Bilirubin 11

7/28/2019 Bilirubin 11

1/34

Razgradnja hema i hiperbilirubinemije

Adlija auevi Klinika biohemija I


2/34

Sudbina eritrocita

ivotni vijek im je u krvotoku60-120 dana

Senescent ni eritrociti podlijeu fagocitozi iili liziNormalno liza se javlja ekstravaskularno uRES-u prije fagocitoze eritrocita

Liza se moe javiti i i ntravaskularno(u krvi)


3/34

Extravaskularni put degradacije eritrocita

( jetra,kotana sr,&guteraa)

Hemoglobin

Globin

Amino kiseline

Amino kiselinski pool

Hem Bilirubin

Fe 2+

Izluivanje

Fagocitoza i liza


4/34

ta se deava sa slobodninm(Intravaskularni) Hemoglobin

Svrha: 1. Uhvatiti eljezo 2. sprijeiti masivni gubitak eljeza 3. Kompleksiranje slobodnog hema (veoma

toksian)

Haptoglobin: hemoglobin-haptoglobin kompleks brzo semetabolizira u jetri i guterai i stvara kompleks eljezo-globin i bilirubin. Prevenira gubitak eljeza urinom.

Hemopeksin: vezuije slobodni hem. hem-hemopexin komplekspreuzima jetra i eljezo se skladiti vezano za feritin.

Methemolbumin: kompleks oksidovanog hema i albumina.


5/34

DEGRADACIJA HEMA U BILIRUBIN

P450 cytochrome

75% se derivatizira izeritrocita

Kod normalnih odraslih

osoba,dnevno optrenje je 250-300 mg bilirubina

Normalne koncentracije uplazmi manje od 1 mg/dL

Hidrofobni transportiranod strane albumina u jetru-dalji metabolizam

unconjugated bilirubin


6/34

NORMAL BILIRUBINMETABOLISM

Uptake bilirubina od strane jetre posrdovanputem jetre- proteinski nosa(receptor)

Uptake moe biti kompetitivno inhibiran pudrugih organskih aniona

N glatkom ER, bilirubin se konjugira saglukuronskom kisleinom, ksilozom ili ribozom

No,konjugacija je preferirano sa glukuronskomkiselinom.

Konjugirani bilirubin je rastvorljiv u vodi ,alue ga hepatociti u une kanale

Prevodi se u sterkobilinogen (urobilinogen)(bezbojan) u prisustvu crijevnih bakterija

Oksiduje se u sterkobilin koji je obojen Lui se u fecesu

Neka koliinasterkobilina se moereabsorbovati putem crijeva i ponovop izluputem jetre ili bubrega


7/34

HIPERBILIRUBINEMIJA

Poveana koncentracija bilirubin (> 3 mg/dL) javlja se kod disbalansaizmeu sinteze i ekskrecije Kliniki se prepoznaje kao utica


8/34

Prehepati ka(hemolitika) utica Posljedica poveane sinteze

bilirubina (nadmaen kapacitet jetre za konjugaciju) nakonhemolize.

Liza eritrocita u viku,posljedica autoimunihporemeaja., Rh ili ABOinkompatibilnost, autoimunaetiologija; strukturalnoabnormalni eritrociti (Srpastaanemija); ili razaranjeextravasated blood

Visoka koncentracijanekonjugiranog bilirubina(normalna koncentracija ~0.5

mg/dL)


9/34

Intrahepat alna utica

Poremeaj u preuzimanju,konjugaciji eli sekrecijibilirubina

Refleksija generaliziranedisfunkcije jetre(hepatocita)

U ovomsluaju,hiperbilirubinemija obino biva praenadrugim poremeajimabiohemijskih markerafunkcije jetre


10/34

Posthepat alna utica Izazvana obstrukcijom uno

stabla

Plazma bilirubin je konjugiran,a drugi uni metaboliti, popunih kiselina se akumulirajplazmi.

Karakteristika aholine stoli (odsustvo fekalnog bilirubina iliurobilina), taman urin (rast kon

jugiranog bilirubina)

Kod kompletne obstrukcije,urobilina nema u urinu.


