PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI - core.ac.uk · diperoleh sebanding dengan jumlah senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel. Berdasarkan hasil penelitian ini, fraksi etil

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN METODE

DEOKSIRIBOSA DAN PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL

PADA FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL

BUAH JAMBU METE ( Anacardium occidentale L. )

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Yoanes Kapistran Ervan Prasetio Kusumanto

NIM : 118114096

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2015

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN METODE

DEOKSIRIBOSA DAN PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL

PADA FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL

BUAH JAMBU METE ( Anacardium occidentale L. )

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Yoanes Kapistran Ervan Prasetio Kusumanto

NIM : 118114096

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2015


ii


iii


iv


v


vi

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan atas berkat dan bimbingan-

Nya penulis dapat menyelesaikan Skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas

Antioksidan Menggunakan Metode Deoksiribosa Dan Penetapan Kandungan

Fenolik Total Pada Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Buah Jambu Mete

(Anacardium occidentale L.)” ini dengan baik. Skripsi ini disusun untuk

memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi

Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma.

Penulis mengalami berbagai macam kesulitan dan masalah dalam proses

pengerjaan Skripsi ini. Kesulitan dan masalah ini dapat diatasi penulis dengan

bantuan dari segala pihak. Oleh karena itu penulis hendak mengucapkan terima

kasih kepada :

1. Aris Widayati, M.Si., Ph.D.., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma

2. Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji

Skripsi atas segala kesabaran dan masukan sehingga Skripsi ini dapat

diselesaikan dengan baik.

3. Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt., selaku Dosen Penguji Skripsi atas masukkan,

kritik, dan saran kepada penulis dalam penyusunan Skripsi ini.

4. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku Dosen Penguji Skripsi atas

masukkan, kritik, dan saran kepada penulis dalam penyusunan Skripsi ini.

5. Agustina Setiawati, M.Sc., Apt., selaku Kepala Laboratorium Fakultas

Farmasi yang telah memberikan izin dalam penggunaan laboratorium.

6. Pak Wagiran selaku Laboran Laboratorium Farmakognosi - Fitokimia, Pak

Suparlan selaku Laboran Laboratorium Kimia Organik, Mas Kunto selaku

Laboran Laboratorium Kimia Analisis, Mas Sigit selaku Laboran Kebun


vii

Tanaman Obat atas segala bantuan dan kerja samanya selama proses

penelitian.

7. Keluarga yang selalu memotivasi dan mendukung penulis dalam

menyelesaikan Skripsi ini.

8. Rose Verginie Erita, selaku sahabat dan orang tersayang dari penulis yang

selalu memberikan kasih sayang dan semangat untuk kesuksesan penulis

dalam Skripsi ini.

9. I Putu Abhiseka Pranajaya, selaku teman seperjuangan dalam menyelesaikan

Skripsi ini.

10. Teman-teman FST A 2011, FSM C 2011 dan teman-teman Fakultas Farmasi

Sanata Dharma angkatan 2011 yang selalu memberikan dukungan dan

semangat dalam penyusunan Skripsi ini.

11. Semua pihak yang telah membantu dan memberikan dukungan yang tidak

dapat disebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa Skripsi ini masih memiliki kekurangan dalam

berbagai macam hal. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang

membangun dari segala pihak. Semoga Skripsi ini dapat berguna bagi seluruh

pembaca.

Yogyakarta, 18 Juni 2015

Penulis


viii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... iii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ..................................................... iv

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ....................................... v

PRAKATA .................................................................................................. vi

DAFTAR ISI ............................................................................................... viii

DAFTAR TABEL ....................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xiii

INTISARI .................................................................................................... xv

ABSTRACT .................................................................................................. xvi

BAB I PENGANTAR ................................................................................. 1

A. Latar Belakang ....................................................................................... 1

B. Permasalahan .......................................................................................... 3

C. Keaslian Penelitian ................................................................................. 3

D. Manfaat Penelitian .................................................................................. 4

E. Tujuan Penelitian .................................................................................... 4

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA.......................................................... 6

A. Jambu Mete ............................................................................................ 6

B. Senyawa Fenolik .................................................................................... 8

C. Metode Folin-Cioucalteu ........................................................................ 9


ix

D. Radikal Bebas ......................................................................................... 10

E. Antioksidan ............................................................................................ 11

F. Metode Deoksiribosa .............................................................................. 13

G. Ekstraksi ................................................................................................. 14

H. Spektrofotometri ..................................................................................... 17

I. Landasan Teori ....................................................................................... 18

J. Hipotesis ................................................................................................. 20

BAB III METODE PENELITIAN.............................................................. 21

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................................. 21

B. Variabel .................................................................................................. 21

C. Definisi Operasional ............................................................................... 21

D. Bahan dan Alat Penelitian ...................................................................... 22

1. Bahan penelitian ............................................................................... 22

2. Alat penelitian .................................................................................. 22

E. Tatacara Penelitian ................................................................................. 23

1. Determinasi tanaman ........................................................................ 23

2. Pengumpulan buah jambu mete ....................................................... 23

3. Preparasi buah jambu mete ............................................................... 23

4. Penetapan kandungan fenolik total ................................................... 25

5. Uji aktivitas antioksidan ................................................................... 27

F. Analisis Data .......................................................................................... 33

1. Penetapan kandungan fenolik total ................................................... 33

2. Aktivitas penangkapan radikal hidroksil .......................................... 33


x

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 35

A. Hasil Determinasi Tanaman ................................................................... 35

B. Hasil Pengumpulan Tanaman ................................................................. 35

C. Hasil Preparasi Buah Jambu Mete .......................................................... 37

1. Hasil pembuatan serbuk simplisia .................................................... 37

2. Hasil proses ekstraksi ....................................................................... 38

3. Hasil proses fraksinasi ...................................................................... 39

D. Hasil Uji Kualitatif ................................................................................. 40

1. Hasil uji kualitatif senyawa fenolik .................................................. 40

2. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan ........................................... 41

E. Hasil Optimasi Metode Uji Fenolik Total .............................................. 43

1. Penentuan operating time ................................................................. 43

2. Penentuan panjang gelombang maksimum ...................................... 44

F. Penetapan Kandungan Fenolik Total ..................................................... 45

G. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan ................................ 48

1. Penentuan operating time ................................................................. 48

2. Penentuan panjang gelombang maksimum ...................................... 49

H. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan ............................................................. 50

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................... 56

A. Kesimpulan ............................................................................................. 56

B. Saran ....................................................................................................... 56

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 57

LAMPIRAN ................................................................................................ 60

BIOGRAFI PENULIS ................................................................................ 89


xi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel I. Hasil scanning panjang gelombang maksimum untuk

penentuan fenolik total ........................................................... 45

Tabel II. Hasil pengukuran absorbansi kurva baku asam galat ............ 47

Tabel III. Hasil penetapan kandungan fenolik total fraksi etil

asetat buah jambu mete .......................................................... 48

Tabel IV. Hasil penentuan operating time uji aktivitas antioksidan ...... 49

Tabel V. Hasil scanning panjang gelombang maksimum untuk

uji aktivitas antioksidan ......................................................... 50

Tabel VI. Hasil pengukuran absorbansi fraksi etil asetat buah

jambu mete ............................................................................. 52

Tabel VII. Hasil aktivitas antioksidan fraksi etil asetat buah jambu mete 52

Tabel VIII. Hasil pengukuran absorbansi rutin ........................................ 53

Tabel IX. Hasil uji aktivitas antioksidan rutin ....................................... 54


xii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Struktur dasar asam fenolat dan flavonoid ............................ 9

Gambar 2. Buah jambu mete ................................................................... 36

Gambar 3. Reaksi oksidasi polifenol oleh enzim polifenol oksidase

(PPO) ..................................................................................... 38

Gambar 4. Hasil uji kualitatif senyawa fenolik pada fraksi etil asetat

buah jambu mete .................................................................... 41

Gambar 5. Reaksi pembentukan kromogen MDA-TBA ......................... 42

Gambar 6. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan pada fraksi etil

asetat buah jambu mete .......................................................... 43

Gambar 7. Grafik operating time (replikasi 1) untuk penetapan

fenolik total ............................................................................ 44

Gambar 8. Struktur asam galat ................................................................ 46

Gambar 9. Kurva baku asam galat untuk penetapan kandungan

fenolik total ............................................................................ 47


xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Surat determinasi tanaman .................................................. 61

Lampiran 2. Gambar tanaman jambu mete di desa Karangtengah,

Imogiri, Bantul .................................................................... 62

Lampiran 3. Perhitungan rendemen ekstrak dan fraksi............................ 64

Lampiran 4. Data penimbangan untuk penetapan kandungan fenolik total 65

Lampiran 5. Data perhitungan konsentrasi asam galat dan fraksi etil asetat

untuk penetapan kandungan fenolik total ............................ 66

Lampiran 6. Hasil optimasi operating time untuk penetapan kandungan

fenolik total .......................................................................... 68

Lampiran 7. Optimasi panjang gelombang maksimum untuk penetapan

kandungan fenolik total ....................................................... 70

Lampiran 8. Hasil pengukuran kurva baku untuk penetapan kandungan

fenolik total .......................................................................... 73

Lampiran 9. Perhitungan kandungan fenolik total fraksi etil asetat ........ 74

Lampiran 10. Perhitungan konsentrasi bahan untuk metode deoksiribosa 75

Lampiran 11. Penimbangan dan perhitungan konsentrasi fraksi etil asetat

untuk pengukuran aktivitas antioksidan .............................. 77

Lampiran 12. Penimbangan dan perhitungan konsentrasi rutin untuk

pengukuran aktivitas antioksidan ........................................ 79

Lampiran 13. Optimasi operating time metode deoksiribosa .................... 81

Lampiran 14. Optimasi panjang gelombang maksimum metode

Deoksiribosa ........................................................................ 82


xiv

Lampiran 15. Hasil pengukuran absorbansi dan perhitungan aktivitas

antioksidan rutin .................................................................. 85


antioksidan fraksi etil asetat ................................................ 87


xv

INTISARI

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui seberapa besar

aktivitas antioksidan dan kandungan fenolik total yang terdapat dalam fraksi etil

asetat ekstrak etanol buah jambu mete (Anacardium occidentale L.). Tanaman ini

diduga memiliki kandungan senyawa fenolik terutama senyawa golongan

flavonoid yang merupakan salah satu golongan senyawa dengan sifat sebagai

antioksidan. Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode

deoksiribosa dan penetapan kandungan fenolik total dilakukan dengan metode

Folin-Ciocalteu.

Metode deoksiribosa didasarkan pada pendegradasian deoksiribosa

oleh radikal hidroksil yang dihasilkan dari sistem Fenton. Hasil degradasi berupa

malonaldehida ketika direaksikan dengan TBA pada pH rendah akan

menghasilkan kromogen berwarna merah muda. Kromogen yang dihasilkan

selanjutnya dibaca serapannya dengan spektrofotometer. Data yang diperoleh

kemudian diolah sehingga menghasilkan nilai IC25.

Metode Folin-Ciocalteu didasarkan pada reduksi asam fosfotungstat

dalam larutan alkali menjadi fosfotungstat biru. Senyawa berwarna yang terbentuk

kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer. Nilai serapan yang

diperoleh sebanding dengan jumlah senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel.

Berdasarkan hasil penelitian ini, fraksi etil asetat buah jambu mete

mempunyai kandungan fenolik total sebesar 339,3 ± 13,1 mg ekivalen asam galat.

Nilai IC25 yang diperoleh pada fraksi etil asetat buah jambu mete sebesar 285,4 ±

17,9 µg/mL, sedangkan nilai IC25 rutin sebagai kontrol positif sebesar 18,9 ± 1,2

μg/mL.

Kata kunci : Jambu mete, Anacardium occidentale L., Antioksidan, Fenolik

Total, Metode Deoksiribosa, Metode Folin-Ciocalteu.


xvi

ABSTRACT

The purpose of this study was to determine how much antioxidant

activity and total phenolic content in ethyl acetate fraction ethanolic extract of

cashew apple (Anacardium occidentale L.). This plant is thought to contain

phenolic compounds, especially flavonoids which is one of the compounds with

antioxidant properties. Antioxidant activity was measured by deoxyribose method

and determination of total phenolic content was measured by Folin-Ciocalteu

method.

Deoxyribose method is based on the degradation of deoxyribose by

hydroxyl radicals generated from Fenton system. Degradated deoxyribose will

produce malonaldehyde (MDA). When MDA reacted with TBA at low pH will

produce pink chromogen. The chromogen absorption was measured with a

spectrophotometer. The data obtained are then processed to produce IC25 value.

Folin-Ciocalteu method based on the reduction phosphotungsten acid in

alkaline solution becomes blue phosphotungsten. Absorbance of colored

compound was measured using spectrophotometer. Uptake value obtained is

proportional to the amount of phenolic compounds contained in the sample.

Based on these results, the ethyl acetate fraction of cashew apple has a

total phenolic content of 339.3 ± 13.1 mg Gallic Acid Equivalents (GAE). IC25 of

ethyl acetate fraction were obtained for 285.4 ± 17.9 μg/mL. While IC25 of rutin

as a positive control was 18.9 ± 1.2 μg / mL.

Keywords : Cashew apple, Anacardium occidentale L., antioxidant, total

phenolics, deoxyribose method, Folin-Cioucalteu method.


1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang

Radikal bebas terbentuk melalui suatu reaksi oksidasi. Radikal bebas

yang terbentuk memiliki reaktivitas yang tinggi sehingga dapat menyebabkan

kerusakan sel. Kerusakan oksidatif yang ditimbulkan karena terpapar radikal

bebas dapat menyebabkan penuaan dan beragam penyakit seperti arterosklerosis,

diabetes, sirosis, dan kanker (Aruldoss and Thangavel, 2011).

Kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas dapat dihambat oleh

antioksidan. Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron atau reduktan.

Antioksidan menghambat suatu radikal bebas dengan cara bereaksi dengan radikal

bebas reaktif membentuk radikal bebas tak reaktif dan relatif stabil (Fessenden

dan Fessenden, 1982). Tubuh secara alami memiliki antioksidan untuk membatasi

kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas. Salah satu contoh antioksidan

alami yang terdapat pada tubuh adalah enzim superoxyde dismutase (SOD).

Antioksidan dalam tubuh jumlahnya cukup terbatas, oleh karena itu dibutuhkan

asupan antioksidan tambahan dari luar tubuh.

Sumber antioksidan dapat berasal dari alam maupun sintetik. Antioksidan

sintetik menunjukkan adanya potensi sebagai agen penyebab kanker

(karsinogenik). Beberapa antioksidan sintetik menunjukkan dampak yang

merugikan pada kesehatan, meskipun tidak beracun pada tingkat yang biasa

digunakan, tetapi antioksidan sintetik terlibat dalam menimbulkan beberapa

penyakit, misalnya kanker. Antioksidan sintetik seperti butylated hydroxyanisole


2

(BHA) dan butylated hydroxytoluene (BHT) belakangan diketahui berbahaya bagi

kesehatan manusia. Oleh karena hal tersebut penelitian terkait bahan alam yang

efektif, tidak toksik, dan memiliki aktivitas sebagai antioksidan semakin gencar

dilakukan (Gupta and Sharma, 2006).

Antioksidan yang berasal dari alam dapat diperoleh dari buah dan

sayuran. Jambu mete merupakan salah satu sumber antioksidan yang potensial.

