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8/3/2019 Metodos de Diagnostico Infecciones Virales 2012
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METODOS DE DIAGNOSTICODE LAS
AFECCIONES VIRALES
Prof. Aurico Sousa Fonseca
Ctedra de Microbiologa e Inmunologa FCV-UCV
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CUANDO?
Pronostico y tratamiento en clnica
Certificacin de zona libre
Aplicacin de tecnologa: Inseminacin Artificial
Transplante de embriones
Transplantes de tejidos, etc.
Programas de erradicacin
Control de zoonosis
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ESPCIMEN
Tejido, liquido o secrecin deinters
Utilizar: Hisopados, jeringas oenvases estriles
Sangre para serologa
En ocasiones, medios de transporteespecial
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ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE
Envo inmediato
Protegido
Refrigerado (4C) Internacional: Hielo seco y bien
protegido
Historia clnica completa
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PROCESAMIENTO INICIAL
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LOS MTODOS DEBEN SER:
Rpidos
Simples
Sensibles
Especficos Bajos costo
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MTODOS DE DIAGNSTICOS
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DETECCIN DEL VIRUS,SUS CONSTITUYENTES OSU CIDO NUCLEICO
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AISLAMIENTO Medios de cultivo:
Huevos embrionados
Animales de laboratorio
Cultivo de tejidos
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Cultivos celulares Efecto citoptico Deteccin por IF
y otras pruebas
Animales de laboratorio
Enfermedad
ParlisisEncefalitis
Muerte
Otros efectos
Identificacin
por pruebasserolgicas
con antisueros
especficos
Huevos embrionados
Deteccin por Microscopa
Electrnica y/o otras
Pruebas serolgicas
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HUEVOS EMBRIONADOS
Embriones 5-14 das
Muy utilizados en virus aviares
Varias vas de inoculacin
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HUEVOS EMBRIONADOSInoculacin corioalantoidea
Inoculacin Amnitica
Inoculacin Saco Vitelino
Inoculacin Alantoidea
MembranaCorioalantoidea
Saco Vitelino
CavidadAlantoidea
Albumina
CscaraCavidad Amnitica
Saco de aireo
Membrana de la Cscara
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Animales
Poco tiles en diagnostico
Manejo costoso y engorroso
Se utilizan en investigacin,produccin de antisueros yanticuerpos monoclonales
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Cultivo de Tejidos
Ideales para:
Aislamiento viral
Desarrollo de vacunas
Estudio de replicacin y morfologa
Se emplean desde 1949
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Cultivo de Tejidos
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EVIDENCIA DEL CRECIMIENTO VIRAL
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Deteccin del Virus
Microscopia Electrnica
Tcnicas Inmunolgicas
Tcnicas de deteccin del genomaviral
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Microscopia Electrnica
Mtodo obvio de identificacin
Reconoce morfologa tpica
Baja sensibilidad
107 viriones por ml
Solo laboratorios de referencias yde investigacin.
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Deteccin del Genoma
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Hibridacin
Se basa en el proceso natural deapareamiento de basescomplementarias
Se forman estructuras de doblehebra de gran estabilidad quepueden ser: Hbridos homodplex
ADN-ADN o ARN-ARN
Hbridos heterodplex ADN-ARN
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Amplificacin del Genoma Viral
Mtodo: Reaccin en Cadena de laPolimerasa (PCR)
Objetivo: Amplificar un gen ofragmentos de ADN presente en unamuestra sin purificacin previa delespcimen.
Permite: Detectar virus donde antes era imposible Altamente sensible y especifico. Utiliza cantidades mnimas de muestras Requiere porciones mnimas de genoma
(< 100pb)
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PCR
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Serologa Viral
Deteccin del Virus a travs de laRespuesta Inmune Determinacin indirecta de infeccin
viral por determinacin de presencia de
anticuerpos Tcnicas empleadas:
Elisa Western inmunoblot
Neutralizacin viral Hemaglutinacin e inhibicin de la
hemaglutinacin Inmunoflorescencia