11/34

Di jagnoza utice


12/34

Hiperbilirubinemija:

Povean Bilirubin u krvi Neonatalna hiperbilirubinemija nastaje uslijedprodukcije nekonjugiranog bilirubina kod

novoroenadi i njihove ograniene sposobnostiza konjugacijom i izluivanjem istog.

Ova ogranienja uzrokuju fizioloku uticu .

Porter ML and Dennis BL. (2002). Hyperbilirubinemia in the term newborn. American Family Physician , 65 (4): 599-606.


13/34

KLINIKI ZNAAJ

Male bebe se esto raaju sa utom bojom svoje koe. Ovo se stanjenaziva utica i javlja se kao posljedica oslobaanja djeteta odfetalnog hemoglobina koji se zamjenjuje adultnim hemoglobinom.

Produkti katabolizma hemoglobina se uklanjanju putem jetre.Jetramale bebe nije dovoljno zrela da bi se obradila sve ove produkterazgradnje koji se javljaju u poveenoj koncentraciji . S toga seprodukti razgradnje akumuliraju dajui utu boju koe.

Izlaganje blagoj UV svjetlosti je obino dovoljno za razgradnju ovihsubstanci iako kod vrlo ozbiljnih sluajeva potrebna je dijaliza krvi jer nastali produkti mogu biti toksini.


14/34

Hiperbilirubinemija (nast.)

Hiperbilirubinemija ima potencijalne neurotoksine efekte.

Bilirubin moe ui u mozak i ako je slobodan,(nevezan za albumin)., nekonjugiran ili ako postojioteenje krvno modane barijere.

Jednom kada se nae unutar mozga, precipitacijabilirubina na niskom pH moe imati toksine efekte.

Neuroni koji se podvrgavaju diferencijaciji su podloni oteenjima od bilirubina to sugerira da prematurusibrzo razviju encefalopatiju.

Dennery PA, Seidman DS, & Stevenson DK. (2001). Neonatal Hyperbilirubinemia.New England Journal of Medicine, 344: 581-590.


15/34

65 godina stara ena sa obstruktivnom uticom

Kamenci u ui


16/34

Tabela 2- Genet ski poremeaji metabolizma bilirubina

Stanje Defekt Bilirubin Klinikipokazatelji

Crigler-Najjarsindrom

Ozbiljan defektUDP-glukuroniltransferaze

Nekonjugirani bilirubin

Ozbiljna utica

Gilberts

sindrom

Reducirana aktivnost

UDP-glukuroniltransferaze

Nekonjugirani

bilirubin

Vrlo blaga utica u

toku bolesti Dubin-Johnsonsindrom

abnormalan transportkonjugiranog bilirubina u

biliarni sistem

Konjugirani bilirubin

Srednje izraenautica

lb d


17/34

Benigni poremeaj jetre

afektiranih osoba ga naslje uje Okarakteriziran blagim, fluktuirajuim rastom

nekonjugiranog bilirubina(smanjena sposobnost

jetre za konjugaciju) esto korespondira sagladovanjem ili boleu

Mukarci ee obolijevaju od ena

Nastanak simptoma kod tinejera, rane 20te i30te.

Moes etretirati malim dozama fenobarbitala stimulacija aktivnosti UDP glukuronil transferaze

Gilberts Syndrome


18/34

Autosomalno recesivno obolenje

izuzetno rijetko genska frekvencija < 1:1000

Visoka incidenca kod (Amia i Menonita)

Okarakteriziran kompletnim nedostatkom ili znaajnomredukcijom u konjugaciji bilirubina

Prisutan sa ozbiljnom nekonjugiranom hiperbilirubinemijom kojas emanifestuje pri roenju

Aficirane osobe razviju kernikterusStanje fatalno ako nema enzima nikako.

Tretira se fototerapijom (10-12 h/dan) i transplantacijom jetrestarost od pet godina.

Crigler-Najjar Sindrom


19/34


20/34

Odreivanje bilirubina

Diazo reakcija sa bilirubinom je prvi put opisana odErlicha 1883 godine.