Hasil penelitian yang dilakukan oleh Adou et al. (2012) menunjukkan bahwa jus

buah jambu mete memiliki kandungan fenolik total sebesar 1653,8 ± 2,3 sampai

2374,2 ± 5,4 mg/L dan kandungan flavonoid total sebesar 298,6 ± 1,5 sampai

479,8 ± 2,6 mg/L. Senyawa fenolik termasuk juga flavonoid memiliki aktivitas

sebagai antioksidan yang mampu menangkal radikal bebas.

Untuk mengukur seberapa besar kandungan fenolik total dan aktivitas

antioksidan dalam suatu sampel diperlukan suatu metode uji. Metode uji yang

sering digunakan untuk penentuan kandungan fenolik total adalah metode Folin –

Cioucalteu. Metode ini merupakan metode sederhana yang berguna untuk

karakterisasi sampel (Prior et al., 2005). Untuk mengukur aktivitas antioksidan,

salah satu metode yang dapat digunakan adalah metode deoksiribosa. Metode

deoksiribosa merupakan metode sederhana dan murah serta mampu memberikan

hasil yang sama dan akurat (Halliwell, 1987). Metode deoksiribosa dapat

memberikan gambaran bagaimana radikal hidroksil dapat merusak salah satu

unsur DNA. Radikal bebas yang dihasilkan pada metode deoksiribosa, yaitu

radikal hidroksil yang memiliki reaktivitas lebih tinggi (Valko et al., 2006)

dibandingkan dengan radikal bebas lainnya seperti DPPH.


3

B. Permasalahan

1. Berapakah kandungan fenolik total pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah

jambu mete dalam massa ekivalen asam galat yang diukur dengan metode

Folin - Ciocalteu?

2. Berapakah nilai aktivitas antioksidan pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah

jambu mete dalam nilai IC25 yang diukur dengan metode deoksiribosa?

C. Keaslian Penelitian

Sejauh pengetahuan penulis, penelitian mengenai uji aktivitas

antioksidan menggunakan metode deoksiribosa dan penetapan kandungan fenolik

total pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah jambu mete belum pernah

dilakukan. Penelitian lain terkait dengan penelitan ini antara lain:

1. Penelitian yang dilakukan oleh Jaiswal et al. (2010). Pada penelitian Jaiswal et

al. (2010) dilakukan penetapan kandungan fenolik total dan pengujian aktivitas

antioksidan pada ekstrak daun jambu mete dengan metode DPPH. Perbedaan

antara penelitian ini dengan penelitian Jaiswal et al. (2010) terletak pada

bagian tanaman yang digunakan dan metode uji aktivitas antioksidan yang

digunakan. Hasil pada penelitian Jaiswal et al. (2010) menunjukkan bahwa

ekstrak etanol daun jambu mete memiliki kandungan fenolik total sebesar

40,26 mg ekivalen asam galat dan aktivitas antioksidan yang dinyatakan dalam

IC50 sebesar 9,41 μg/mL.


4

2. Penlitian yang dilakukan oleh Adou et al. (2012). Pada penelitian yang

dilakukan oleh Adou et al. (2012) dilakukan pengujian terkait dengan

kandungan fenolik total, flavonoid total, dan pengujian terkait profil senyawa

fenolik yang ada pada jus buah jambu mete. Hasil pada penelitian Adou et al.

(2012) menunjukkan jus buah jambu mete memiliki kandungan fenolik total

sebesar 1653,8 ± 2.3 sampai 2374,2 ± 5.4 mg/L dan kandungan flavonoid total

sebesar 298,6 ± 1,5 sampai 479,8 ± 2,6 mg/L. Senyawa fenolik yang terdeteksi

antara lain kuersetin, naringenin, asam kafeat, asam kumarat, asam ferulat, dan

asam galat.

D. Manfaat Penelitian

1. Manfaat teoritis : penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi

mengenai aktivitas antioksidan pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah jambu

mete yang diukur dengan metode deoksiribosa.

2. Manfaat praktis : penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi

tentang aktivitas antioksidan yang terdapat pada jambu mete sehingga dapat

dimanfaatkan untuk meningkatkan pertahanan tubuh manusia dari radikal

bebas.

E. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum : menguji aktivitas antioksidan dengan metode deoksiribosa dan

menetapkan kandungan fenolik total menggunakan metode Folin – Ciocalteu

pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah jambu mete.


5

2. Tujuan khusus :

a. Mengetahui nilai kandungan fenolik total pada fraksi etil asetat ekstrak

etanol buah jambu mete.

b. Mengetahui nilai aktivitas antioksidan dengan metode deoksiribosa yang

dinyatakan dengan nilai IC25 pada fraksi etil asetat ekstrak etanol buah

jambu mete.


6

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Jambu Mete

Menurut United States Depatement of Agriculture (USDA), tanaman

jambu mete diklasifikasikan sebagai berikut.

Kerajaan : Plantae

Subkerajaan : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Rosidae

Bangsa : Sapindales

Keluarga : Anacardiaceae

Marga : Anacardium L.

Jenis : Anacardium occidentale L.

Tanaman jambu mete memiliki nama ilmiah yaitu Anacardium

occidentale L. dan memiliki sinonim Acajuba occidentalis atau Cassuvium

pomiferum. Tanaman jambu mete memiliki nama yang berbeda di beberapa

negara, contohnya maranon, cajuil, merey (Spanyol), caju (Portugal), acaju

(Perancis). Tanaman jambu mete merupakan tanaman buah berupa pohon yang

berasal dari Brazil. Penyebaran tanaman jambu mete cukup luas pada daerah

tropis dan subtropis, salah satunya adalah Indonesia. Jambu mete tersebar di

seluruh Indonesia dengan nama berbeda-beda, contohnya jambu erang (Sumatera


7

Barat), gayu (Lampung), jambu mede (Jawa Barat), jambu monyet (Jawa Tengah

dan Jawa Timur), jambu jipang atau jambu dwipa (Bali), dan buah yaki (Sulawesi

Utara) (Prihatman, 2000).

Pada umumnya, tanaman jambu mete merupakan tanaman yang lebat,

bercabang rendah dan menyebar. Tingginya dapat mencapai 10,6 meter. Daunnya

berbentuk lonjong atau bulat telur, panjangnya berkisar antara 10-20 cm dan

lebarnya antara 5-10 cm. Bunga dari tanaman ini berwarna merah muda

kekuningan, dengan jumlah kelopak 5 (Morton, 1987).

Jambu mete termasuk tumbuhan dikotil yang dapat tumbuh di daerah

kering atau panas maupun daerah subur yang mempunyai ketinggian 100 meter

diatas permukaan laut. Bagian buahnya yang membesar, berdaging lunak, berarir

dan berwarna kuning kemerah merahan adalah buah semu. Bagian itu bukan buah

sebenarnya, tetapi merupakan tangkai buah yang membesar. Buah jambu mete

sejati merupakan buah batu yang berbentuk ginjal dengan kulit keras (Thomas,

2012). Beberapa penelitian tentang jambu mete menyatakan bahwa buah jambu

mete memiliki kandungan senyawa fenolik yang berlimpah, khususnya senyawa –

senyawa flavonoid yang memiliki aktivitas antioksidan. Adou et al. (2012)

menyebutkan bahwa buah jambu mete memiliki kandungan fenolik total sebesar

1653,8 ± 2,3 sampai 2374,2 ± 5,4 mg/L dan kandungan flavonoid total sebesar

298,6 ± 1,5 sampai 479,8 ± 2,6 mg/L. Senyawa fenolik yang terdapat pada jus

buah jambu mete antara lain kuersetin, naringenin, asam kafeat, asam kumarat,

asam ferulat, dan asam galat.


8

B. Senyawa Fenolik

Tumbuhan merupakan sumber makanan yang kaya akan senyawa

fenolik. Senyawa fenolik ini merupakan molekul yang dapat bertindak sebagai

antioksidan untuk mencegah penyakit jantung, mengurangi peradangan,

menurunkan kejadian kanker dan diabetes, serta mengurangi tingkat mutagenesis

pada sel manusia. Perlindungan yang diperoleh dari mengonsumsi produk

tanaman seperti buah-buahan, sayuran dan kacang-kacangan sebagian besar

terkait dengan adanya senyawa fenolik pada tanaman tersebut (Khoddami et al.,

2013). Senyawa fenolik dapat memberikan perlindungan sebagai antioksidan

dikarenakan senyawa fenolik dapat bereaksi dengan reactive oxygen species

(ROS) dan menghilangkan aktivitas radikalnya sehingga tidak berbahaya lagi

terhadap sel tubuh manusia (Sochor, 2010).

Secara umum senyawa fenolik merupakan zat atau senyawa yang

mengandung satu atau lebih cincin aromatik dengan satu atau lebih gugus

hidroksil yang menempel. Senyawa fenolik dapat diklasifikasikan menjadi tiga

kategori utama, yaitu (1) fenol sederhana yang meliputi asam fenolik, (2)

polifenol yang dibentuk oleh flavonoid dan tanin, (3) macam-macam kelompok

lainnya yang terdiri dari senyawa seperti kumarin, stilben dan lignan (Vermerris

dan Nicholson, 2006).

Asam fenolik adalah salah satu kelas fenolik utama, biasanya berbentuk

ester, glikosida atau amida. Variasi asam fenolik terletak pada jumlah dan lokasi

dari gugus hidroksil yang melekat pada cincin aromatik. Asam fenolik memiliki

dua struktur induk, yaitu asam hidroksisinamat dan asam hidroksibenzoat.


9

Flavonoid merupakan senyawa fenolik yang paling umum, karena tersebar luas di

jaringan tanaman, dan bersama karotenoid dan klorofil bertanggung jawab

memberikan warna seperti biru, ungu, kuning, oranye dan merah pada tanaman.

Flavonoid meliputi flavon, flavonol, iso-flavonol, anthocyanin, anthocyanidin,

proanthocyanidin dan katekin. Semua flavonoid merupakan turunan dari asam

amino aromatis, fenilalanin dan tirosin, serta memiliki struktur yang terdiri dari

tiga cincin (Khoddami et al., 2013).

O

OH

HO

asam hidroksisinamat

O

HO

HO

asam hidroksibenzoat

O

flavonoid

Gambar 1. Struktur dasar asam fenolat dan flavonoid.

C. Metode Folin – Ciocalteu

Metode Folin-Ciocalteu sering digunakan dalam penentuan total senyawa

fenol dalam suatu tanaman atau buah (Hemingway, 1991). Metode ini didasarkan

pada reduksi asam fosfotungstat dalam larutan alkali menjadi fosfotungstat biru.

Absorbansi yang terbentuk akibat fosfotungstat biru sebanding dengan jumlah

senyawa fenolik aromatik yang terdapat dalam sampel, sehingga dapat diketahui

seberapa besar jumlah kandungan senyawa dengan gugus fenol dalam suatu

sampel tanaman yang dinyatakan dengan ekuivalen asam gallat sebagai

pengkalibrasi (Cindrić et al., 2011).


10

Reaksi kolorimetrik banyak digunakan dalam metode spektrofotometri

UV / VIS, karena mudah dilakukan, cepat dan dapat digunakan di laboratorium

secara rutin, dan biayanya rendah. Metode ini mengukur konsentrasi total

senyawa fenolik dalam ekstrak tumbuhan. Polifenol dalam ekstrak tumbuhan

bereaksi dengan reagen Folin Ciocalteu untuk membentuk kompleks biru yang

dapat diukur dengan cahaya tampak spektrofotometri. Reagen ini memiliki

kelemahan, yaitu sangat cepat terurai dalam larutan alkali, sehingga perlu untuk

menggunakan reagen secara berlebih untuk mendapatkan reaksi yang lengkap.

Namun, penggunaan reagen berlebih dapat menimbulkan endapan dan kekeruhan

yang tinggi, sehingga membuat analisis spektrofotometri tidak mungkin untuk

dilakukan. Untuk mengatasi masalah ini, didalam reagen Folin Ciocalteu terdapat

garam lithium, yang dapat mencegah kekeruhan. Reaksi ini pada umumnya

memberikan data yang akurat dan spesifik pada beberapa kelompok senyawa

fenolik, walaupun beberapa senyawa menimbulkan warna yang sedikit berbeda

karena adanya perbedaan dalam satuan massa dan kinetika reaksi (Blainski et al.,

2013).

D. Radikal Bebas

Dalam struktur atom dan molekul, elektron biasanya dalam keadaan

berpasangan, setiap pasangan bergerak dalam orbitnya. Namun mungkin pula

terdapat suatu spesies elektron yang mampu bergerak dalam orbital dengan

keadaan tanpa pasangan. Spesies elektron yang mampu bergerak dalam orbitnya

tanpa pasangan biasa masuk dalam istilah “free”. Atom tanpa pasangan tersebut

biasanya akan lebih reaktif untuk menstabilkan dirinya, sehingga akan bersifat


11

radikal dan akan mudah dalam berinteraksi dengan senyawa-senyawa lain.

Senyawa dengan elektron tak berpasangan tersebut disebut dengan radikal bebas

(Nonhebel, 1974).

Oxigen free radicals atau lebih umum dikenal sebagai Reactive Oxigen

Species (ROS), serta Reactive Nitrogen Species (RNS), adalah produk dari

metabolisme sel normal. ROS dan RNS juga diakui memainkan peran ganda baik

sebagai spesies yang memberikan manfaat dan spesies yang dapat merusak bagi

sistem kehidupan. Efek menguntungkan dari ROS terjadi pada konsentrasi rendah/

sedang, misalnya dalam pertahanan terhadap agen infeksi dan fungsi dari

sejumlah sistem sinyal seluler (Valko et al., 2006).

Efek berbahaya dari radikal bebas menyebabkan potensi kerusakan

biologis yang disebut oxidative stress dan nitrosative stress. Hal ini terjadi dalam

sistem biologi bila ada produksi lebih dari ROS / RNS dan kekurangan enzim dan

antioksidan non-enzimatik. Kelebihan ROS dapat merusak jaringan lipid, protein,

atau DNA seluler sehingga menghambat fungsi normal mereka. Oleh karena hal

tersebut maka oxidative stress disimpulkan terlibat dalam menimbulkan sejumlah

penyakit pada manusia serta dalam proses penuaan. Radikal hidroksil, •OH,

adalah bentuk netral dari ion hidroksida. Radikal hidroksil memiliki reaktivitas

yang tinggi, membuatnya menjadi sangat berbahaya dan radikal hidroksil ini

memiliki in vivo half-life yang sangat singkat kira-kira 10-9

s (Valko et al., 2006).

E. Antioksidan

Antioksidan adalah suatu senyawa yang ketika dalam konsentrasi rendah

berada bersama substrat yang mudah teroksidasi secara signifikan mampu untuk


12

menunda atau menghambat reaksi oksidasi dari substrat tersebut (Cadenas and

Packer, 2002). Secara umum antioksidan dibedakan menjadi dua, yaitu

antioksidan enzimatis dan antioksidan non-enzimatis.

Antioksidan enzimatis disebut juga sebagai antioksidan primer atau

antioksidan endogenus. Suatu senyawa dapat dikatakan sebagai antioksidan

primer apabila dapat memberikan atom hidrogen secara cepat kepada senyawa

radikal, kemudian radikal antioksidan yang terbentuk segera menjadi senyawa

yang lebih stabil. Contoh antioksidan enzimatis adalah superoksida dismutase

(SOD), katalase, dan glutation peroksidase. Antioksidan non enzimatis disebut

juga sebagai antioksidan sekunder atau antioksidan eksogenus. Kerja sistem

antioksidan non enzimatis yaitu dengan cara memotong reaksi oksidasi berantai

dari radikal bebas atau dengan cara menangkap radikal bebas sehingga radikal

bebas tidak akan bereaksi dengan komponen seluler (Winarsi, 2007).

