Prinsip Kerja Alat ADVIA CentaurChemiluminescence adlah suatu
reaksi kimia yang mengeluarkan energy dalam bentuk cahaya,
dikombinasikan dengan teknologi Immunoassay. Cahaya yang dihasilkan
oleh reaksi mengindikasikan jumlah analisa dalam sampel. Dalam hal
ini, ADVIA centaur menggunakan acredinium ester (AE) sebagai label
selama AE tidak membutuhkan penambahan katalis atau substrat. AE
yang digunakan adalah dalam benruk dimeti karena lebih stabil. AE
dioksidasi oleh hydrogen peroksida dan cahaya yang dimaksialkan
oleh perubahan dari asam ke basa. Oksidasi terjadi cepat dengan
emisi cahaya lemah terjadi kurang dari 10 detik. Hal ini membuat
metode ini lebih cepat dari RIA/EIA. Molekul AE lebih kecil dari
pada alkaline phosphatase ayng digunakan pada EIA assay. Jadi bisa
mengurangi hambatan pada tempat perlekatan. Ket :1 2
1. Alkaline phosphatase (BM 68.000) 2. AE (BM 481)
Prinsip Perlekatan Ab AE berikatan kovalen dengan Ab tanpa
mengubah kemampuan Ab untuk berikatan dengan Ag. Pengukuran Ag pada
ADVIA Centaur menggunakan Ab yang berikatan kovalen dengan AE.
Paramagnetic Particles (PMP) PMP adalah Kristal oksida besi yang
tertarik pada area magnetic. Pada uji ADVIA Centaur PMP dilapisi
oleh Ab/Ag yang disebut fase padat. PMP yang sudah dilapisi dapat
digunakan kurang lebih 50 kali pemeriksaan. PMP yang sudah dilapisi
di dalam kuvet berikatan dengan target Ag/Ab. Ketika berada dalam
area magnetic, magnet mengikat PMP sedangkan sampel dan reagen
terlepas kemudian dicuci. Bentuk-bentuk reaksi pemeriksaan I.
Bentuk Sandiwch Bentuk ini menggunakan Ab yang dilabel AE pada Lite
reagen.
-
Lite Reagen mengandung Ab yang dilbel Ae ditambahkan ke dalam
sampel. Ab yang dilabel AE mengikat secara spesifik dengan Ag
spesifik dalam sampel.
-
Fase Padat mengandung PMP yang dilapisi Ab spesifik untuk Ag
pada sampel. Kuvet diinkubasi pada 37o C, PMP berikatan dengan Ag
yang diikat oleh Ab berlabel AE.
Ket : -
PMP-Ab-Ag-Ab-AE Complex
Kuvet terpapar area magnet dan sekarang berisi AE yang berikatan
dengan Ag dimana Ag tersebut berikatan dengan PMP kemudian diikat
oleh Ab. Asam dan basa ditambahkan, emisi cahaya diukur pada
Relative Time Units (RLUs). Keika cahaya keluar dari oksidasi AE,
system menghitung konsentrasi. Dalam bentuk sandwich, konsentrasi
Ag spesifik dalam sample berhubungan langsung dengan emisi cahaya
di dalam RLUs.
RLUs
Konsentrasi
II.
Bentuk Kompetitif Bentuk Kompetitif mencakup : 1. Ag berlabel AE
dalam reagen Lite 2. Ab berlabel AE dalam reagen Lite 1. Ag
berlabel AE dalam reagen Lite Lite Reagen mengandung AE yang
dilabel Ag dan fase padat, mengandung PMP yang dilabel Ab
ditambahkan pada sampel. Kuvet diinkubasi pada 37o C. Ag
yang dilabel AE berkompetisi dengan Ag spesifik untuk melekatkan
diri pada Ab yang terikat PMP.
PMP
Ag
Ag berlabel AE Jika konsentrasi sampel rendah, Ab melekat pada
Ag berlabel AE. Demikian pula sebaliknya. Pada pemeriksaan ini, Ag
pada sampel berbanding terbalik dengan RLUs.
RLUs
Konsentrasi 2. Ab berlabel AE Reagen Lite mengandung Ab berlabel
AE dan fase padat mengandung Ag berlabel PMP. Kuvet diinkubasi pada
37o C. Ag berlabel PMP bersaing dengan Ag untuk berikatan denga Ab
berlabel AE. III. Bentuk Ab-Capture Bentuk Ab-Capture digunakan
ketika substansi yang sedang diukur pada sampel tersebut adalah Ab.
Menggunakan tambahan Ab yang secara spesifik langsung mengenai Ab
pada sampel. Pemeriksaan ini biasanya mempunyai 2 ciri khas :
inkubasi dan pencucian. Manfaat inkubasu dan pencucian pertama
adalah untuk menghapus ekses. Manfaat inkubasi dan pencucian kedua
adalah mengukur Ab pada sampel. Pemeriksaan ini mendeteksi Ig G/Ig
M spesifik. 1. Fase Padat Berisi Ig M yang berikatan pada PMP yang
berikatan pada sampel, inkubasi 37o C. Ig M pada sampel berikatan
dengan anti human IgM kemudian berikatan dengan PMP.
1
2
Ket : 1. Anti human IgM berikatan dengan PMP 2. IgM pada
sampel
2.
Lite reagen berisi antigen berlabel AE ditambahkan pada kuvet
dan
diinkubasi pada 37oC. Ag berlabel AE berikatan dengan IgM pada
sampel. 3. Kuvet berisi Ag berlabel AE yang berikatan dengan IgM
sampel kemudian
berikatan dengan anti human IgM kemudian PMP. 4. Konsentrasi
sampel dan RLUs berbanding lurus jika IgM sampel muncul
maka emisi cahaya semakin meningkat.
RLUs
Konsentrasi
Kelompok MKP Imunologi semester V Analis Medis : 1. Rieza Ali
Husein 2. Citra Anggun Kinanthi P. 3. Dian Puspita 4. Irvan
Aprilianto W. S.
