser trasladados a la vida social, a veces conconsecuencias negativas; sobre todo si losgenetistas, atrapados por el entusiasmo de los éxitos dela Biología Molecular, contribuyen a dar un punto devista no balanceado sobre el rol de la Genética en laaparición de las enfermedades. Los genetistas tienen unpapel clave y una responsabilidad, en asegurar que losprogresos en este campo, no sean usados para hacerdaño, sino para el beneficio del hombre.

CROMOSOMAS

• Son estructuras filamentosas situadas en el nucleo celular.

• Etimologia chroma= color y Soma=cuerpo.

• Estan constituidos por genes

• Son los vehiculos que facilitan la reproducciony la perpetuacion de la especie.

ESTRUCTURA

CLASIFICACION

• MORFOLOGIA

• Metacentrico

• Submetacentrico

• Acrocentrico (satelites nucleolo)

• LONGITUD

• Grandes

• Medianos

• Pequenos

CLASIFICACION

• Por la posición del centromero

SUBDIVISION

• A = 1 – 3

• B = 4 – 5

• C = 6 – 12 + X

• D = 13 – 15

• E = 16 – 18

• F = 19 – 20

• G = 21 – 22 + Y

NUMERO

• El numero de cromosomas se relaciona con la especie. Asi por ejemplo:

• Gusano intestinal = 2 cromosomas

• Crustaceo = 1500 – 1600 cromosomas

• Mono Titi = 46 cromosomas

• Chimpance = 48 cromosomas

• Hombre = 46 cromosomas

NUMERO• 46 Cromosomas en su totalidad• 44 cromosomas autologos• 2 cromosomas sexuales• Los Gametos (0vulo y espermatozoide)• 23 Cromosomas en su totalidad• 22 cromosomas autologos• 1 cromosoma sexual• En 1956 Tijo y Levan determinaron 46

cromosomas el numero de cromosomas para la especie humana.

CROMOSOMAS SEXUALES

• Son los cromosomas X - Y que juegan un papel crucial en la determinacion del sexo.

• CROMOSOMA X.- Se lo denomino asi por la incertidumbre respecto a su funcion.

• CROMOSOMA Y.- Es mucho mas pequeno queel cromosoma X y contiene unicamente unoscuantos genes de importancia funcional

METODOS PARA EL ANALISIS CROMOSOMICO

• Objetivo: Se busca analizar la constitucioncromosomica de un individuo.

• CARIOTIPO.- fotomicrografia de los cromosomas individualizados y ordenados en forma estandarizada. O tambien constitucioncromosomica de un individuo.

CARIOTIPO

PREPARACION DE LOS CROMOSOMAS

• Se requieren celulas vivas nucleadas, por lo general se utilizan linfocitos de circulacionperiferica. O bien celulas de la piel, medulaosea, vellosidades corionicas o amniocitos.

PREPARACION DE CROMOSOMAS

1.- Aislar linfocitos.

2.- Cultivo con fitohemaglutinina. 37⁰C 3 dias.

3.- Colchicina.

4.- Solucion Hipotonica.

5.- Montar, fijar y secar.

BANDEO CROMOSOMICO

• Bandeo G.- Giemsa.

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo Q – Quinacrina

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo R – Reverso

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo C – Heterocromatina Centromerica

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo de alta resolución

ANALISIS CROMOSOMICO

- Contar numero de cromosomas en un numero especifico de células (extensiones de metafases). 10 a 15 células.

- Análisis del Patrón de Bandas de cada cromosoma individual en esas células.3 a 5 extensiones de metafases.

- Mosaicismos, 30 o mas células.

ANALISIS CROMOSOMICO

- IDIOGRAMA = cariotipo ideal estilizado . Muestra los cromosomas ordenados en pares y en orden descendente según el tamaño.

IDIOGRAMA

CITOGENETICA MOLECULAR

• HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTE (FISH)

Fluorescent in situ hibridization

Es una técnica de marcaje de cromosomasmediante la cual los cromosomas sonhibridados con sondas que emitenfluorescencia y que gracias a ello permiten lavisualización, distinción y estudio de loscromosomas así como de las anomalías quepuedan presentar.

FISH

• Usa segmentos de una única hebra de ADN queson tintados, o etiquetados, con una sustanciafluorescente que puede ligarse a un cromosomaespecífico; estos segmentos de ADN son llamadossondas.

• Los cromosomas que son usualmente utilizadoscon FISH son los 13, 18, 21, X e Y; sinembargo, como son posibles marcadosadicionales del cromosoma, otros cromosomaspueden ser visualizados con esta técnica.

FISH

TECNICA FISH

• Desnaturalización del DNA para separar la doblehélice.

• Añadir la sonda de interés (fragmento de ADNmarcado fluorescentemente).

• Las sondas hibridan a regiones específicas.• Se tiñen los núcleos con un color de contraste

inespecífico.• Las sondas de DNA pueden marcarse con

moléculas fluorescentes (método directo) o nofluorescentes que se detectan con anticuerposfluorescentes (método indirecto).

TECNICA FISH

TECNICA FISH

• La técnica FISH puede realizarse a los cromosomas enmetafase o en interfase.

• En metafase se utiliza para detectar microdelecionesespecíficas, translocaciones o para identificar materialextra de origen desconocido. Los tipos de sondasusadas son cósmidos, satélites alfas y sondascompletas (painting probes).

• En interfase se emplea sobre todo para la detección deaneuploidias o grandes delecciones, duplicaciones otranslocaciones en células fetales o tumorales.

FISH EN METAFASE

• Los cósmidos son secuencias únicas que hibridan con fragmentos pequeños. Se emplean en estudios de microdeleciones.

• Las sondas satélites están formadas por secuencias altamente repetidas que se encuentran cerca de lo centrómeros. En la mayoría de los casos son específicas de cada cromosoma. Se usan para determinar aneuploidias o para identificar el origen de cromosomas marcadores.

• Las sondas completas consisten en la suma de varias sondas que hibridan en distintas zonas del cromosoma

OTRAS TECNICAS FISH

• FISH múltiple, FISH en hebra y FISH inverso.

• FISH multiple (pintar cromosomas) Mezcla desondas de diferentes partes de uncromosoma, el cromosoma entero fluorece.

• FISH inverso (pintar a la inversa) Este tipotendrá la peculiaridad de ser el ADN problemael que se marque.

FISH MULTIPLE

CITOMETRIA DE FLUJO

• La citometría de flujo es una técnica deanálisis celular que implica medir lascaracterísticas de dispersión de luz yfluorescencia que poseen las células conformese las hace pasar a través de un rayo de luz.

CITOMETRIA DE FLUJO

• Debido a las diferencias en tamaño y composición del ADN, los cromosomas se unen a diversas cantidades de colorantes fluorescentes, algunas de las cuales son especificas para secuencias G-C (gen rico) y otras para secuencias A-T (gen pobre).

• Esta propiedad de uniones diferentes permite que los cromosomas se puedan separar mediante el proceso de citometria de flujo o separacioncelular activada por fluorescencia (FACS)

FACS

• Fluorescent activated cell sorting

• Consiste en teñir los cromosomas metafasicoscon un colorante de ADN fluorescente.

• Los cromosomas se proyectan como finas gotas a través de un haz de laser que los excitan hasta que fluorescen.

• Un fotomultiplicador mide la intensidad de la fluorescencia y un ordenador analiza los resultados, elaborando un histograma con el tamaño cromosómico: CARIOTIPO DE FLUJO

CITOMETRIA DE FLUJO