Aktivitas antioksidan dinyatakan dalam nilai inhibition concentration

(IC). Nilai IC yang biasanya digunakan adalah nilai IC50. Nilai IC50 merupakan

konsentrasi antioksidan yang mampu menghambat radikal bebas sekitar 50%.

Konsep nilai IC50 ini mirip dengan konsep nilai LD50 pada bidang ilmu

toksikologi. Nilai LD50 merupakan dosis suatu zat yang dapat menyebabkan

kematian sekitar 50% dari populasi. Tak hanya LD50, Sweet (1997) menjelaskan

terdapat beberapa nilai yang lain untuk menyatakan persen kematian. Nilai lain

seperti LD1, LD10, LD30, dan LD99 dapat digunakan untuk tujuan tertentu dari

penulis (Sweet, 1997). Bidang ilmu toksikologi juga menggunakan nilai IC untuk


13

menyatakan tingkat ketoksikan. Salah satunya adalah nilai IC25 yang digunakan

untuk pengujian toksisitas kronis (DEP Division of Water, 2011).

Umumnya nilai IC50 digunakan karena dapat menggambarkan setengah

dari kekuatan maksimal antioksidan. Nilai lain seperti IC25, IC75, ataupun IC90

juga dapat digunakan tergantung dari tujuan penulis. Seperti pada penelitian

Fernandes et al. (2007), dimana IC25 digunakan untuk membandingkan hasil

ketika aktivitas penangkapan radikal bebas tidak mencapai 50%.

F. Metode Deoksiribosa

Metode deoksiribosa atau sering disebut juga sebagai hydroxyl radical

scvenging assay merupakan suatu metode untuk pengukuran aktivitas

penghambatan radikal bebas oleh suatu senyawa antioksidan. Prinsip dari metode

ini adalah radikal hidroksil yang dihasilkan oleh reaksi kompleks Fe-EDTA

dengan H2O2 dengan penambahan asam askorbat (Sistem Fenton), akan

menyerang/mendegradasi deoksiribosa sehingga menghasilkan suatu produk,

yaitu malonaldehida (MDA), setelah pemanasan dengan penambahan asam

thiobarbiturat pada pH rendah, produk tersebut (malonaldehid) akan bereaksi

dengan asam thiobarbiturat sehingga menghasilkan kromogen berwarna merah

muda. Ketika ditambahkan suatu senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan,

deoksiribosa akan dilindungi dari radikal hidroksil sehingga produksi dan

pembentukan kromogen berwarna merah muda berkurang (Halliwell, 1987).


14

Secara singkat proses pembentukan kromogen berwarna merah muda

dijelaskan melalui reaksi berikut.

Fe2+- EDTA + O2 Fe3+-EDTA + O2-

Fe3+-EDTA + ascorbate Fe2+- EDTA + oxidized ascorbate

Fe2+- EDTA + H2O2OH- +

.OH + Fe3+-EDTA

.OH + deoxyribose MDA

2TBA + MDA chromogen

G. Ekstraksi

Ekstraksi merupakan pemisahan zat aktif jaringan tanaman atau hewan

dari komponen inaktif atau inert dengan menggunakan pelarut yang selektif sesuai

dengan prosedur standar. Tujuan dari ekstraksi simplisia adalah untuk

mendapatkan zat aktif yang diinginkan. Beberapa teknik ekstraksi yang sering

digunakan menurut Handa et al. (2008) adalah :

1. Maserasi

Maserasi merupakan proses dimana serbuk simplisia ditempatkan dalam wadah

bertutup dengan pelarut dan didiamkan pada suhu kamar dengan agitasi.

2. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi

penyarian sempurna yang dilakukan pada suhu kamar. Tahapan dari proses

perkolasi antara lain pengembangan bahan, tahap perendaman antara, dan

penampungan ekstrak.


15

3. Digesti

Digesti adalah maserasi dengan pengadukan pada temperatur yang lebih tinggi

daripada temperatur ruangan.

4. Penyarian dengan alat Soxhlet.

Merupakan ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru, dengan

menggunakan alat soxhlet sehingga terjadi ekstraksi terus menerus dengan

jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendinginan balik.

5. Dekok

Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90oC selama 30

menit.

6. Infundasi

Infundasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut air pada suhu 90oC selama 15

menit.

Ekstrak yang diperoleh dapat difraksinasi untuk mengisolasi suatu

senyawa kimia yang lebih spesifik. Salah satu metode untuk fraksinasi adalah

ekstraksi cair-cair. Metode ekstraksi cair-cair menggunakan dua pelarut yang

tidak bercampur. Salah satu pelarut biasanya adalah air dan pelarut lainnya

merupakan pelarut organik. Distribusi analit antara fase air dan fase organik

didasarkan pada Hukum Nernst, dimana koefisien ditribusi (KD) sama dengan

perbandingan analit pada masing-masing fase dalam keadaan setimbang.

Distribusi analit antara dua pelarut yang tidak bercampur didasarkan pada

kelarutan analit pada masing-masing pelarut (Wells, 2003).


16

Keterangan : KD = koefisien distribusi

Corg = konsentrasi analit pada pelarut organik

Caq = konsentrasi analit pada pelarut air

Faktor-faktor berikut harus dipertimbangkan ketika memilih pelarut

untuk ekstraksi:

(1) Kekuatan pelarut (selektivitas)

Konstituen yang diinginkan harus terekstrak dari bahan tanaman, oleh karena

itu selektivitas yang tinggi sangat diperlukan.

(2) Titik didih

Titik didih pelarut adalah serendah mungkin untuk memudahkan penghilangan

pelarut dari produk.

(3) Reaktivitas

Pelarut seharusnya tidak bereaksi secara kimia dengan ekstrak.

(4) Viskositas

Pelarut dengan viskositas rendah akan menyebabkan penurunan tekanan dan

perpindahan massa yang baik.

(5) Keamanan

Pelarut harus tidak mudah terbakar dan non-korosif, tidak menimbulkan

bahaya beracun, dan tidak merusak lingkungan lingkungan.

(6) Biaya

Pelarut harus tersedia dengan biaya rendah.


17

(7) Tekanan uap

Untuk mencegah hilangnya pelarut oleh penguapan, tekanan uap rendah pada

suhu operasi diperlukan.

(8) Recovery

Pelarut harus dapat dipisahkan dengan mudah dari ekstrak untuk

menghasilkan ekstrak bebas pelarut.

H. Spektrofotometri

Spektrofotometri UV/Visibel memiliki prinsip yaitu radiasi pada rentang

panjang gelombang 200–700 nm dilewatkan melalui suatu larutan senyawa.

Elektron pada ikatan dalam molekul menjadi tereksitasi sehingga berada pada

keadaan energi yang lebih tinggi dalam proses menyerap sejumlah energi yang

melewati larutan tersebut. Semakin longgar elektron tersebut ditahan di dalam

ikatan molekul, panjang gelombang radiasi yang diserap semakin panjang

(Watson, 2010).

Absorpsi cahaya ultraviolet atau cahaya tampak mengakibatkan adanya

transisi elektronik, yaitu perpindahan elektron dari orbital dasar yang energinya

rendah menuju keadaan tereksitasi yang energinya lebih tinggi. Panjang

gelombang cahaya ultraviolet atau cahaya tampak bergantung pada mudahnya

perpindahan elektron. Molekul – molekul yang memerlukan energi lebih banyak

untuk memindahkan elektron, akan menyerap pada panjang gelombang yang lebih

pendek dan begitu sebaliknya (Fessenden dan Fessenden, 1982).

Kolorimetri merupakan salah satu metode analisa kimia yang

berdasarkan pada perbandingan intensitas warna larutan. Metode kolorometri


18

merupakan bagian dari metode spektroskopi sinar tampak berdasarkan panjang

gelombang sinar tampak pada suatu larutan berwarna. Reaksi kolorimetrik banyak

digunakan dalam metode spektrofotometri UV / VIS, karena mudah dilakukan,

cepat dan dapat digunakan di laboratorium secara rutin, dan biayanya rendah.

Beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam analisis spektrofotometri

antara lain waktu operasional dan panjang gelombang maksimum. Waktu

operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu pengukuran

dengan absorbansi larutan. Tujuan dari waktu operasional untuk mengetahui

waktu pengukuran yang stabil. Pada awal terjadi reaksi absorbansi akan terus

meningkat hingga pada waktu tertentu absorbansi yang dihasilkan stabil. Terdapat

kemungkinan senyawa mengalami kerusakan atau terurai sehingga menyebabkan

intensitas warna dan absorbansinya menurun seiring bertambahnya waktu. Oleh

karena hal tersebut perlu dilakukan pengukuran pada saat waktu operasional yang

tepat (Gandjar dan Rohman, 2007).

Panjang gelombang yang digunakan dalam pengukuran adalah panjang

gelombang yang memiliki absorbansi maksimal. Pada panjang gelombang

maksimal kepekaan yang dihasilkan tinggi. Oleh karena itu perubahan absorbansi

untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar (Gandjar dan Rohman,

2007).

I. Landasan Teori

Radikal bebas dapat menyebabkan kerusakan pada tubuh manusia

sehingga perlu suatu mekanisme pertahanan untuk menjaga agar tubuh tidak

mengalami kerusakan. Salah satu caranya dengan mekanisme antioksidan.


19

Antioksidan sintetik belakangan diketahui sebagai penyumbang kerusakan pada

tubuh, oleh karena itu antioksidan alami lebih baik untuk digunakan.

Tanaman jambu mete merupakan sumber antioksidan yang potensial.

Beberapa penelitian menyebutkan bahwa pada buah jambu mete memiliki

kandungan senyawa fenolik yang tinggi. Flavonoid merupakan salah satu senyawa

fenolik yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan. Buah jambu mete memiliki

kandungan flavonoid aglikon, yaitu kuersetin dan naringenin. Kuersetin (flavonol)

dan naringenin (flavonon) merupakan flavonoid yang tingkat kepolarannya

rendah, sehingga dapat diekstraksi menggunakan etil asetat.

Metode deoksiribosa merupakan metode pengukuruan aktivitas

antioksidan suatu sampel. Prinsipnya adalah pendegradasian deoksiribosa oleh

radikal hidroksi yang dihasilkan oleh sistem Fenton. Deoksiribosa yang

terdegradasi menghasilkan produk berupa malonaldehida yang ketika direaksikan

dengan TBA pada pH rendah akan menghasilkan kromogen berwarna merah

muda. Kromogen yang terbentuk kemudian dibaca serapannya menggunakan

spektrofotometer. Apabila ditambahkan suatu antioksidan ke dalam sistem ini

maka warna kromogen yang terbentuk akan semakin pudar karena antioksidan

akan menangkal radikal hidroksi sehingga tidak dapat mendegradasi deoksiribosa.

Metode Folin-Ciocalteu didasarkan pada reduksi asam fosfotungstat

dalam larutan alkali menjadi fosfotungstat biru. Senyawa berwarna ini diukur

serapannya dengan spektrofotometer. Serapan yang dihasilkan sebanding dengan

jumlah senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel. Kandungan fenolik total

dinyatakan dengan ekuivalen asam gallat sebagai pengkalibrasi.


20

J. Hipotesis

1. Fraksi etil asetat ekstrak etanol buah jambu mete memiliki kandungan senyawa

fenolik yang dapat diukur dengan metode Folin-Cioucalteu.

2. Fraksi etil asetat ekstrak etanol buah jambu mete memiliki aktivitas antioksidan

yang dapat diukur dengan metode deoksiribosa.


21

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini termasuk dalam jenis penelitian eksperimental murni

dengan rancangan acak sederhana.

B. Variabel

1. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah konsentrasi fraksi etil asetat

ekstrak etanol buah jambu mete.

2. Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah % IC.

3. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah waktu pemanenan,

umur buah yang dipanen, waktu inkubasi, suhu pada saat inkubasi.

4. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi cuaca

pada tempat tumbuh tanaman.

C. Definisi Operasional

1. Buah jambu mete adalah buah semu jambu mete yang sudah masak dari

tanaman jambu mete yang tumbuh di Desa Wisata Karangtengah, Mojolegi,

Imogiri, Bantul, Daerah Istimewa Yogyakarta.

2. Ekstrak etanol buah jambu mete adalah hasil dari proses maserasi serbuk

simplisia kering buah jambu mete dengan menggunakan pelarut etanol 70%.

3. Fraksi etil asetat adalah hasil fraksinasi dengan metode ekstraksi cair-cair dari

ekstrak etanol buah jambu mete menggunakan etil asetat, yang sebelumnya

ekstrak etanol buah jambu mete dilarutkan terlebih dahulu dalam akuades.


22

4. Persen inhibitiory concentration (%IC) adalah nilai yang menyatakan

kemampuan fraksi etil asetat ekstrak etanol buah jambu mete dalam

menangkap radikal bebas hidroksi.

5. Inhibitory concentration 25 (IC25) merupakan nilai konsentrasi fraksi etil

asetat yang menghasilkan penangkapan 25% radikal bebas hidroksi.

D. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan penelitian

Bahan – bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: buah

jambu mete dari Desa Wisata Karangtengah, Mojolegi, Imogiri, Bantul, Daerah

Istimewa Yogyakarta. Akuades (Laboratorium Kimia Organik Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta). Bahan – bahan kualitas teknis : etanol 70%, natrium

karbonat, asam etilendiamin tetrasetat (EDTA). Bahan – bahan kualitas pro

analisis E. Merck : metanol, etil asetat, dinatrium hidrogen fosfat, kalium

dihirogen fosfat, ferri klorida heksahidrat, larutan hidrogen peroksida 35%, asam

askorbat, asam tiobarbiturat (TBA), asam trikloroasetat (TCA). Bahan kualitas pro

analisis Sigma Chem Co. USA : asam galat, rutin, reagen Folin-Ciocalteu, 2-

deoxy-D-ribose.

2. Alat penelitian

Alat – alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah pisau stainless

steel, blender, neraca analitik, maserator / orbital shaker, corong Buchner, pompa

vaccum, vaccum rotary evaporator, waterbath, spektrofotometer UV-Vis

(Shimadzu), oven, vortex, micropipet 50 – 200 μl, 200 – 1000 μl, dan alat-alat

gelas yang lazim digunakan di laboratorium analisis (Pyrex).


23

E. Tatacara Penelitian

1. Determinasi tanaman

Determinasi tanaman jambu mete dilakukan di Laboratorium Kebun

Tanaman Obat, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

2. Pengumpulan buah jambu mete

Buah jambu mete yang sudah masak dikumpulkan dari tanaman jambu

mete yang tumbuh di kawasan Desa Wisata Karangtengah, Mojolegi, Imogiri,

Bantul, Daerah Istimewa Yogyakarta. Buah dipanen pada awal bulan November

2014. Pemanenan dilakukan pada pagi hari.

3. Preparasi buah jambu mete

Buah jambu mete dicuci menggunakan air mengalir. Buah jambu mete

yang telah dicuci kemudian dipotong tipis – tipis menggunakan pisau stainless

steel. Buah jambu mete yang telah dipotong selanjutnya ditimbang kemudian

ditata di atas tampah. Buah jambu mete selanjutnya dikeringkan dibawah sinar

matahari pada pagi hari pukul 08.00 – 11.00 dan sore hari pukul 15.00 – 17.00

dengan ditutup kain hitam. Pengeringan dilakukan hingga potongan buah mudah

dipatahkan. Hasil pengeringan kemudian diblender dan diayak menggunakan

ayakan 40 mess. Serbuk hasil pengayakan kemudian ditimbang.