Azobilirubin isomeri absorbuju na 600 nm

NH

O NH

HO

O

NH

O

OH

NH

HO 3S N N+Cl -

NH

O

OH

NH

HO 3S N N

NH

O NH

HO

O

SO 3HNN

Diazotized sulfanilic acid

Bilirubin (unconjugated)

Azobilirubin (Isomer II)

Azobilirubin (Isomer I)


21/34

Evolucija diazo metode

1916 : van den Bergh i Muller su otkrili daalkohol ubrzava rekaciju, i tada uspostavili

termine dire ktni i indire ktni bilirubin 1938 : Jendrassik i Grof su dodali kafein i

natrijum benzoat kao akceleratore

Jendrassik/Grof metoda je kasnije modificirana odstrane Doumas, i danas se puno koristi.


22/34


23/34

Obzirom da je bilirubin osjetljiv na svjetlost iPromjene temperature, svi uzorci moraju biti zat od prirodne i fluorescentne svjetlosti, toplote imoraju biti u friideru.

Uzorci su stabilni jednu sedmicu na *4 stupnja iliPak zaleeni tri mjeseca

Bilirubin standardi nisu stabilni i trebaju s tretirati

kao i uzorci


24/34

Metoda sa tankim filmom

Ukupni bilirubin iz tri sloja zasnovana na reakciji po Van denBerghuReakcioni sloj sadri Triton X-

100, surfaktant,diazonij so idifilin(akcelator)Kontrolni sloj sadri binder koji

stabilizira bilirubin i puferuje usvrhu rasta osjetljivostiSuport sloj


25/34


26/34

Bilirubin metoda sa tankim filmomzasnovana na injenici da konjugirani i nekonjugirani bilirubin imaju razliite absorpcione maksimume kada se veu za kationske polimere

Valne duljine za nekonjugirani bilirubinsu 400nm i 460 nm za konjugirani bilirubin

Slojevi u ovoj metodi


27/34

Slojevi u ovoj metodiNekonjugirani/konjugirani., 4 sloja

1-Spreding sloj TritonX-100, kafeini natrij benzoat(separacija nekonjugiranogbilirubina od albumina2-Sloj demaskiranja:filtrira velije molekulepoput hemoglobina, delta bilirubina, lipida

i lipohroma3.Sloj registrriranja sadri mordant koji vezujebilirubine i pufer.4.Suport(zatitni sloj)


28/34


29/34

Bilirubin frakcije

HPLC analiza je ukazala na 4 distinktne forme bilirubina userumu:

-bilirubin je nekonjugirani oblik (27% ukupnog bilirubina) -bilirubin je mono-konjugiran sa glukuronskom kiselinom (24%) -bilirubin je dikonjugiran sa glukuronskom kiselinom (13%) -bilirubin je ireverzibilno vezan za protein (37%)

Samo , , i frakcije su rastvorljive u vodi, i zatokorespondiraju sa direktnim bilirubinom.

-bilirubin biva solubiliziran putem alkohola i prisutan je sasvim drugim podfrakcijama u frakciji indirektnog bilirubina. .


30/34

Delta bilirubin

Kod obstruktivnog obolenja jetre ponekad se detektuje .

Ovaj bilirubin je konjugirani bilirubinvezan za albumin., nije rastvorljiv u vodi.

Njegov rast objanjava rast koncentracije konjugiranog bilirubina kada nema rasta bilirubina u urinu


31/34


32/34

Neonatal Jaundice Common, particularly in premature infants

Transient (resolves in the first 10 days)

Due to immaturity of the enzymes involved in bilirubin conjugation

High levels of unconjugated bilirubin are toxic to the newborn due to itshydrophobicity it can cross the blood-brain barrier and cause a type ofmental retardation known as kernicterus

If bilirubin levels are judged to be too high, then phototherapy with UVlight is used to convert it to a water soluble, non-toxic form

If necessary, exchange blood transfusion is used to remove excess bilirubin

Phenobarbital is oftentimes administered to Mom prior to an induced laborof a premature infant crosses the placenta and induces the synthesis ofUDP glucuronyl transferase

Jaundice within the first 24 hrs of life or which takes longer then 10 daysto resolve is usually pathological and needs to be further investigated


33/34

Uzroci hiperbilirubinemije


34/34

Regulation of iron metabolism

Documents

Bilirubin 11