Serbuk buah jambu mete ditimbang sebanyak 100 g, masukkan dalam

Erlenmeyer 500 mL, etanol 70% ditambahkan ke dalam Erlenmeyer hingga

semua bagian serbuk buah jambu terendam seluruhnya. Penambahan etanol

dilebihkan hingga lebih kurang 2 cm diatas permukaan serbuk buah jambu mete.

Erlenmeyer ditutup menggunakan alumunium foil. Proses maserasi dilakukan


24

dengan penggojogan selama 24 jam menggunakan orbital shaker pada suhu

ruang. Hasil dari proses maserasi disaring menggunakan kertas saring dengan

bantuan corong Buchner dan pompa vakum. Filtrat kemudian disimpan dalam

kondisi penyimpanan yang sesuai. Ampas dari proses penyaringan kemudian

dimaserasi kembali selama 24 jam. Proses maserasi dan penyaringan ini dilakukan

sebanyak tiga kali. Dilakukan replikasi sebanyak tiga kali.

Semua filtrat yang diperoleh kemudian disatukan dalam labu alas bulat

dan dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak

etanol kental buah jambu mete. Setelah dipekatkan ekstrak kental ini kemudian

dipanaskan pada waterbath hingga bebas penyari. Ekstrak kental ini kemudian

difraksinasi menggunakan metode ekstraksi cair – cair. Ekstrak kental dilarutkan

dalam akuades hangat, kemudian difraksinasi menggunakan etil asetat dengan

perbandingan akuades : etil asetat 1:1 v/v didalam corong pisah. Terbentuk dua

lapisan, yaitu lapisan air dan lapisan etil asetat. Lapisan etil asetat (bagian atas)

kemudian diambil dan ditampung dalam wadah. Lapisan air (bagian bawah)

difraksinasi kembali menggunakan etil asetat dengan perbandingan yang sama.

Tahapan ini diulang hingga tiga kali. Fraksi etil asetat kemudian dipekatkan

menggunakan vaccum rotary evaporator. Fraksi etil asetat pekat kemudian

dikeringkan menggunakan waterbath. Fraksi etil asetat yang diperoleh kemudian

disimpan dalam desikator.


25

4. Penetapan kandungan fenolik total

a. Pembuatan larutan asam galat

Asam galat ditimbang sebanyak 10 mg, kemudian dimasukkan ke

dalam gelas Beker dan dilarutkan dengan aquades : metanol p.a (1:1).

Larutan dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL, tambahkan akuades :

metanol p.a (1:1) sampai batas tanda. Larutan tersebut diambil sebanyak

0,4; 0,5 ; 0,6 ; 0,7 ; dan 0,8 mL, masukkan ke dalam labu takar 10 mL dan

tambahkan aquades : metanol p.a (1:1) sampai batas tanda, sehingga

diperoleh konsentrasi larutan baku asam galat sebesar 40; 50; 60; 70; dan 80

μg / mL.

b. Pembuatan larutan uji untuk penentuan kandungan fenolik total

Fraksi etil asetat ditimbang sebanyak 10 mg, larutkan menggunakan

aquades : metanol p.a ( 1:1 ) dalam gelas beker. Kemudian masukkan ke

dalam labu takar 10 mL dan ditambahkan aquades : metanol p.a ( 1:1 )

hingga batas tanda. Larutan diambil 2,0 mL, masukkan ke dalam labu takar

10 mL dan ditambahkan aquades : metanol p.a ( 1:1 ) hingga batas tanda.

Konsentrasi larutan uji sebesar 200,0 μg / mL.

c. Penentuan operating time

Larutan asam galat dengan konsentrasi 40; 60; dan 80 μg / mL

diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan sebanyak

2,0 mL pada masing – masing larutan, diamkan selama 5 menit.

Selanjutnya, ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M. Baca

absorbansi larutan setiap 5 menit dengan spektrofotometer visibel pada


26

panjang gelombang 750 nm selama 60 menit. Lakukan replikasi sebanyak 3

kali.

d. Penentuan panjang gelombang maksimum

Larutan asam galat dengan konsentrasi 40; 60; dan 80 μg / mL

diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan sebanyak 2

mL pada masing – masing larutan, diamkan selama 5 menit. Selanjutnya,

ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M. Diamkan selama

operating time yang telah didapat, kemudian dilakukan scanning panjang

gelombang maksimum dengan spektrofotometer visibel dengan panjang

gelombang 600-800 nm.

e. Pembuatan kurva baku asam galat

Larutan asam galat dengan konsentrasi 40; 50; 60; 70; dan 80 μg /

mL diambil sebanyak 0,5 mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan

sebanyak 2 mL, diamkan selama 5 menit. Selanjutnya, ditambahkan dengan

4,0 mL natrium karbonat 1 M, diamkan selama operating time yang telah

didapat. Baca absorbansinya pada panjang gelombang maksimum yang

telah diperoleh. Lakukan replikasi sebanyak 3 kali.

f. Estimasi kandungan fenolik total larutan uji

Larutan uji dengan konsentrasi 200,0 μg/mL diambil sebanyak 0,5

mL. Reagen Folin-Ciocalteu ditambahkan sebanyak 2 mL, diamkan selama

5 menit. Selanjutnya, ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M,

diamkan selama operating time yang telah didapat. Baca absorbansinya

pada panjang gelombang maksimum yang telah diperoleh.


27

5. Uji aktivitas antioksidan

a. Pembuatan larutan stok rutin

Rutin ditimbang sebanyak 10 mg. Masukkan ke dalam gelas beker

dan larutkan dengan akuades hangat. Larutan dimasukkan ke dalam labu

takar 100 mL dan tambahkan akuades hingga batas tanda sehingga

diperoleh konsentrasi larutan stok rutin sebesar 100 μg / mL.

b. Pembuatan larutan pembanding

Larutan stok rutin diambil sebanyak 0,5; 1; 1,5; 2,0; 2,5 mL.

Masukkan ke dalam labu takar 10 mL dan tambahkan aquades sampai

batas tanda, sehingga diperoleh konsentrasi larutan pembanding rutin

sebesar 5; 10; 15; 20; dan 25 μg / mL.

c. Pembuatan Reagen Fenton

1. Larutan FeCl3 1mM

Ferri klorida heksahidrat ditimbang sebanyak 13,5 mg,

masukkan ke dalam gelas bekker dan larutkan dengan aquades

secukupnya. Larutan dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL,

kemudian tambahkan aquades hingga batas tanda. Ambil 2,0 mL

larutan, masukkan ke dalam labu takar 10 mL, tambahkan aquades

hingga batas tanda.

2. Larutan EDTA 1mM

Serbuk EDTA ditimbang sebanyak 14,6 mg, masukkan ke

dalam gelas beker dan larutkan menggunakan aquades. Larutan

dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL, kemudian tambahkan aquades


28

hingga batas tanda. Ambil 2,0 mL larutan, masukkan ke dalam labu

takar 10 mL, tambahkan aquades hingga batas tanda.

3. Larutan asam askorbat 1 mM

Asam askorbat ditimbang sebanyak 17,6 mg, masukkan ke

dalam gelas beker dan larutkan menggunakan aquades. Larutan

dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL, kemudian tambahkan aquades

hingga batas tanda. Ambil 1,0 mL larutan, masukkan ke dalam labu

takar 10 mL, tambahkan aquades hingga batas tanda.

4. Larutan H2O2 20 mM

Sebanyak 0,078 mL larutan H2O2 35% diambil, kemudian di

masukkan ke dalam labu takar 10 mL dan tambahkan aquades hingga

batas tanda. Sebanyak 2,5 mL larutan tersebut diambil dan dimasukkan

ke dalam labu takar 10 mL. Tambahkan aquades hingga batas tanda.

d. Pembuatan larutan Deoksiribosa 2,5 mM

Deoksiribosa ditimbang sebanyak 20,9 mg, masukkan ke dalam

gelas beker dan larutkan menggunakan aquades. Larutan dimasukkan ke

dalam labu takar 10 mL dan tambahkan aquades hingga batas tanda.

Ambil 4,0 mL larutan, masukkan ke dalam labu takar 25 mL. Tambahkan

akuades hingga batas tanda.

e. Pembuatan larutan TCA 5%

TCA ditimbang sebanyak 2,5 g, masukkan ke dalam gelas beker

dan larutkan menggunakan akuades. Larutan dimasukkan ke dalam labu

takar 50 mL dan tambahkan akuades hingga batas tanda.


29

f. Pembuatan larutan TBA 1%

TBA ditimbang sebanyak 0,25 g, masukkan ke dalam gelas beker

dan larutkan menggunakan akuades secukupnya, proses pelarutan

dilakukan di atas hot plate hingga seluruh TBA larut. Larutan dimasukkan

ke dalam labu takar 25 mL dan tambahkan akuades hingga batas tanda.

g. Pembuatan larutan bufer fosfat

Na2HPO4 ditimbang sebanyak 1,4196 g, masukkan ke dalam gelas

beker dan larutkan menggunakan aquades. Larutan dimasukkan ke dalam

labu takar 500 mL, tambahkan aquades hingga batas tanda. Kemudian

timbang sebanyak 0,6805 gram KH2PO4, masukkan ke dalam gelas beker

dan larutkan menggunakan aquades. Larutan dimasukkan ke dalam labu

takar 250 mL dan tambahkan aquades hingga batas tanda. Masukkan

larutan Na2HPO4 secukupnya ke dalam gelas beker dan tambahkan larutan

KH2PO4 tetes demi tetes hingga pH larutan sebesar 7.

h. Larutan uji untuk aktivitas antioksidan

Fraksi etil asetat ditimbang sebanyak 50,0 mg, masukkan ke dalam

gelas beker dan larutkan dengan akuades hangat. Larutan kemudian

dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL dan ditambahkan akuades sampai

batas tanda. Larutan diambil sebanyak 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; dan 5,0 mL,

masukkan ke dalam labu takar 10 mL, kemuadian tambahkan akuades

sampai batas tanda. Konsentrasi larutan uji yang diperoleh sebesar 100;

200; 300; 400; dan 500 μg / mL.


30

i. Penentuan Operating time

Sebanyak 300 μL larutan FeCl3 1 mM, 300 μL larutan EDTA 1

mM, 300 μL larutan H2O2 20 mM, 300; μL larutan deoksiribosa 2,5 mM,

4500 μL bufer fosfat dan 300 μL larutan asam askorbat 1 mM dimasukkan

pada tabung reaksi bertutup. Larutan dicampur menggunakan vortex

selama lebih kurang 10 detik. Larutan kemudian diinkubasi selama 1 jam

pada suhu 37oC menggunakan oven. Setelah larutan diinkubasi, tambahkan

1 mL TCA 5% dan 1 mL TBA 1%. Larutan dicampur menggunakan

vortex selama lebih kurang 10 detik. Larutan tersebut dipanaskan pada

waterbath dengan suhu 80oC selama 30 menit. Dinginkan dengan bantuan

air mengalir selama 5 menit. Baca absorbansinya setiap 5 menit pada

panjang gelombang maksimum teoritis 532 nm selama 1 jam.

j. Penentuan panjang gelombang maksimum

Pada 3 tabung reaksi bertutup, masukkan sebanyak 300 μL larutan

FeCl3 1 mM, 300 μL larutan EDTA 1 mM, 300 μL larutan H2O2 20 mM,

200; 300; 400 μL larutan deoksiribosa 2,5 mM, 4600; 4500; 4400 μL bufer

fosfat dan 300 μL larutan asam askorbat 1 mM pada masing – masing

tabung reaksi. Larutan dicampur menggunakan vortex selama lebih kurang

10 detik. Larutan kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37oC

menggunakan oven. Setelah larutan diinkubasi, tambahkan 1 mL TCA 5%

dan 1 mL TBA 1%. Larutan dicampur menggunakan vortex selama lebih

kurang 10 detik. Larutan tersebut dipanaskan pada waterbath dengan suhu

80oC selama 30 menit. Dinginkan dengan bantuan air mengalir selama 5


31

menit. Diamkan selama operating time yang telah didapat. Lakukan

scanning pada panjang gelombang 400 – 600 nm.

k. Pengujian aktivitas penangkapan radikal hidroksil

1. Kontrol negatif

Sebanyak 300 μL larutan FeCl3 1 mM, 300 μL larutan EDTA 1

mM, 300 μL larutan H2O2 20 mM, 300 μL larutan deoksiribosa 2,5

mM, 1 mL akuades, 3500 μL bufer fosfat dan 300 μL larutan asam

askorbat 1 mM dimasukkan ke dalam tabung reaksi bertutup. Larutan

dicampur menggunakan vortex selama lebih kurang 10 detik. Larutan

kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37oC menggunakan oven.

Setelah larutan diinkubasi, tambahkan 1 mL TCA 5% dan 1 mL TBA

1%. Larutan dicampur menggunakan vortex selama lebih kurang 10

detik. Larutan tersebut dipanaskan pada waterbath dengan suhu 80oC

selama 30 menit. Dinginkan dengan bantuan air mengalir selama 5

menit. Diamkan selama operating time. Ukur serapan pada panjang

gelombang maksimum yang telah ditetapkan sebelumnya.

2. Larutan pembanding rutin

Pada 5 tabung reaksi bertutup, masukkan sebanyak 300 μL

larutan FeCl3 1 mM, 300 μL larutan EDTA 1 mM, 300 μL larutan H2O2

20 mM, 300 μL larutan deoksiribosa 2,5 mM, 1 mL larutan pembanding

rutin dengan konsentrasi 5; 10; 15; 20; dan 25 μg / mL, 3500 μL bufer

fosfat dan 300 μL larutan asam askorbat 1 mM pada masing – masing

tabung reaksi. Larutan dicampur menggunakan vortex selama lebih


32

kurang 10 detik. Larutan kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu

37oC menggunakan oven. Setelah larutan diinkubasi, tambahkan 1 mL

TCA 5% dan 1 mL TBA 1%. Larutan dicampur menggunakan vortex

selama lebih kurang 10 detik. Larutan tersebut dipanaskan pada

waterbath dengan suhu 80oC selama 30 menit. Dinginkan dengan

bantuan air mengalir selama 5 menit. Diamkan selama operating time.

Ukur serapan pada panjang gelombang maksimum yang telah

ditetapkan sebelumnya. Persen IC dihitung dari hasil absorbansi yang

diperoleh. Dibuat persamaan regresi linier antara konsentrasi larutan

pembanding rutin vs % IC untuk menentukan nilai IC25. Dilakukan

replikasi sebanyak 3 kali.

3. Larutan uji

Pada 5 tabung reaksi bertutup, dimasukkan sebanyak 300 μL

larutan FeCl3 1 mM, 300 μL larutan EDTA 1 mM, 300 μL larutan H2O2

20 mM, 300 μL larutan deoksiribosa 2,5 mM, 1 mL larutan uji dengan

konsentrasi 100; 200; 300; 400; dan 500 μg / mL, 3500 μL bufer fosfat

dan 300 μL larutan asam askorbat 1 mM pada masing – masing tabung

reaksi. Larutan dicampur menggunakan vortex selama lebih kurang 10

detik. Larutan kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37oC

menggunakan oven. Setelah larutan diinkubasi, tambahkan 1 mL TCA

5% dan 1 mL TBA 1%. Larutan dicampur menggunakan vortex selama

lebih kurang 10 detik. Larutan tersebut dipanaskan pada waterbath

dengan suhu 80oC selama 30 menit. Dinginkan dengan bantuan air


33

mengalir selama 5 menit. Diamkan selama operating time. Ukur

serapan pada panjang gelombang maksimum yang telah ditetapkan

sebelumnya. Dari hasil absorbansi yang diperoleh, hitung % IC dan

dibuat persamaan regresi linier yang merupakan hubungan antara

konsentrasi larutan pembanding rutin vs %IC untuk menentukan nilai

IC25. Lakukan replikasi sebanyak 3 kali.

F. Analisis Data

1. Penetapan kandungan fenolik total

Kandungan fenolik total dinyatakan dalam nilai mg ekivalen asam galat

per gram fraksi etil astat. Nilai tersebut didapatkan dari analisis regresi linier

dengan data kurva baku asam galat, sehingga akan diperoleh kandungan

fenolik total dengan perhitungan menggunakan rumus :

X = kadar fenolik yang diperoleh dari persamaan kurva baku (mg / mL)

v = volume akhir larutan dikali faktor pengenceran (mL)

m = bobot fraksi (gram)

2. Aktifitas penangkapan radikal hidroksil

Aktivitas penangkapan radikal hidroksil dinyatakan dalam % IC, yang

dapat dihitung dengan rumus :

A kontrol = Absorbansi campuran reaksi kontrol negatif

A sampel = Absorbansi campuran reaksi kontrol positif atau larutan uji


34

Nilai IC25 ditetapkan menggunakan persamaan regresi linier, dengan

sumbu x adalah konsentrasi larutan pembanding rutin atau larutan uji fraksi etil

asetat buah jambu mete dan sumbu y adalah % IC.


35

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman bertujuan untuk memastikan kebenaran tanaman

yang digunakan sebagai sampel. Kebenaran bahan merupakan salah satu syarat

utama dalam penelitian. Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Kebun

Tanaman Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta dengan

acuan van Steenis (1981). Hasil determinasi menunjukkan tanaman yang

digunakan adalah Anacardium occidentale L. (Lampiran 1).

B. Hasil Pengumpulan Tanaman

Buah jambu mete dikumpulkan dari tanaman jambu mete yang tumbuh

di kawasan Desa Wisata Karangtengah, Mojolegi, Imogiri, Bantul, Daerah

Istimewa Yogyakarta. Tanaman jambu mete dapat dipanen untuk pertama kali

pada umur 3-4 tahun. Pada dasarnya masa panen buah jambu mete berlangsung

selama 4 bulan, yaitu sekitar bulan November sampai bulan Februari tahun

berikutnya. Pada penelitian ini buah jambu mete dipanen pada awal bulan

November 2014. Buah yang dipanen adalah buah yang sudah masak. Ciri – ciri

buah yang sudah masak dan dapat dipanen menurut Prihatman (2000) adalah :

1. Warna kulit buah semu menjadi kuning, oranye, atau merah tergantung

pada jenisnya.

2. Ukuran buah semu lebih besar dari buah sejati.

3. Tekstur daging semu lunak, rasanya asam agak manis, berair, dan aroma

buahnya mirip aroma stroberi.


36

4. Warna kulit bijinya menjadi putih keabu-abuan dan mengkilat.

Buah hasil panen (Gambar 2) memiliki ciri-ciri seperti yang disebutkan

oleh Prihatman (2000). Buah jambu mete yang dipanen berwarna kuning dan

merah. Ukuran buah semu lebih besar daripada buah sejati. Tekstur buah semu

lunak, berair, rasanya asam, dan beraroma khas. Bagian buah yang digunakan

pada penelitian ini adalah buah semu, tanpa buah sejati (mete).

Gambar 2. Buah jambu mete

Pemanenan dilakukan pada pagi hari sekitar pukul 06.00 hingga 07.00

WIB. Kondisi hari dan cuaca sangat mempengaruhi kualitas dari produk yang

akan dipanen. Menurut Pallipane and Rolle (2008) pemanenan paling baik

dilakukan pada kondisi tersejuk, yaitu pagi hari atau malam hari ketika aktivitas

fisiologis tanaman rendah.


37

C. Hasil Preparasi Buah Jambu Mete

1. Hasil pembuatan serbuk simplisia

Sebanyak lebih kurang 3 kg buah jambu mete segar yang telah dicuci,

dipotong tipis-tipis menggunakan pisau stainless steel. Pemotongan dengan pisau

stainless steel karena bahan dari pisau ini bersifat inert, tahan terhadap korosi,

mudah dibersihkan dan disterilkan (Newson, 2003). Buah yang telah dipotong

dikeringkan di bawah sinar matahari. Tujuan pengeringan adalah untuk

menginaktivasi enzim yang ada dalam buah jambu mete. Pengeringan dilakukan

dengan menutup buah jambu mete menggunakan kain hitam. Pengeringan dengan

ditutup kain hitam bertujuan untuk menghindari kontak langsung antara sampel

dengan sinar matahari. Adanya kontak langsung dengan sinar matahari dapat

merusak senyawa yang terkandung dalam sampel.

Buah jambu mete dikeringkan hingga mudah dipatahkan. Buah jambu

mete yang sudah kering kemudian dihaluskan dengan blender dan diayak

menggunakan ayakan mess 40. Hasil dari proses ini didapatkan lebih kurang 1 kg

serbuk halus. Pada dasarnya proses pengeringan bertujuan untuk menginaktivasi

enzim polifenol oksidase (PPO). Enzim ini dapat menyebabkan reaksi oksidasi.

Proses oksidasi ini dapat menyebabkan senyawa fenolik kehilangan gugus

hidroksi yang berperan dalam aktivitas antioksidan. Reaksi oksidasi oleh polifenol

oksidase (Gambar 3) ini biasanya dimulai dengan adanya oksidasi enzimatik pada

senyawa monofenol ke o-difenol dan o-difenol ke kuinon. Adanya oksidasi

tersebut menyebabkan polimerisasi non-enzimatik yang mengarah pada

pembentukan pigmen berwarna coklat (He, Luo, and Chen, 2008). Pada proses


38

pengeringan ini terjadi perubahan warna buah jambu mete menjadi coklat. Hal ini

menunjukkan masih ada enzim polifenol oksidase yang belum terinaktivasi dan

bereaksi dengan senyawa fenolik yang terdapat dalam buah jambu mete.

Gambar 3. Reaksi oksidasi polifenol oleh enzim polifenol oksidase (PPO)

2. Hasil proses ekstraksi

Ekstraksi, dalam istilah farmasi, merupakan proses pemisahan

komponen aktif dari jaringan tumbuhan atau hewan menggunakan pelarut yang

selektif. Pada penelitian ini metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi.

Maserasi merupakan proses dimana serbuk simplisia ditempatkan dalam wadah

bertutup dengan pelarut dan didiamkan pada suhu kamar dengan agitasi (Handa,

2008). Maserasi merupakan salah satu cara yang sering digunakan dalam

mengektraksi tanaman. Metode ini tidak menggunakan pemanasan sehingga dapat

meminimalisir kerusakan senyawa saat proses ekstraksi berlangsung.

Serbuk halus simplisia buah jambu mete ditimbang sebanyak 100

gram, dimasukkan dalam Erlenmeyer 500 mL. Serbuk halus memiliki keunggulan

yaitu meningkatkan keefektifan proses ekstraksi karena luas permukaan kontak

antara matriks tanaman dan pelarut semakin besar sehingga difusi bahan kimia

dari matriks tanaman juga semakin besar (Wang and Weller, 2006). Pelarut yang

digunakan adalah etanol 70%. Dasar pemilihan pelarut ini mempertimbangkan

beberapa hal seperti kekuatan pelarut/selektifitas, titik didih, dan biaya. Senyawa


39

fenolik dapat diekstraksi dengan pelarut polar, salah satunya etanol. Etanol juga

memiliki titik didih yang cukup rendah sehingga mudah diuapkan. Dari segi

ekonomi etanol merupakan pelarut yang cukup murah.

Maserasi dilakukan selama 3 hari. Setiap harinya dilakukan remaserasi

dengan mengganti pelarut yang digunakan dengan pelarut yang baru. Remaserasi

ini bertujuan untuk menarik lebih banyak senyawa dari sampel dan juga

menghindari kejenuhan pelarut dalam sistem. Ekstrak yang diperoleh selanjutnya

dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator. Prinsip pemekatan dengan

vaccum rotary evaporator adalah menguapkan pelarut dibawah titik didihnya

seiring dengan penurunan tekanan dalam sistem. Hal ini memberikan keuntungan

yaitu menghindari kerusakan terhadap senyawa hasil ekstraksi. Hasil pemekatan

kemudian diletakkan diatas waterbath dan dipanaskan hingga menjadi ekstrak

kental bebas penyari. Ekstraksi ini dilakukan sebanyak 3 kali replikasi. Hasil rata-

rata rendemen ekstrak yang diperoleh sebesar 34,0 %.

3. Hasil proses fraksinasi

Ekstrak yang diperoleh kemudian difraksinasi dengan metode ekstraksi

cair – cair. Prinsip metode ekstraksi cair – cair adalah partisi menggunakan dua

pelarut yang tidak bercampur (Wells, 2003). Seluruh ekstrak yang diperoleh pada

tiap replikasi, masing – masing dilarutkan dengan air hangat sebanyak 100 mL.

Kemudian larutan ekstrak ini dimasukkan ke dalam corong pisah. Etil asetat

ditambahkan sebanyak 100 mL ke dalam corong pisah sehingga perbandingan

antara air : etil asetat dalam corong adalah 1 : 1. Terdapat dua fase yang terbentuk

dari tahap ini. Fase etil asetat berada pada bagian atas dan fase air berada pada


40

bagian bawah dalam corong pisah. Hal ini disebabkan berat jenis etil asetat lebih

kecil (0,898) dibandingkan berat jenis air (0,996). Fraksi etil asetat ditampung

dalam wadah. Kemudian fase air diekstraksi kembali menggunakan etil asetat

baru. Hal ini dilakukan sebanyak 3 kali. Semakin banyak ekstraksi cair – cair

dilakukan maka efektifitas semakin tinggi (Wells, 2003). Hasil rata-rata persen

rendemen fraksi yang diperoleh sebesar 0,6 %.

Pemilihan etil asetat sebagai pelarut yang digunakan pada proses

ekstraksi cair-cair didasarkan pada penelitian sebelumnya. Dalam penelitian yang

dilakukan oleh Adou et al. (2012) disimpulkan bahwa jus buah jambu mete

mengandung senyawa fenolik dan flavonoid yang tinggi. Penelitian Adou et al.

(2012) menunjukkan hasil bahwa jus buah jambu mete mengandung flavonoid

aglikon, yaitu kuersetin (flavonol) dan naringenin (flavonon). Etil asetat

merupakan pelarut organik yang dapat menarik senyawa – senyawa flavonoid

dalam sampel. Senyawa-senyawa flavonoid yang bersifat kurang polar seperti

isoflavon, flavanon, methylated flavones, dan flavonol dapat diekstraksi

menggunakan etil asetat (Andersen and Markham, 2006).

D. Hasil Uji Kualitatif

1. Hasil uji kualitatif senyawa fenolik

Uji kualitatif senyawa fenolik didasarkan pada reduksi asam

fosfotungstat dalam larutan alkali menjadi fosfotungstat biru. Pada mulanya

senyawa fenol akan mengalami oksidasi oleh reagen Folin Ciocalteu yang berisi

asam fosfotungstat dan asam fosfomolibdat. Setelah oksidasi senyawa fenol,

campuran akan tereduksi menjadi tungsten biru dan molibdenum. Perubahan


41

menjadi warna biru inilah yang digunakan sebagai indikator keberadaan senyawa

fenolik dalam sampel. Hasil dari uji kualitatif fraksi etil asetat buah jambu mete

(Gambar 4) menunjukkan perubahan warna menjadi biru, sama seperti kontrol

positif. Hal ini berarti dalam fraksi etil asetat buah jambu mete mengandung

senyawa – senyawa fenolik.

Gambar 4. Hasil uji kualitatif senyawa fenolik pada fraksi etil asetat buah

jambu mete

Keterangan Gambar 4:

A = kontrol negatif (reagen Folin-Cioucalteu, dan natrium karbonat)

B = kontrol positif (asam galat, reagen Folin-Cioucalteu, dan natrium

karbonat)

C = larutan uji (fraksi etil asetat buah jambu mete, reagen Folin-

Cioucalteu, dan natrium karbonat)

D = larutan asam galat dalam metanol : air (1:1)

E = larutan fraksi etil asetat buah jambu mete dalam metanol : air (1:1)

2. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan

Uji kualitatif ini bertujuan untuk melihat ada atau tidaknya aktivitas

antioksidan pada fraksi etil asetat buah jambu mete. Uji ini didasarkan pada

A B C D E


42

metode deoksiribosa. Pada prinsipnya reaksi Fenton akan menghasilkan suatu

radikal hidroksi. Radikal hidroksi ini akan mendegradasi senyawa deoksiribosa

menjadi malonaldehida (MDA). Dengan suatu pemanasan, produk degradasi

berupa malonaldehida ini akan membentuk kompleks dengan asam tiobarbiturat

(TBA). Reaksi pembentukan kompleks MDA – TBA (Gambar 5) ini akan

menghasilkan kromogen berwarna merah muda.

Apabila suatu senyawa memiliki aktivitas sebagai antioksidan

ditambahkan kedalam campuran, maka intensitas warna yang dihasilkan dari

kompleks MDA – TBA akan semakain memudar. Hal ini disebabkan karena

radikal hidroksi akan berikatan dengan senyawa antioksidan sehingga degradasi

deoksiribosa akan berkurang dan MDA yang terbentuk semakin sedikit.

Gambar 5. Reaksi pembentukan kromogen MDA-TBA


43

Gambar 6. Hasil uji kualitatif aktivitas antioksidan pada fraksi etil asetat

buah jambu mete

Keterangan Gambar 6 :

A = kontrol negatif (tanpa penambahan senyawa antioksidan)

B = kontrol positif (rutin)

C = larutan uji (fraksi etil asetat buah jambu mete)

Hasil uji kualitatif fraksi etil asetat buah jambu mete menunjukkan

hasil positif (Gambar 6). Intensitas warna yang terbentuk pada sampel uji lebih

pudar apabila dibandingkan dengan kontrol negatif. Hal ini berarti fraksi etil

asetat buah jambu mete memiliki aktivitas sebagai antioksidan.

E. Hasil Optimasi Metode Uji Fenolik Total

1. Penentuan Operating time

Penentuan operating time bertujuan untuk mendapatkan waktu dimana

reaksi antara sampel dan pereaksi berada pada kondisi optimum. Keadaan reaksi

yang optimum ditunjukkan dengan nilai absorbansi yang relatif stabil. Pada saat

awal terjadi reaksi, absorbansi senyawa yang berwarna akan terus meningkat

hingga pada waktu tertentu akan diperoleh absorbansi yang stabil. Namun

A B

C


44

semakin lama waktu pengukuran, ada kemungkinan senyawa berwarna tersebut

akan mengalami kerusakan sehingga menyebabkan intensitas warnanya menurun

dan absorbansinya juga menurun (Gandjar dan Rohman, 2007).

Gambar 7. Grafik operating time (replikasi 1) untuk penetapan fenolik

total

Penentuan operating time pada metode Folin – Ciocalteu untuk

penetapan kandungan fenolik total ini dilakukan selama 60 menit. Setiap 5 menit

absorbansi larutan diukur pada panjang gelombang teoritis (750 nm). Absorbansi

yang diperoleh selama 60 menit kemudian dilihat pada waktu keberapa

menghasilkan absorbansi yang cenderung stabil atau selisihnya kecil. Gambar 7

menunjukkan grafik operating time pada replikasi 1. Operating time yang didapat

untuk penetapan kandungan fenolik total adalah 35 menit. Pada waktu tersebut

diperoleh nilai absorbansi yang stabil.

2. Penentuan panjang gelombang maksimum

Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk

mendapatkan nilai serapan maksimum dari hasil reaksi antara asam galat dengan

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65

Ab

sorb

ansi

Waktu (menit)

Grafik Operating Time Untuk Penetapan Fenolik Total

40 μg / mL

60 μg / mL

80 μg / mL


45

reagen Folin-Cioucalteu. Pengukuran suatu analit harus pada panjang gelombang

maksimum karena pada panjang gelombang maksimum kepekaannya tinggi,

sehingga perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling

besar (Gandjar dan Rohman, 2007). Pada penentuan panjang gelombang

maksimum digunakan tiga tingkat konsentrasi yaitu rendah (40 µg/mL), sedang

(60 µg/mL), dan tinggi (80 µg/mL). Tujuan dilakukan scanning pada tiga tingkat

konsentrasi yang berbeda adalah untuk merepresentasikan panjang gelombang

maksimum pada tiap konsentrasi. Pengukuran lambda maksimum dilakukan pada

rentang panjang gelombang antara 600 – 800 nm.

Tabel I. Hasil scanning panjang gelombang maksimum untuk penentuan

fenolik total

Konsentrasi

Larutan Asam

Galat

Lambda

maksimum hasil

scanning

Lambda

maksimum yang

digunakan

Lambda

maksimum

teoritis

40 µg/mL 739 nm

739 nm 750 nm 60 µg/mL 739 nm

80 µg/mL 738 nm

Panjang gelombang maksimum yang digunakan adalah 739 nm. Hasil

yang diperoleh dari hasil scanning panjang gelombang maksimum menunjukkan

hasil yang berbeda dengan lambda maksimum teoritis (Tabel I). Hal ini dapat

disebabkan oleh beberapa hal antara lain jenis pelarut, pH larutan, suhu,

konsentrasi tinggi, dan zat – zat pengganggu (Gandjar dan Rohman, 2007).

F. Penetapan Kandungan Fenolik Total

Senyawa fenolik termasuk senyawa fenol sederhana, asam fenolat,

tanin, flavonoid, lignan, dan lignin merupakan metabolit sekunder yang banyak

terkandung dalam tanaman. Senyawa ini memiliki peran antara lain sebagai

pigmentasi, antioksidan, dan pelindung terhadap sinar ultraviolet (Blainski et al.,


46

2013). Berdasarkan pada peran yang cukup penting maka keberadaan senyawa

fenolik dalam suatu tanaman perlu untuk dikuantifikasi.

Banyak metode yang digunakan untuk mengkuantifikasi senyawa

fenolik. Salah satu metode yang sering digunakan adalah kuantifikasi dengan

spektrofotometri. Reaksi kolorimetri banyak digunakan dalam metode

spektrofotometri UV/VIS. Metode ini akan mengukur konsentrasi senyawa

fenolik secara total dalam ekstrak tumbuhan. Pada prinsipnya, senyawa fenolik

dalam ekstrak tumbuhan akan bereaksi dengan reagen redoks tertentu (Folin

Ciocalteu-reagen) untuk membentuk kompleks biru yang dapat diukur dengan

cahaya tampak. Reaksi pembentukan kromofor biru didasari oleh kompleks

fosfotungstat-fosfomolibdat. Pada reaksi ini serapan yang dihasilkan bergantung

pada larutan alkali dan konsentrasi senyawa fenolik (Blainski et al., 2013).

Gambar 8. Struktur asam galat

Penetapan kandungan fenolik total dimulai dengan membuat kurva

baku asam galat. Asam galat (Gambar 8) digunakan sebagai standar kurva baku

karena asam galat merupakan senyawa polifenol yang dapat menggambarkan

senyawa fenolik dalam suatu sampel. Pembuatan kurva baku ini dilakukan

sebanyak tiga kali replikasi. Kurva baku ini menghasilkan suatu persamaan

regresi linier yang digunakan dalam menentukan jumlah kandungan fenolik total

dalam sampel. Tidak semua persamaan regresi linier digunakan dalam


47

menentukan kandungan fenolik total. Persamaan regresi dengan linieritas terbaik

(nilai R mendekati 1) akan digunakan untuk menentukan kandungan fenolik total.

Tabel II menunjukkan hasil pengukuran absorbansi kurva baku asam galat.

Tabel II. Hasil pengukuran absorbansi kurva baku asam galat.

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Konsentrasi Absorbansi Konsentrasi Absorbansi Konsentrasi Absorbansi

40,4 μg/mL 0,3108 40,8 μg/mL 0,3674 40,4 μg/mL 0,3093

50,5 μg/mL 0,3931 51,0 μg/mL 0,4404 50,5 μg/mL 0,3889

60,6 μg/mL 0,4652 61,2 μg/mL 0,5026 60,6 μg/mL 0,4553

70,7 μg/mL 0,5665 71,4 μg/mL 0,5731 70,7 μg/mL 0,5253

80,8 μg/mL 0,6459 81,6 μg/mL 0,6559 80,8 μg/mL 0,5916

y = 0,0084x – 0,0299

r = 0,9988

y = 0,007x + 0,0821

r = 0,9989

y = 0,0069x + 0,0335

r = 0,9994

Gambar 9. Kurva baku asam galat untuk penetapan kandungan fenolik total

Persamaan yang digunakan dalam menentukan kandungan fenolik total

adalah persamaan regresi dari replikasi ketiga, yaitu y = 0,0069x + 0,0335 dengan

linieritas sebesar 0,9994. Nilai linieritas menunjukkan korelasi antara konsentrasi

y = 0.0069x + 0.0335 R = 0.9994

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0 20 40 60 80 100

Ab

sorb

ansi

Konsentrasi (μg/mL)

Grafik Kurva Baku Asam Galat


48

dan absorbansi yang dihasilkan. Semakin baik nilai linieritas (nilai R sama dengan

1 atau mendekati 1) maka korelasi juga semakin baik.

Tabel III. Hasil penetapan kandungan fenolik total fraksi etil asetat buah

jambu mete

Konsentrasi Absorbansi Kandungan

fenolik total

Rata -

rata

%

CV

Replikasi 1 202 μg/mL 0,4808 320,921 339,3 ±

13,1

3,8

% Replikasi 2 202 μg/mL 0,5219 350,409

Replikasi 3 204 μg/mL 0,5165 346,535

Tabel III menunjukkan hasil pengukuran sampel uji untuk penentuan

kandungan fenolik total. Absorbansi sampel yang diperoleh kemudian

dimasukkan ke dalam persamaan regresi linier yang telah didapatkan. Hasil

perhitungan menunjukkan bahwa fraksi etil asetat buah jambu mete memiliki nilai

kandungan fenolik total sebesar 339,3 ± 13,1 mg ekivalen asam galat. Penelitian

yang dilakukan oleh Adou et al. (2012) menyatakan kandungan senyawa fenolik

pada jus buah jambu mete sebesar 1653,8 ± 2.3 sampai 2374,2 ± 5.4 mg ekivalen

asam galat. Apabila dibandingkan antara penelitian ini dengan penelitian yang

dilakukan oleh Adou et al. (2012), hasil senyawa fenolik pada penelitian ini

tergolong rendah. Hal ini dikarenakan adanya proses oksidasi oleh enzim

polifenol oksidase saat proses pengeringan, sehingga menyebabkan kerusakan

pada senyawa polofenol yang ada pada buah jambu mete.

G. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan

1. Penentuan Operating time

Pada umumnya penentuan operating time dilakukan jika pengukuran

yang dilakukan merupakan hasil reaksi atau pembentukan warna. Operating time

merupakan waktu yang dibutuhkan suatu senyawa untuk bereaksi dengan


49

senyawa lain hingga terbentuk senyawa produk yang stabil. Produk yang stabil ini

dapat dilihat dari hasil pembacaan absorbansi yang menunjukkan nilai absorbansi

yang tetap atau selisihnya kecil.

Tabel IV. Hasil penentuan operating time uji aktivitas antioksidan

Penentuan operating time metode deoksiribosa untuk menentukan

aktivitas antioksidan dilakukan selama 60 menit. Pengukuran absorbansi

dilakukan setiap 5 menit sekali pada panjang gelombang teoritis, yaitu 532 nm.

Operating time ditentukan dengan melihat pada menit keberapa absorbansi yang

dihasilkan stabil. Hasil menunjukkan bahwa pada waktu 20 menit absorbansi yang

dihasilkan stabil (Tabel IV).

2. Penentuan panjang gelombang maksimum

Penentuan panjang gelombang maksimum perlu dilakukan karena pada

panjang gelombang maksimum serapan yang dihasilkan suatu sampel juga

maksimum. Pada panjang gelombang maksimum perubahan konsentrasi akan

menghasilkan selisih serapan yang paling besar karena pada panjang gelombang

Menit ke - Absorbansi

0 0,6267

5 0,6278

10 0,6298

15 0,6295

20 0,6313

25 0,6310

30 0,6318

35 0,6327

40 0,6344

45 0,6327

50 0,6339

55 0,6353

60 0,6360


50

maksimum memiliki kepekaan yang paling tinggi. Pada penelitian ini dilakukan

tiga variasi penambahan larutan deoksiribosa dalam penentuan lambda

maksimum. Tiga variasi penambahan larutan deoksiribosa, yaitu sebesar 200 µL,

300 µL, dan 400 µL. Variasi penambahan larutan deoksiribosa akan menyebabkan

konsentrasi larutan deoksiribosa dalam sistem berbeda – beda sehingga

diharapkan dapat merepresentasikan panjang gelombang maksimum pada tiap

tingkat konsentrasi.

Tabel V menunjukkan hasil scanning panjang gelombang maksimum

untuk uji aktivitas antioksidan. Penentuan panjang gelombang maksimum

dilakukan pada rentang panjang gelombang 400 – 600 nm. Panjang gelombang

maksimum yang digunakan dalam penelitian ini adalah 530,5 nm. Hasil scanning

ini tidak jauh berbeda dengan panjang gelombang maksimum teoritis.

Tabel V. Hasil scanning panjang gelombang maksimum untuk uji aktivitas

antioksidan

Penambahan

larutan

deoksiribosa

Lambda

maksimum hasil

scanning

Lambda

maksimum yang

digunakan

Lambda

maksimum teoritis

200 µL 530,5 nm

530,5 nm 532 nm 300 µL 530,5 nm

400 µL 531,0 nm

H. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan

Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode deoksiribosa. Pada

prinsipnya metode ini akan menghasilkan suatu radikal hidroksi dari reaksi Fenton

yang melibatkan ferri klorida, EDTA, dan H2O2. Radikal hidroksi yang terbentuk

akan mendegradasi deoksiribosa menjadi malonaldehida pada pH 7. Hal ini juga

dipercepat dengan penambahan vitamin C. Hasil degradasi MDA akan

membentuk suatu kromogen berwarna merah muda bila bereaksi dengan TBA.


51

Pembentukan kromogen ini dipercepat dengan adanya pemanasan. Kromogen

inilah yang kemudian diukur absorbansinya dan digunakan dalam menentukan

aktivitas antioksidan. Berikut persamaan reaksi yang terjadi :

Fe2+- EDTA + O2 Fe3+-EDTA + O2-

Fe3+-EDTA + ascorbate Fe2+- EDTA + oxidized ascorbate

Fe2+- EDTA + H2O2OH- +

.OH + Fe3+-EDTA

.OH + deoxyribose MDA

2TBA + MDA chromogen

Proses pembentukan kromogen berwarna merah muda diawali dengan

mereaksikan campuran yang telah diinkubasi dengan asam trikloroasetat dan asam

tiobarbiturat. Penambahan TCA akan menurunkan kecepatan degradasi

deoksiribosa oleh radikal hidroksi. Hal ini dapat terjadi karena pada suasana asam

oksidasi vitamin C akan terhambat. Akibatnya reduksi Fe3+

menjadi Fe2+

terhambat sehingga pembentukan radikal hidroksi juga akan terhambat. Suasana

asam yang ditimbulkan oleh TCA akan mengkatalis pembentukan kompleks

MDA-TBA.

Intensitas warna yang terbentuk akan berkurang seiring dengan adanya

senyawa antioksidan yang ditambahkan ke dalam sistem. Menurut penelitian

Adou et al. (2012) buah jambu mete segar memiliki kandungan flavonoid yang

cukup tinggi sehingga dapat memberikan aktivitas antioksidan. Aktivitas

antioksidan dinyatakan dalam IC25. Nilai IC25 merupakan konsentrasi sampel yang

mampu menghambat 25% radikal bebas. Nilai ini diperoleh dengan menggunakan

persamaan regresi linier dimana nilai y = 25. Tabel VI menunjukkan hasil


52

persamaan regresi linier yang didapat dari 3 kali replikasi pengukuran fraksi etil

asetat buah jambu mete.

Tabel VI. Hasil pengukuran absorbansi fraksi etil asetat buah jambu mete

Replikasi Konsentrasi

(μg/mL)

Absorbansi

Kontrol

Negatif

Absorbansi

Sampel % IC

Persamaan regresi

linier

Replikasi

1

100,8

0,6378

0,6211 2,618

y = 0,1127x – 8,8601

r = 0,9946

201,6 0,5497 13,813

302,4 0,4684 26,560

403,2 0,4242 33,490

504,0 0,3217 49,561

Replikasi

2

100,6

0,4524

0,3744 17,241

y = 0,0501x + 11,967

r = 0,9950

201,2 0,3553 21,463

301,8 0,3309 26,857

402,4 0,3013 33,400

503,0 0,2874 36,472

Replikasi

3

100,2

0,7128

0,6112 14,254

y = 0,0626x + 6,4899

r = 0,9905

200,4 0,5858 17,817

300,6 0,5444 23,625

400,8 0,4808 32,548

501,0 0,4403 38,230

Tabel VII. Hasil aktivitas antioksidan fraksi etil asetat buah jambu mete

IC25 (μg/mL) Rata - rata % CV

Replikasi 1 300,445

285,4 ± 17,9 6,3 % Replikasi 2 260,139

Replikasi 3 295,689

Parameter IC25 digunakan pada penelitian ini karena nilai % IC tidak

mencapai 50%. Pada umumnya parameter aktivitas antioksidan yang sering

digunakan adalah IC50. Parameter IC50 dapat menggambarkan setengah dari

kekuatan maksimum. Parameter ini lebih baik dihitung secara intrapolasi.

Perhitungan secara intrapolasi lebih akurat dibandingkan ekstrapolasi. Persen IC

yang diperoleh tidak mencapai 50% sehingga bila dipaksakan perhitungan

parameter IC50 harus dilakukan secara ekstrapolasi dimana keakuratannya kurang


53

baik. Oleh karena itu untuk menjaga perhitungan tetap akurat maka parameter

yang digunakan adalah IC25 dan dihitung secara intrapolasi.

Aktivitas antioksidan kemudian ditetapkan menggunakan persamaan

regresi linier yang diperoleh pada tiap replikasi. Hasil dari penelitian ini

menunjukkan bahwa fraksi etil asetat buah jambu mete memiliki potensi yang

kecil dalam memberikan aktivitas antioksidan. Tabel VII menunjukkan hasil

pengukuran aktivitas antioksidan yang dinyatakan dalam IC25 pada fraksi etil

asetat buah jambu mete. Hasil IC25 pada fraksi etil asetat buah jambu mete yang

diperoleh sebesar 285,4 ± 17,9 µg/mL.

Tabel VIII. Hasil pengukuran absorbansi rutin

Replikasi Konsentrasi

(μg/mL)

Absorbansi

Kontrol

Negatif

Absorbansi

Sampel % IC

Persamaan regresi

linier

Replikasi

1

5,1

0,7697

0,6788 11,810

y = 0,8297x + 8,046

r = 0,9910

10,2 0,6404 16,799

15,3 0,6112 20,592

20,4 0,5675 26,270

25,5 0,5524 28,232

Replikasi

2

5,05

0,6427

0,5568 13,365

y = 0,8257x + 9,3823

r = 0,9949

10,10 0,5315 17,302

15,15 0,4944 23,075

20,20 0,4775 25,704

25,25 0,4498 30,014

Replikasi

3

5,05

0,7006

0,5940 15,216

y = 0,773x + 11,506 ;

r = 0,9952

10,10 0,5684 18,870

15,15 0,5311 24,194

20,20 0,5095 27,277

25,25 0,4867 30,531

Kontrol positif digunakan sebagai pembanding aktivitas antioksidan.

Pada penelitian ini digunakan rutin yang termasuk senyawa flavonoid sebagai

pembanding. Rutin merupakan salah satu senyawa flavonoid glikosida. Rutin


54

termasuk ke dalam golongan flavon. Metode deoksiribosa memiliki kelemahan

yaitu senyawa yang digunakan hendaknya larut air, untuk itu rutin digunakan

sebagai kontrol positif karena rutin dapat larut dalam air. Rutin juga sudah

menjadi sediaan antioksidan di pasaran sehingga terbukti memiliki potensi

sebagai antioksidan. Hasil aktivitas antioksidan rutin dapat dilihat pada Tabel IX.

Hasil IC25 pada kontrol positif rutin yang diperoleh sebesar 18,9 ± 1,2 µg/mL.

Tabel IX. Hasil uji aktivitas antioksidan rutin

IC25 (μg / mL) Rata - rata % CV

Replikasi 1 20,434

18,935 ± 1,216 6,419 Replikasi 2 18,915

Replikasi 3 17,457

Hasil antara sampel dan kontrol positif sangat jauh berbeda. Hal ini

menunjukkan bahwa sampel kurang memiliki potensi aktivitas antioksidan.

Padahal pada penelitian Adou et al. (2012) disebutkan bahwa buah segar jambu

mete memiliki senyawa flavonoid sebesar 298,6 ± 1,5 sampai 479,8 ± 2,6 mg/L

sehingga memiliki potensi sebagai antioksidan. Hal ini dapat terjadi karena pada

penelitian kali ini digunakan simplisia kering buah jambu mete. Tahap

pengeringan simplisia ini kemungkinan berperan dalam menurunkan kandungan

senyawa antioksidan yang terdapat dalam buah jambu mete. Pada tahap

pengeringan yang bertujuan untuk menginaktivasi enzim berjalan kurang baik.

Hal ini ditunjukkan dengan terjadinya peristiwa browning, karena enzim polifenol

oksidase masih mampu mengoksidasi senyawa fenolik yang terkandung dalam

buah jambu mete. Akibatnya senyawa fenol dalam sampel berkurang. Hal ini

diperkuat dengan data penelitian yang dilakukan oleh Adou et al. (2012).

Kandungan fenolik total dari buah segar jambu mete berkisar antara 1653,8 ± 2,3


55

sampai 2374,2 ± 5,4 mg ekivalen asam galat, sedangkan pada penelitian ini

kandungan fenolik total simplisia kering buah jambu mete hanya 339,3 ± 13,1 mg

ekivalen asam galat.

Penurunan kandungan senyawa fenolik karena adanya proses

browning ini berdampak pada menurunnya aktivitas antioksidan. Senyawa fenolik

yang mengalami oksidasi akan kehilangan gugus hidroksil pada cincin

aromatisnya. Seperti diketahui gugus hidroksil pada cincin aromatis senyawa

fenolik inilah yang mempunyai peran sebagai antioksidan. Hilangnya gugus

hidroksil ini menyebabkan kemampuan antioksidan dari senyawa tersebut

menurun atau hilang. Hal ini menyebabkan IC25 yang didapat pada fraksi etil

asetat ekstrak etanol buah jambu mete sebesar 285,4 ± 17,9 µg/mL.


56

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Kandungan fenolik total yang dinyatakan dalam mg ekivalen per gram asam

galat pada fraksi etil asetat buah jambu mete sebesar 339,3 ± 13,1 mg ekivalen

asam galat.

2. Aktivitas antioksidan yang dinyatakan dalam nilai IC25 pada fraksi etil asetat

buah jambu mete sebesar 285,4 ± 17,9 µg/mL.

B. Saran

1. Perlu dilakukan pengujian aktivitas antioksidan pada buah segar jambu mete.

2. Perlu dilakukan penetapan kandungan fenolik total menggunakan metode

lain, contohnya metode penetapan kandungan fenolik total menggunakan ferri

klorida.

3. Perlu dilakukan pemilahan warna buah semu jambu mete yang akan

digunakan sebagai sampel uji dalam penelitian.

4. Perlu dilakukan inaktivasi enzim polifenol oksidase dengan cara yang tepat,

contohnya dengan memberikan pemanasan pada sampel menggunakan

microwave (Reyes et al., 2013).


57

DAFTAR PUSTAKA

Adou, M., Kouassi, D.A., Tetchi, F.A., and Amani, N.G., 2012, Phenolic profile

of cashew apple juice (Anacardium occidentale L.) from Yamoussoukro

and Korhogo (Côte d’Ivoire), Journal of Applied Biosciences, 49 : 3331–

3338.

Andersen, O. M., and Markham, K. R., 2006, Flavonoid : Chemistry,

Biochemistry and Applications, CRC Press, USA, pp. 2.

Blainski, A., Lopes, G.C., and de Mello, J.C.P., 2013, Application and Analysis of

the Folin Ciocalteu Method for the Determination of the Total Phenolic

Content from Limonium brasiliense L, Molecules, 18 : 6852-6865.

Cadenas, E. and Packer, L., 2002, Handbook of Antioxidant, Second Edition,

USA, Marcell Dekker Inc, pp. 4.

Cindric, I.J., Kunstic, M., Zeiner, M., Stingeder, G., and Rusak, G., 2011, Sample

Preparation Methods for the Determination of the Antioxidative Capacity

of Apple Juices, Croat. Chem. Acta, 84 (3), 435-438.

DEP Division of Water, 2011, Energy and Environment Cabinet, DEP,

http://water.ky.gov/permitting/Pages/FAQs.aspx, diakses tanggal 16 Juni

2015.

Fernandes, F., Valenta, P., Sousa, C., Pereira, J. A., Seabra, R. M., and Andrade,

P. B., 2007, Chemical and antioxidative assessment of dietary turnip

(Brassica rapa var. rapa L.), Food Chemistry, 105, 1003–1010.

Fessenden, R. J., and Fessenden, J.S., 1982, Kimia Organik, Edisi Ketiga, Jilid 1,

Jakarta, Erlangga, pp. 240.

Fessenden, R. J., and Fessenden, J.S., 1982, Kimia Organik, Edisi Ketiga, jilid 2,

Jakarta, Erlangga, pp. 436 – 437.

Gandjar, I. G., dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar,

Yogyakarta, pp. 253 – 254.

Gupta, V. K., and Sharma, S. K., 2006, Plants as Natural Antioxidant, Natural

Product Radiance, Vol. 5(4) : 326-334.


http://water.ky.gov/permitting/Pages/FAQs.aspx

58

Halliwell, B., Gutteridge, J.M.C., and Aruoma, O.I., 1987, The Deoxyribose

Method: A Simple “Test-Tube” Assay for Determination of Rate

Constants for Reactions of Hydroxyl Radicals, ANALYTICAL

BIOCHEMISTRY (165) : 215-219.

Handa, S.S., Khanuja, S. P. S., Longo, G., and Rakesh, D.D, 2008, Extraction

Technologies for Medicinal and Aromatic Plants, International Centre For

Science And High Technology, Trieste, pp. 22 – 23.

He, Q., Luo, Y., and Chen, P., 2008, Elucidation Of The Mechanism Of

Enzymatic Browning Inhibition By Sodium Chlorite, Food Chemistry

(110):47–851.

Hemingway, R., and Peter, L., 1991, Plant Polyphenols : Synthesis, Properties,

Significance, Vol. 59, Plenum Press, New York, pp. 263-264.

Jaiswal, Y.S., Tatke, P.A., Gabhe, S.Y., and Vaidya, A., 2010, Antioxidant

Activity of Various Extracts of Leaves of Anacardium Occidentale

(Cashew), Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical

Sciences, 1(4):112-119.

Khoddami, A., Wilkes, M.A., and Roberts, T.H., 2013, Techniques for Analysis

of Plant Phenolic Compounds, Molecules, 18 : 2328-2375.

Morton, J., 1987, Fruits of Warm Climates, Mabolo, Miami, FL, pp. 239-240.

Newson, T., 2003, Stainless steel for Hygienic Applications, European

Confederation of Iron and Steel Industries, Sheffield, pp. 1-2.

Nonhebel, D.C., and Walton, J.C., 1974, Free-radical Chemistry; Structure and

Mechanism, Cambridge University Press, London, pp. 1-6.

Pallipane, K.B., and Rolle, R., 2008, Good Practice For Assuring The Post-

Harvest Quality Of Exotic Tree Fruit Crops Produced In Jamaica, FAO,

Rome, pp. 12.

Prihatman, K., 2000, Tentang Budidaya Pertanian : Jambu Mete, Kantor Deputi

Menegristek Bidang Pendayagunaan dan Pemasyarakatan Ilmu

Pengetahuan dan Teknologi, Jakarta, pp. 1-12.

Prior, R. L., Wu, X., and Schaich, K., 2005, Standardized Methods for the

Determination of Antioxidant Capacity and Phenolics in Foods and

Dietary Supplements, J. Agric. Food Chem., 53 : 4290 – 4302.


59

Reyes, Y.C., Alvarez, L.D., Baez, D.A., Esquivel, O.O., and Moreno, A.O., 2013,

Polyphenol Oxidase Inactivation by Microwave Oven and Its Effect on

Phenolic Profile of Loquat (Eriobotrya japonica) Fruit, Food and

Nutrition Sciences, 4:87-94.

Sochor, J., Zitka, O., Skutkova, H., Pavlik, D., Babula, P., Krska, B., Horna, A.,

Adam, V., Provaznik, I., and Kizek, R., 2010, Content of Phenolic

Compounds and Antioxidant Capacity in Fruits of Apricot Genotypes,

Molecules, 15(9) : 6285-6305.

Steenis, C. G. G. J. V., 1981, Flora Untuk Sekolah di Indonesia, Pradnya

Paramita, Jakarta.

Sweet, D. V., 1997, Registry Of Toxic Effects Of Chemical Substances (Rtecs®)

Comprehensive Guide To The Rtecs®, U.S. Department of Health and

Human Services, Ohio, pp. 21-22.

Thomas, A.N.S., 2012, Tanaman Obat Tradisional I, Kanisius, Yogyakarta, pp.

96-97.

Valko, M., Leibfritz, D., Moncol, J., Cronin, M. T. D., Mazur, and M., Telser, J.,

2006, Free Radicals and Antioxidants in Normal Physiological Functions

and Human Disease, The International Journal of Biochemistry & Cell

Biology, 39 : 44–84.

Vermerris, W., and Nicholson, R., 2006, Phenolic Compound Biochemistry,

Springer, USA, pp. 1-2.

Wang, L,. and Weller, C.L., 2006, Recent Advances In Extraction Of

Nutraceuticals From Plants, Trends in Food Science & Technology

(17):300–312.

Watson, D. G., 2010, Analisis Farmasi : Buku Ajar Untuk Mahasiswa Farmasi

Dan Praktisi Kimia Farmasi, Edisi 2, EGC, Jakarta, pp. 105.

Wells, M. J. M., 2003, Principles Of Extraction And The Extraction Of

Semivolatile Organics From Liquids, John Wiley & Sons Inc, pp. 57.

Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta,

pp. 78 – 80.


60

LAMPIRAN


61

Lampiran 1. Surat determinasi tanaman


62

Lampiran 2. Gambar tanaman jambu mete di desa Karangtengah, Imogiri,

Bantul


63


64

Lampiran 3. Perhitungan rendemen ekstrak dan fraksi

a. Ekstrak etanol buah jambu mete

Replikasi 1 (gram) Replikasi 2 (gram) Replikasi 3 (gram)

Bobot simplisia

yang digunakan 102,25 103,63 100,89

Bobot cawan

kosong 51,2046 51,5231 61,3214

Bobot cawan +

ekstrak 83,9803 88,7676 95,6696

Bobot ekstrak 32,7757 37,2445 34,3482

b. Fraksi etil asetat buah jambu mete

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Bobot simplisia

yang digunakan 102,25 103,63 100,89

Bobot cawan

kosong 41,1872 41,2963 40,8761

Bobot cawan +

fraksi etil asetat 41,7741 41,9494 41,4911

Bobot fraksi etil

asetat 0,5869 0,6531 0,6150


65

Lampiran 4. Data penimbangan untuk penetapan kandungan fenolik total

a. Penimbangan asam galat

1. Asam galat untuk operating time


Bobot kertas 0,2669 0,2675 0,2697

Bobot kertas + zat 0,2773 0,2776 0,2799

Bobot kertas + sisa 0,2672 0,2675 0,2699

Bobot zat 0,0101 0,0101 0,0100

2. Asam galat untuk lamda maksimum

Bobot kertas 0,2487 g

Bobot kertas + zat 0,2591 g

Bobot kertas + sisa 0,2488 g

Bobot zat 0,0103 g

3. Asam galat untuk seri konsentrasi kurva baku


Bobot kertas 0,2501 0,2430 0,2497

Bobot kertas + zat 0,2604 0,2536 0,2599

Bobot kertas + sisa 0,2503 0,2434 0,2498

Bobot zat 0,0101 0,0102 0,0101

b. Penimbangan fraksi etil asetat

Replikasi 1

(gram)

Replikasi 2

(gram)

Replikasi 3

(gram)

Bobot gelas Bekker

kosong

63,0473 61,2744 61,8427

Bobot gelas Bekker

+ fraksi

63,0574 61,2845 61,8529

Bobot fraksi 0,0101 0,0101 0,0102


66

Lampiran 5. Data perhitungan konsentrasi asam galat dan fraksi etil asetat

untuk penetapan kandungan fenolik total

a. Contoh perhitungan konsentrasi asam galat

Bobot asam galat replikasi 1 = 0,0101 g = 10,1 mg

⁄

Perhitungan seri konsentrasi replikasi 1

Seri 1 :

V1. C1 = V2. C2

0,4 mL . 1,01 = 10 mL . C2

C2 = 0,0404 mg/mL = 40,4 μg/ mL

Seri 2 :

V1. C1 = V2. C2

0,5 mL . 1,01 = 10 mL . C2

C2 = 0,0505 mg/mL = 50,5 μg / mL

Sei 3 :

V1. C1 = V2. C2

0,6 mL . 1,01 = 10 mL . C2

C2 = 0,0606 mg/mL = 60,6 μg / mL

Seri 4 :

V1. C1 = V2. C2

0,7 mL . 1,01 = 10 mL . C2

C2 = 0,0707 mg/mL = 70,7 μg / mL


67

Seri 5 :

V1. C1 = V2. C2

0,8 mL . 1,01 = 10 mL . C2

C2 = 0,0808 mg/mL = 80,8 μg / mL

Replikasi 2 Replikasi 3

Seri 1 40,8 μg / mL 40,4 μg / mL

Seri 2 51,0 μg / mL 50,5 μg / mL

Seri 3 61,2 μg / mL 60,6 μg / mL

Seri 4 71,4 μg / mL 70,7 μg / mL

Seri 5 81,6 μg / mL 80,8 μg / mL

b. Contoh perhitungan konsentrasi fraksi etil asetat

Bobot fraksi etil asetat replikasi 1 = 0,0101 gram = 10,1 mg

⁄

Pengenceran fraksi etil asetat replikasi 1

V1 . C1 = V2 . C2

2 mL . 1,01 = 10 . C2

C2 = 0,202 mg/mL = 202 μg / mL


Konsentrasi fraksi 202 μg / mL 204 μg / mL


68

Lampiran 6. Hasil optimasi operating time untuk penetapan kandungan

fenolik total

a. Replikasi 1

Menit Ke - Absorbansi pada panjang gelombang 750 nm

40 μg / mL 60 μg / mL 80 μg / mL

5 0,2631 0,4249 0,5785

10 0,2838 0,4982 0,6763

15 0,2957 0,5254 0,7068

20 0,3025 0,5337 0,7395

25 0,3075 0,5389 0,7469

30 0,3090 0,5399 0,7513

35 0,3165 0,5381 0,7507

40 0,3177 0,5389 0,7511

45 0,3198 0,5389 0,7505

50 0,3202 0,5388 0,7487

55 0,3204 0,5370 0,7451

60 0,3204 0,5345 0,7410

Pada replikasi 1, operating time yang didapat 35 - 40 menit

b. Replikasi 2


40 μg / mL 60 μg / mL 80 μg / mL

5 0,2915 0,3989 0,5486

10 0,3141 0,4554 0,5791

15 0,3280 0,4766 0,6035

20 0,3368 0,4865 0,6167

25 0,3427 0,4927 0,6271

30 0,3472 0,4958 0,6332

35 0,3496 0,4985 0,6371

40 0,3519 0,4999 0,6399

45 0,3533 0,4995 0,6415

50 0,3542 0,4999 0,6431

55 0,3550 0,4991 0,6440

60 0,3553 0,4972 0,6433



69

c. Replikasi 3


40 μg / mL 60 μg / mL 80 μg / mL

5 0,2820 0,4226 0,5562

10 0,3088 0,4501 0,5948

15 0,3231 0,4656 0,6191

20 0,3317 0,4767 0,6332

25 0,3379 0,4839 0,6422

30 0,3429 0,4894 0,6488

35 0,3457 0,4927 0,6537

40 0,3478 0,4954 0,6569

45 0,3503 0,4972 0,6591

50 0,3507 0,4982 0,6610

55 0,3513 0,4990 0,6620

60 0,3521 0,4996 0,6630



70

Lampiran 7. Optimasi panjang gelombang maksimum untuk penetapan

kandungan fenolik total

a. Konsentrasi 40


71

b. Konsentrasi 60


72

c. Konsentrasi 80


73

Lampiran 8. Hasil pengukuran kurva baku untuk penetapan kandungan

fenolik total.

a. Replikasi 1

Seri Konsentrasi Absorbansi Persamaan kurva baku

1 40,4 μg / mL 0,3108

y = 0,0084x – 0,0299

r = 0,9988

2 50,5 μg / mL 0,3931

3 60,6 μg / mL 0,4652

4 70,7 μg / mL 0,5665

5 80,8 μg / mL 0,6459

b. Replikasi 2


1 40,8 μg / mL 0,3674

y = 0,007x + 0,0821

r = 0,9989

2 51,0 μg / mL 0,4404

3 61,2 μg / mL 0,5026

4 71,4 μg / mL 0,5731

5 81,6 μg / mL 0,6559

c. Replikasi 3


1 40,4 μg / mL 0,3093

y = 0,0069x + 0,0335

r = 0,9994

2 50,5 μg / mL 0,3889

3 60,6 μg / mL 0,4553

4 70,7 μg / mL 0,5253

5 80,8 μg / mL 0,5916


74

Lampiran 9. Perhitungan kandungan fenolik total fraksi etil asetat

Konsentrasi Absorbansi Kandungan

fenolik total

Rata -

rata

%

CV

Replikasi 1 202 μg/mL 0,4808 320,921 339,288

± 13,083

3,856

% Replikasi 2 202 μg/mL 0,5219 350,409

Replikasi 3 204 μg/mL 0,5165 346,535

Contoh perhitungan kandungan fenolik total replikasi 1 :

y = 0,0069x + 0,0335

0,4808 = 0,0069x + 0,0335

x = 64,83 μg / mL = 0,06483 mg / mL

Bobot fraksi = 0,0101 gram

Maka kandungan fenolik total dalam sampel replikasi 1 sebesar 320,921 mg

ekivalen per gram asam galat.


75

Lampiran 10. Perhitungan konsentrasi bahan untuk metode deoksiribosa

a. Ferri Klorida 1 mM

BM = 270,2957

Bobot yang ditimbang = 0,0135 g

V1 . C1 = V2 . C2

2 . 0,00495 = 10 . C2

C2 = 0,000999 M = 0,999 mM

b. EDTA 1 mM

BM = 292,24


V1 . C1 = V2 . C2

2 . 0,004996 = 10 . C2

C2 = 0,000999 M = 0,999 mM

c. Vitamin C 1 mM

BM = 176,12


V1 . C1 = V2 . C2

1 . 0,009993 = 10 . C2

C2 = 0,000999 M = 0,999 mM

d. Deoksiribosa 2,5 mM

BM = 134,13


V1 . C1 = V2 . C2

4 . 0,00495 = 25 . C2

C2 = 0,002493 M = 2,493 mM


76

e. NaH2PO4 20 mM

BM = 141,96


f. KH2PO4 20 mM

BM = 136,09


g. TCA 5%


⁄

h. TBA 1%


⁄


77

Lampiran 11. Penimbangan dan perhitungan konsetrasi fraksi etil asetat

untuk pengukuran aktivitas antioksidan

a. Penimbangan fraksi etil asetat

Replikasi 1

(gram)

Replikasi 2

(gram)

Replikasi 3

(gram)

Bobot gelas

Bekker kosong 61,0775 62,1720 61,0797

Bobot gelas

Bekker + fraksi 61,1279 62,2223 61,1298

Bobot fraksi 0,0504 0,0503 0,0501

b. Contoh perhitungan konsentrasi fraksi etil asetat

Bobot fraksi etil asetat replikasi 1 = 0,0504 g = 50,4 mg

⁄


Seri 1 :

V1. C1 = V2. C2

1 mL . 1,008 = 10 mL . C2

C2 = 0,1008 mg/mL = 100,8 μg/ mL

Seri 2 :

V1. C1 = V2. C2

2 mL . 1,008 = 10 mL . C2

C2 = 0,2016 mg/mL = 201,6 μg / mL

Sei 3 :

V1. C1 = V2. C2

3 mL . 1,008 = 10 mL . C2

C2 = 0,3024 mg/mL = 302,4 μg / mL


78

Seri 4 :

V1. C1 = V2. C2

4 mL . 1,008 = 10 mL . C2

C2 = 0,4032 mg/mL = 403,2 μg / mL

Seri 5 :

V1. C1 = V2. C2

5 mL . 1,008 = 10 mL . C2

C2 = 0,5040 mg/mL = 504,0 μg / mL


Seri 1 100,6 μg / mL 100,2 μg / mL

Seri 2 201,2 μg / mL 200,4 μg / mL

Seri 3 301,8 μg / mL 300,6 μg / mL

Seri 4 402,4 μg / mL 400,8 μg / mL

Seri 5 503,0 μg / mL 501,0 μg / mL


79

Lampiran 12. Penimbangan dan perhitungan konsentrasi rutin untuk

pengukuran aktivitas antioksidan

a. Penimbangan rutin


Bobot kertas 0,2653 0,2573 0,2504

Bobot kertas + zat 0,2755 0,2674 0,2607

Bobot kertas +

sisa

0,2653 0,2573 0,2506

Bobot zat 0,0102 0,0101 0,0101

b. Contoh perhitungan konsentrasi rutin

Bobot rutin replikasi 1 = 0,0102 gram = 10,2 mg

⁄



80

Seri 1 :

V1. C1 = V2. C2

0,5 mL . 102 μg/ mL = 10 mL . C2

C2 = 5,1 μg/ mL

Seri 2 :

V1. C1 = V2. C2

1 mL . 102 μg/ mL = 10 mL . C2

C2 = 10,2 μg / mL

Sei 3 :

V1. C1 = V2. C2

1,5 mL . 102 μg/ mL = 10 mL . C2

C2 = 15,3 μg / mL

Seri 4 :

V1. C1 = V2. C2

2 mL . 102 μg/ mL = 10 mL . C2

C2 = 20,4 μg / mL

Seri 5 :

V1. C1 = V2. C2

2,5 mL . 102 μg/ mL = 10 mL . C2

C2 = 25,5 μg / mL


Seri 1 5,05 μg / mL 5,05 μg / mL

Seri 2 10,10 μg / mL 10,10 μg / mL

Seri 3 15,15 μg / mL 15,15 μg / mL

Seri 4 20,20 μg / mL 20,20 μg / mL

Seri 5 25,25 μg / mL 25,25 μg / mL


81

Lampiran 13. Optimasi operating time metode deoksiribosa

Hasil pengukuran absorbansi metode deoksiribosa

Operating time yang didapat 20 menit.

Menit ke - Absorbansi

0 0,6267

5 0,6278

10 0,6298

15 0,6295

20 0,6313

25 0,6310

30 0,6318

35 0,6327

40 0,6344

45 0,6327

50 0,6339

55 0,6353

60 0,6360


82

Lampiran 14. Optimasi panjang gelombang maksimum metode deoksiribosa

a. Jumlah larutan deoksiribosa yang ditambahkan 200 μL.


83

b. Jumlah larutan deoksiribosa yang ditambahkan 300 μL


84

c. Jumlah larutan deoksiribosa yang ditambahkan 400 μL


85


antioksidan rutin

a. Hasil pengukuran absorbansi rutin replikasi 1

Seri Konsentrasi

(μg / mL)

Absorbansi

kontrol negatif

Absorbansi

sampel % IC

1 5,1

0,7697

0,6788 11,810

2 10,2 0,6404 16,799

3 15,3 0,6112 20,592

4 20,4 0,5675 26,270

5 25,5 0,5524 28,232

Persamaan regresi y = 0,8297x + 8,046 ; r = 0,9919

Nilai IC25 dimana y sama dengan 25

25 = 0,8297x + 8,046

x = 20,434 μg / mL

b. Hasil pengukuran absorbansi rutin replikasi 2

Seri Konsentrasi

(μg / mL)

Absorbansi

kontrol negatif

Absorbansi

sampel % IC

1 5,05

0,6427

0,5568 13,365

2 10,10 0,5315 17,302

3 15,15 0,4944 23,075

4 20,20 0,4775 25,704

5 25,25 0,4498 30,014



25 = 0,8257x + 9,3823

x = 18,915 μg / mL


86

c. Hasil pengukuran absorbansi rutin replikasi 3

Seri Konsentrasi

(μg / mL)

Absorbansi

kontrol negatif

Absorbansi

sampel % IC

1 5,05

0,7006

0,5940 15,216

2 10,10 0,5684 18,870

3 15,15 0,5311 24,194

4 20,20 0,5095 27,277

5 25,25 0,4867 30,531



25 = 0,773x + 11,506

x = 17,457 μg / mL

d. IC25 rutin


Replikasi 1 20,434

18,935 ± 1,216 6,419 Replikasi 2 18,915

Replikasi 3 17,457


87


antioksidan fraksi etil asetat

a. Hasil pengukuran absorbansi fraksi etil asetat replikasi 1

Seri Konsentrasi

(μg / mL)

Absorbansi

kontrol negatif

Absorbansi

sampel % IC

1 100,8

0,6378

0,5289 2,618

2 201,6 0,5011 13,813

3 302,4 0,4618 26,560

4 403,2 0,4257 33,490

5 504,0 0,4012 49,561

Persamaan regresi y = 0,1127x – 8,8601 ; r = 0,9946


25 = 0,1127x – 8,8601

x = 300,445 μg / mL

b. Hasil pengukuran absorbansi fraksi etil asetat replikasi 2

Seri Konsentrasi

(μg / mL)

Absorbansi

kontrol negatif

Absorbansi

sampel % IC

1 100,6

0,4524

0,3744 17,241

2 201,2 0,3553 21,463

3 301,8 0,3309 26,857

4 402,4 0,3013 33,400

5 503,0 0,2874 36,472



25 = 0,0501x + 11,967

x = 260,139 μg / mL


88

c. Hasil pengukuran absorbansi fraksi etil asetat replikasi 3

Seri Konsentrasi

(μg / mL)

Absorbansi

kontrol negatif

Absorbansi

sampel % IC

1 100,2

0,7128

0,6112 14,254

2 200,4 0,5858 17,817

3 300,6 0,5444 23,625

4 400,8 0,4808 32,548

5 501,0 0,4403 38,230



25 = 0,0626x + 6,4899

x = 295,689 μg / mL

d. IC25 fraksi etil asetat


Replikasi 1 300,445 285,424 ±

17,984 6,301 Replikasi 2 260,139

Replikasi 3 295,689


89

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas

Antioksidan Menggunakan Metode Deoksiribosa Dan

Penetapan Kandungan Fenolik Total Pada Fraksi Etil

Asetat Ekstrak Etanolik Buah Jambu Mete (Anacardium

Occidentale L.)” memiliki nama lengkap Yoanes

Kapistran Ervan Prasetio Kusumanto. Dilahirkan di

Yogyakarta pada tanggal 23 Oktober 1992 dari

pasangan Bapak Yustinus Gan Kong Liok dan Ibu

Veronica Jeniarti. Penulis merupakan anak ketiga dari

empat bersaudara. Penulis telah menyelesaikan pendidikan di TK Tarakanita

Bumijo Yogyakarta pada tahun 1997 hingga 1999 lalu melanjutkan pendidikan di

SD Tarakanita Bumijo pada tahun 1999 hingga 2005. Penulis menempuh sekolah

menengah di SMP Stella Duce I Yogyakarta pada tahun 2005 hingga 2008

kemudian melanjukan sekolah tingkat atas di SMA Kolese De Britto Yogyakarta

pada tahun 2008 hingga 2011. Penulis melanjutkan pendidikan perguruan tinggi

di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2011

hingga 2015. Selama menjadi mahasiswa di Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma penulis cukup aktif dalam kegiatan kemahasiswaaan dan kepanitiaan.


Documents

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI - core.ac.uk · diperoleh sebanding dengan jumlah senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel. Berdasarkan hasil penelitian ini, fraksi etil